一株噬甲烷菌的分离鉴定及其消除煤矿瓦斯能力的初步研究

借鉴滚管法,从煤矿矿井及甲烷处理水稻田土壤中分离纯化,获得一株可在以甲烷为唯一碳源的培养基上正常生长且具有较高甲烷氧化活性的噬甲烷细菌,暂命名为ZD4,经对该菌进行形态观察、Biolog生理生化分析、G Cmol%含量分析和16SrDNA序列同源性比较,鉴定该菌为甲烷甲基单胞菌(Methylomonas capsulatus),并对ZD4菌株进行了生长量、对甲烷消除作用的分析。试验结果表明,该菌株可以使甲烷含量在一周内比初始甲烷浓度降低85%以上。利用其良好的甲烷消除能力,用于煤矿瓦斯治理是可行的。     

一株萘降解菌的分离与筛选

文章以无机盐培养基为基础培养基,以多环芳烃萘为惟一碳源,通过富集、驯化培养、稀释涂布、平板划线等方法进行目的菌株的分离和筛选,再对分离菌株进行形态学、生理生化鉴定及16SrDNA基因序列的同源性比对和系统发育树分析.筛选得到一株萘降解菌株,命名为J3,经鉴定、同源性比对和系统发育树分析得出菌株J3为赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus sp.)菌属的细菌.     

降解酒精废液优势功能菌群的筛选

为了筛选出一些对酒精废液具有降解功能的降解菌．本研究以酒精废液为唯一碳源的驯化培养液进行驯化培养．采用稀释涂布的方法,在分离培养基平板上分离筛选以酒精废液为唯一碳源和能源的酒精废液降解菌株．结果筛选到5株酒精废液降解菌Q1、Q2、Q3、Q4、Q5,5株降解菌均能在不同程度上对酒精废液进行降解．     

产壳聚糖酶的肠杆菌分离鉴定及其培养特性研究

针对筛选的一株产壳聚糖酶菌株进行了鉴定和培养特性研究．首先对产酶菌株进行鉴别培养基培养、显微镜检并结合生理生化与16SrDNA分子鉴定以确定菌属来源,后对菌株产壳聚糖酶的碳源、氮源、金属盐和诱导物进行筛选优化．结果表明：产酶菌株为产气肠杆菌,最佳培养碳源为葡萄糖,最佳氮源为氯化铵和酵母粉,MnSO4,MgSO4,KCl和NaCl对产酶有积极作用．该菌来源的壳聚糖酶为诱导酶,最佳诱导物为粉末壳聚糖,壳聚糖酶活性为1．58U／mL．     

一株多氯联苯降解菌的分离鉴定及基因分型

从深海底泥中分离筛选出一株以多氯连苯（PCBs）为惟一碳源和能源生长的菌株, 命名为pdi. 该菌在含有PCBs 7.5 mg/L的150 mL液体培养基中培养7d, 用GC MS检测其对PCBs的降解率达95.38%. 以细菌16SrDNA通用引物对pdi基因组进行PCR扩增, 得到~1　500　bp的片段. 经纯化, 测序后在Genbank上进行同源性比较分析及系统发育树构建, 该菌与Pseudomonsa spTS1138同源性达100%, 初步鉴定该菌为假单胞菌属. 对pdi基因组进一步运用RAPD分子标记技术进行随机引物扩增基因分型, 获得了稳定的DNA 指纹图谱.     

甲胺磷农药降解菌的筛选鉴定及其降解效能研究

分别从黄冈棉田、荆州农田、沙市农药厂等长期受有机磷农药污染的不同环境土壤取样,通过富集培养,筛选分离到10株甲胺磷(MAP)降解菌.测定了各菌株的降解效能.选取降解效果较好的HS-A32菌株进行了初步研究.提取该菌总DNA进行16S rDNA PCR扩增、测序,BLAST检索及序列分析表明,HS-A32菌与不动杆菌的同源性为98%.结合生理生化实验结果,初步确定HS-A32菌为不动杆菌属(Acinetobacter).通过薄层色谱(TLC)及高效液相色谱(HPLC)对MAP降解进行了定性和定量分析.结果表明,该菌能以MAP作为唯一的碳源和氮源生长.接种该菌于500 mg/L的MAP无机盐液体培养基中,35℃、120 r/min振荡培养3 d,对甲胺磷降解率可达86%,是一株甲胺磷高效降解菌.     

五氯酚钠生物降解菌的初步筛选

用五氯酚钠浓度梯度培养基平板,从土样中筛选五氯酚钠耐受菌;再以五氯酚钠为唯一碳源进行摇瓶培养,筛选五氯酚钠降解菌。以不同浓度的五氯酚钠药物培养基对五氯酚钠降解菌的耐受能力进行测定。结果筛选出对五氯酚钠的耐受能力为0.8 g/L的菌株,并能以五氯酚钠为唯一碳源生长的细菌3株。     

一株反硝化聚磷菌的筛选及其脱氮除磷性能研究

为给工程化应用提供一定的理论支持和依据,研究了反硝化聚磷菌的脱氮除磷效率和适宜的生长环境。以青岛市某污水处理厂成熟活性污泥为菌种来源,通过筛选、培养、形态分析、分子生物学鉴定等方法,分析了该菌生长规律与其脱氮除磷率的关系,并通过改变温度、pH和碳源等生长条件研究对其脱氮除磷率的影响。成功分离并鉴定了一株脱氮除磷率高的反硝化聚磷菌株,该菌株是假单胞菌属(Pseudomonas sp.),脱氮除磷效率较高,其脱氮除磷率超过90%。该菌株在温度30℃,碱性环境,碳源为柠檬酸钠条件下,能够较好的生长。     

低温碱性脂肪酶产生菌的筛选及产酶培养基的优化

以橄榄油为唯一碳源,从渤海湾盐碱地被油污染的土样中分离筛选出1株产低温碱性脂肪酶菌株34.5,初步酶学性质研究表明,该菌所产脂肪酶的最适温度为25℃,最适pH为9.6.该菌的16S rDNA基因序列与伯克霍尔德氏菌(Burkholderia)的同源性为99%.摇瓶实验表明,该菌株最适产酶培养基为(g/L):淀粉10,黄豆饼粉20,玉米浆20,K2HPO41,聚乙烯醇大豆油乳化液20.其最高酶活为6.87 U/mL.     

橡椀单宁降解菌的筛选及降解条件

从自然环境中分离、筛选出了降解橡Wan单宁能力较强的菌株，并对该菌株降解单宁的培养条件进行分析，结果表明，28－32℃、pH4.5培养8d为橡Wan单宁的最适降解条件。在此条件下，对此菌株驯化，有效提高了该菌株的耐单宁性及单宁降解率。通过研究外加碳源、氮源及碳氮比对该菌株降解单宁的影响，发现这3个因素均明显影响微生物对单宁的降解。在适宜的培养条件下，该降解菌在以葡萄糖为外加碳源，以硝酸铵为氮源，碳氮比为10：1的条件下，单宁的降解率最高，并发现在一定范围内，碳氮比高有利于菌株降解单宁，而碳氮化低则不利于单定的降解。     

石油降解菌的筛选、鉴定及其菌剂制备的初步优化

从濮阳油田石油污染土壤中筛选出20个能以原油为唯一碳源生长的菌株,对其中的优势菌KF-2进行形态学、生理生化实验及16SrRNA序列分析,鉴定为木糖氧化产碱杆菌.以KF-2为实验菌株,采用单因素和正交实验结合的方法,在150mm培养皿中研究载体种类和装量、pH、料水比、培养温度、培养时间和烘干温度对菌剂活菌数的影响,得