水稻类囊体膜ATP酶性质的研究

水稻类囊体膜上存在着CF_1-CF_o蛋白复合体.在光合磷酸化时,偶联因子CF_1能催化ATP的形成;在一定的条件下它又显示出了ATP酶水解活性.CF_1-CF_o蛋白复合体在植物能量代谢中起着十分重要的作用.CF_o因子嵌入类囊体膜内,起着质子通道的作用,参与质子传递,而CF_1突出在类囊体膜外,具有水解ATP的功能.我们从水稻珍汕97B叶片中分离出类囊体膜,着重研究了CF_1-ATP酶的生物化学性质. 水稻类囊体膜用差速离心法制备,取500克新鲜的水稻叶片,加入2000ml pH7.8的缓冲液(内含0.4M蔗糖、0.01MKCl和0.05M Tris-HCl),在4℃时,用捣碎机充分捣碎,然后用尼龙布过滤收集滤液,经600g离心10分钟,上清液再经6000g离心5分     

花生种子活力、ATPase及H~ 分泌初探

线粒体结合ATPase及质膜和液泡膜结合ATPase活性随花生种子吸胀的起始逐渐增加,酶活性与种子活力有正相关性。以萌发一周的花生下胚轴为实验材料,线粒体ATPase,质膜ATPase和液泡膜ATPase的反应最适pH均为9.在pH 6～10范围内随pH的升高H~ 分泌增多。膜ATP酶为二环已烷亚胺抑制,而为KCl激活;NaN_3特异地抑制线粒体ATP酶,而NaVO_3专一地抑制质膜ATP酶,但两者对液泡膜ATP酶均无效。Mg~( )、K~ 激活ATPase,也刺激H~ 分泌。质膜ATPase抑制剂NaVO_3对H~ 9分泌作用不大,而线粒体ATPase抑制剂NaN_3及解偶联剂DNP均显著抑制H~ 分泌。CoⅠ刺激H~ 分泌而C_oⅡ抑制H~ 分泌。似乎线粒体ATP产量对H~ 分泌更重要。     

健心Ⅰ号对鼠肝匀浆过氧化脂质生成和硒谷胱甘肽过氧化酶活性的影响

1引言健心Ⅰ号是一种中药复方制剂,经研究证明,它对超氧自由基(O(?))有很强的清除能力。近年来,一些文献指出,自由基引起的脂质过氧化反应与心血管疾病的病理过程有关。本文研究了健心Ⅰ号对鼠肝匀浆过氧化脂质生成和硒谷胱甘肽过氧化酶活性的影响,探讨健心Ⅰ号的抗氧化机理。2材料与方法S、D大白鼠(体重300克左右)由上海药物检验所提供。断头剖腹,取出肝,用磷酸缓冲液洗去血污,用滤纸吸干称重,以每克鼠肝加3.3ml组织匀浆液(0.15MKCl)在玻璃匀浆器中匀浆,离心10分钟(1000转/分),弃去沉淀,取上清液。硫代巴比妥酸(简称TBA)上海试剂二厂产品,1,1,3,3-四甲氧基丙烷、Fluka公司产品。其余试剂均为国产分析纯。仪器为日立M850型荧光分光光度计和国产721分光光度计。     

葡萄糖浓度波动对人肝L02细胞损伤的实验研究

研究了葡萄糖浓度波动对于体外培养的人肝实质L02细胞的影响以及可能的机制.利用人肝实质细胞株L02进行传代培养.实验共分为4组:正常组(N)、持续高糖组(HG)、波动组(GF)和渗透压对照组(OP).各组细胞培养72 h后,测定培养液中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)活力,肝细胞内糖原含量,谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、超氧化酶歧化酶(SOD)、Na~+K~+-ATP酶和Ca~(2+)Mg~(2+)-ATP酶的活力,胞内游离钙离子([Ca~(2+)]_i)浓度以及细胞膜的流动性.高糖组和波动组细胞培养液中ALT,AST和LDH活力上升,细胞内GSH,SOD,Na~+K~+ATP酶和Ca~(2+)Mg~(2+)-ATP酶活性均下降,MDA和糖原含量上升,细胞膜流动性下降;高糖组和波动组与正常组比较均差异显著(p0.001),波动组较高糖组也有显著差异(p0.01).葡萄糖浓度波动能够导致细胞膜通透性的改变和细胞内酶的严重泄漏,同时对肝细胞有明显的氧化损伤和毒性作用,而且比单纯的高糖对肝细胞的损害更为明显和严重.     

自絮凝酵母细胞膜脂肪酸影响乙醇激活 ATP 酶

首次揭示酵母菌细胞膜磷脂脂肪酸组成对影响质膜ATP酶对乙醇刺激的响应.实验结果表明,细胞膜磷脂脂肪酸组成特点,对生长于未添加乙醇条件下的自絮凝酵母的质膜ATP酶活性没有影响,但却明显影响生长于添加乙醇(体积分数为0.01～0.10)的菌体质膜ATP酶对乙醇激活的敏感性.预培养于添加0.6 mmol·L-1棕榈酸、亚油酸或亚麻酸条件下,菌体质膜ATP酶的最大激活水平分别为各自酶的基态水平(未激活)的3.6,1.5和1.2倍,而对照组(预培养于未添加脂肪酸条件下的菌体)的相应值为2.3倍.酶激活后,米氏常数Km、最适pH和对质膜ATP酶特异性抑制剂钒酸钠的敏感性等性质不变,但最大反应速度Vmax明显增加.实验结果还表明,细胞膜磷脂脂肪酸组成特点对提高菌体的耐乙醇能力越有利,其质膜ATP酶被乙醇激活的幅度越大,说明菌体耐乙醇能力的提高,与其质膜ATP酶对乙醇激活的敏感性的增加密切相关.     

自然衰老动物模型探讨 Ⅱ、老龄家兔体内自由基、脂褐素及血流变指标观察

<正> 我们在第一篇文章中报导了老龄家兔免疫指标测定结果。但是,做为衰老指标,免疫指标只是一部分。本文报导老龄家兔体内自由基等指标观察结果。材料与方法一、试验动物三个月大耳白家兔(青年组),四年右右大耳白家兔(老龄组)。二、自由基测定分别取家兔大脑、胸腺、脾脏、肝脏适量,置玻璃匀浆器中充分磨碎,过滤后加生理盐水至9ml,即为待测浆液。取待测浆液3ml,加入鲁米诺增敏剂3ml,用RM—2型晶溶发光测定仪测定发光强度(脉冲数/分)。三、脂褐素测定按Sohal R.S.的方法,取家兔脑组织适量,置玻璃匀浆器中,加入2ml蒸馏水,磨碎,加入氯仿—甲醇液7ml,充分振荡,离心,取氯仿层。用荧光光度计(HI-     

银杏内酯B(BN52021)对家兔脑缺血再灌注的抗氧化作用

目的:探讨银杏内酯B(BN52021)在抗氧化方面对脑缺血再灌注保护作用.方法:家兔麻醉后结扎双侧颈总动脉,10分钟后解开丝线再灌注60分钟.反复两次,3小时后取血测血清中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)的含量,断头处死家兔,测脑组织中Na ,K -ATP酶的活力.结果:银杏内酯B能显著降低模型家兔的MDA含量、增加SOD活力和NO的含量,增加脑匀浆中Na ,K -ATP酶的活力.结论:证明银杏内酯B对家兔脑缺血灌注有抗氧化作用,能保护缺血脑组织.     

蓖麻毒蛋白提取过程条件优化

以蓖麻毒蛋白为研究对象,对其提取过程进行优化.采用硫酸铵沉淀,聚乙二醇包埋透析,分子筛层析和亲和层析等处理,从去壳蓖麻籽中分离纯化得到蓖麻毒蛋白,结果得到最优的体系为,高速冰冻离心过滤,聚乙二醇包埋透析,100ml缓冲液A冰浴匀浆,并在SDS--聚丙烯酰胺凝胶电泳中呈32kDa和34kDa两条蛋白带,证明蓖麻毒蛋白已被纯化均一.     

文昌鱼感光细胞中环核苷酸磷酸二酯酶的亚细胞定位

本文用电镜细胞化学的方法,在文昌鱼感光细胞中定位环核苷酸磷酸二酯酶(cNt-PDE).根据反应产物的沉淀颗粒分布特征,很明显该酶主要分布在微绒毛膜、管状结构膜和线粒体膜上;少量散布于细胞质的液相中.用无底物、无碱性磷酸酶或再加抑制剂的反应液作对照,证明所用的方法有特异性.愈远离微绒毛区,酶的反应产物愈少.在靠近微绒毛的色素细胞膜上也有串珠状的沉淀颗粒分布.感光细胞的突触末端也有较强的阳性反应.此外,还讨论了cNt-PDE亚细胞定位和意义.     

除草剂丁草胺对蟾蜍肝脏形态学和组织学的毒性作用

观察除草剂丁草胺对蟾蜍肝脏形态学和组织学的影响,探讨除草剂丁草胺对蟾蜍肝脏的毒性作用。将中华大蟾蜍随机分为对照组、稻田组、稻田5倍组和稻田10倍组,染毒剂量分别为5、10、30 ml/L,每组15只,分别放入盛有经曝气的自来水和试验用液的实验桶内,溶液的量为浸没1/2蟾蜍体积,分别在染毒后3、6、9 d,从各组随机取蟾蜍5只,解剖观察其肝脏的形态,测量肝系数;应用石蜡切片,HE染色,观察除草剂丁草胺对蟾蜍肝脏组织结构的影响。结果:除草剂丁草胺的染毒时间和浓度均可影响蟾蜍肝脏的组织结构。随着除草剂丁草胺浓度的增加和染毒时间的递增,肝系数增大,肝脏出现了不同程度的坏死和溶解。结论:除草剂丁草胺能改变蟾蜍肝脏的组织结构和功能,提示使用除草剂应注意环境保护。     

高效液相色谱法同时测定大鼠心肌组织中磷酸肌酸和5种磷酸腺苷的含量

建立了高效液相色谱(HPLC)同时测定大鼠心肌组织中磷酸肌酸和三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)、单磷酸腺苷(AMP)、辅酶I、环磷腺苷5种磷酸腺苷含量的方法,为相关药效研究提供条件.将大鼠心肌组织加入预冷的高氯酸溶液中,在冰浴条件下匀浆,低温离心取上清液,调节pH值到中性,再低温离心取上清液存于-20℃冰箱,测定前再离心6 min后进样2μL作HPLC分析.使用Ultimate AQ-C18色谱柱,流动相为甲醇-磷酸盐缓冲液(10mmol/L,pH 6.2)梯度洗脱.检测波长为210nm.柱温为15℃.评价了方法的精密度、线性和回收率.将该方法用于实际样品的测定,结果显示该方法测定结果可靠,操作简便.     

芦荟叶皮β-葡萄糖苷酶的分离纯化及酶学性质

库拉索芦荟叶皮经匀浆、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液抽提,硫酸铵分级沉淀,DEAE-Sepharose fast flow层析和Superdex-200prep grade层析,获得电泳纯的β-葡萄糖苷酶(β-Glucosidase,BGL).纯化结果是β-葡萄糖苷酶比活力为98.48U/mg,纯化倍数为328.27倍,酶活性回收率为9.87%,全酶分子质量约为69.3kD,亚基分子质量约为69.7kD.酶学性质研究表明:β-葡萄糖苷酶的最适反应温度和最适反应pH值分别为40℃和5.0;在20~30℃及pH4.0~8.0范围内稳定性较好;最适条件下,以pNPG为底物的K_m值为2.21mmol/L,V_(max)为1.381μmol/(min·L).乙醇,抗坏血酸,Mn~(2+),K~+对该酶活性具有激活作用;SDS,Cu~(2+)对该酶活性具有强烈抑制作用;异丙醇,EDTA,尿素,Mg~(2+),Li+对该酶活性影响较小;甲醇对该酶有双重作用.     

大鼠肝细胞膜胰岛素受体与胰岛素的相互作用

采用125I-胰岛素标记法研究大鼠肝细胞膜中胰岛素受体与胰岛素的结合性质,用31P-核磁共振法(31P-NMR)研究大鼠肝细胞膜中胰岛素刺激下的胰岛素受体体外自磷酸化,实验结果表明大鼠肝细胞膜胰岛素受体与胰岛素结合的最佳酸度大约为pH=7.5,并且表明大鼠肝细胞膜上的胰岛素受体为高亲和、低容量和低亲和、高容量两型受体.非放射性的31P-NMR波谱法检测到胰岛素刺激下的大鼠肝细胞膜胰岛素受体的体外自磷酸说明所提取纯化的胰岛素受体具有生物活性.     

泥炭对磷矿有效磷测定的影响

磷肥中有效磷的测定方法,根据国内外文献报导,认为采用2%柠檬酸作抽提剂,用钼酸喹啉重量法测定其有效磷量,能反映作物所能吸收的磷.测定结果比较满意,重现性也较好.被采用为我国工业部部颁标准方法①.但应用此法测定腐植酸磷肥中有效磷时,据一些文献报导③、③,发现泥炭成分,泥炭与磷矿粉的混合配比不同时,测定有效磷的量有时会低于磷矿粉有效磷的量,即一般说腐磷中磷的转化率出现负值的情况.有人认为这种反常现象主要是由于泥炭中杂质Ca~(++)、Mg~(++)、Fe~(+++)、Al~(+++)等离子及其它一些因素对腐磷有效磷转化率的影响.一、2%柠檬酸抽提腐磷中有效磷的试验试验方法:取各种泥炭以不同重量和1克(称准至0.0001克)磷矿粉(简称不同配比)于250毫升锥瓶中混匀,准确加入2%柠檬酸溶液100毫升,塞紧,在一定温度     

高分子量尿激酶的放射免疫测定

本文介绍了高分子量尿激酶放射免疫分析方法的具体程序以及人尿中高分子量尿激酶的测量结果。标记采用Hunter等改进的氯胺T氧化法。碘化前,高分子量尿激酶用二异丙基氟磷酸失活,以避免生物机体中干扰物质带来的不良影响。失活的高分子量尿激酶与lmci~(125)Ⅰ反应2分钟,反应液全部上Sephadex G—50柱层析,经鉴定,标记率为35—40％。高分子量尿激酶放射免疫测量程序为:反应管中加入一定体积的缓冲液,30μl~(125)Ⅰ标记的高分子量尿激酶(约2×10~4cpm),标准品或待测样品,反应抗体。总体积0.3ml,摇匀,4℃保温24小时,然后力口入20μlSPA菌体试剂,混匀后于37℃保温0.5小时,3500rpm离心10分钟,测量沉淀放射性。用本法测定5例正常成人尿中高分子量尿激酶值为14.6±6.1iu/ml,灵敏度为0.8iu/ml尿。     

硫代乙酰胺在半微量定性分析中的应用 第Ⅱ报 硫化铵组中用TAA分离锌离子的改进法

本文报告了用TAA沉淀Zn~(2 )的适宜条件:〔Zn~(2 )〕=2毫克/0.2毫升,pH=6,13%TAA 4滴,缓冲液2ml,加热9分钟. 拟订了一个改进的系统定性分析中Zn~(2 )的分离步骤.本法能在Zn~(2 )与Co~(2 )、Ni~(2 )、Mn~(2 )共存时以1∶15的界限比分离Zn~(2 )仍能得到白色ZnS沉淀.实践证明本法分离效果较好,克服了过去Zn~(2 )在硫化铵组系统分析时少量Zn~(2 )的损失和ZnS沉淀呈灰或灰黑色缺点.     

大鼠再生肝8种肝脏细胞的生物氧化相关基因转录谱预示的生理活动

为了解大鼠肝再生中8种肝脏细胞的生物氧化相关基因转录谱及其预示的生理活动,用Percoll密度梯度离心结合免疫磁珠分选方法分离大鼠再生肝的肝细胞、胆管上皮细胞、卵圆细胞、星形细胞、窦内皮细胞、库普弗细胞、陷窝细胞和树突状细胞等8种细胞,用Rat Genome2302.0芯片等检测生物氧化相关基因在上述细胞中表达变化,用H-Cluster等软件及生物信息学和系统学生物等方法分析它们的表达模式及预示的生理活动.结果表明:38个生物氧化相关基因在大鼠肝再生中发生了有意义表达变化,相应细胞的基因数为6,32,0,2,3,1,3,2个.肝再生启动阶段和进展阶段的NAD+合成增强,从NADH到O2的电子传递及ATP合成增强.终止阶段的FADH2分解减弱,从FADH2到O2的电子传递减弱.结论:大鼠肝再生与生物氧化密切相关.     

大鼠再生肝8种细胞的葡萄糖代谢基因转录谱预示的代谢活动

为了解大鼠肝再生中8种肝脏细胞的葡萄糖代谢基因转录谱及其预示的葡萄糖代谢活动,用percoll密度梯度离心结合免疫磁珠分选方法分离大鼠再生肝的8种细胞,用RatGenome2302.0芯片等检测上述细胞的葡萄糖代谢基因在大鼠肝再生中的表达变化,用H-Cluster软件分析基因表达模式,用生物信息学和系统生物学等方法分析基因表达变化预示的生理活动.结果表明,48个葡萄糖代谢基因在大鼠肝再生中发生了有意义的表达变化,其中上调、下调和上/下调的基因数分别为20、14、14,上述细胞的相应基因数为14、8和0,11、6和0,6、4和0,7、11和0,11、6和2,6、5和1,12、5和0,9、9和1,呈现21种表达相关性.上述葡萄糖代谢基因转录谱预示,肝细胞和库普弗细胞的3-磷酸甘油醛合成增多,肝细胞和胆管上皮细胞的烯醇式丙酮酸合成增多,肝星形细胞、窦内皮细胞、库普弗细胞、陷窝细胞和树突状细胞的通过三羧酸循环产生ATP活动增强.结论:大鼠肝再生与葡萄糖代谢密切相关.     

西瓜花叶病毒-2新疆株的纯化

研究了西瓜花叶病毒 2新疆株的纯化 .感病西葫芦叶组织在含有w =0 .2 %巯基乙醇和 0 .0 1mol·L- 1乙二胺四乙酸二钠 (EDTA)的 0 .5mol·L- 1的磷酸钾缓冲液中匀浆 ,用匀浆体积 1/4的氯仿澄清 ,粗提取液中的病毒经含有 φ =1%TritonX 10 0和w =3%NaCl的w =6 %聚乙二醇沉淀 ,并以含有 0 .5mol·L- 1尿素、w =0 .1%的巯基乙醇和 0 .0 1mol·L- 1EDTA的 0 .5mol·L- 1磷酸钾缓冲液悬浮 ,后经含有w =0 .1%巯基乙醇和 0 .0 1mol·L- 1EDTA的w =10 %～ 4 0 %蔗糖密度梯度离心 ,获得了经电子显微镜、紫外检测和接种试验证实侵染活性为 94 .8%的纯化病毒 .纯化病毒的A2 6 0 /A2 80 =1.2 1,A2 6 0 /A2 4 5=1.15 ,纯化病毒产量约为每kg西葫芦感病叶组织中可提取 16mg .     

短乳杆菌来源重组β-半乳糖苷酶初步分离纯化与酶学特性研究

将实验室克隆得到的E. coli BL21/pET28a-bga B-18重组菌株在IPTG的诱导下进行表达,对其表达的β-半乳糖苷酶性质进行研究.首先,通过离心收取重组菌菌体;其次,通过超声破碎菌体细胞,再用镍柱对重组蛋白质进行亲和层析;最后,收集层析液,再利用紫外分光光度计测定重组β-半乳糖苷酶活性,并研究其酶学性质.结果表明:该酶的最适反应温度为37℃,最适pH值为7.5;在温度30～50℃、pH 6.0～8.0范围内酶稳定性较好; Mg~(2+)、Mn~(2+)为其激活剂,Cu~(2+)为其抑制剂;测得K_m=0.816 mmol/L,V_(max)=45.87 mmol/(L·min).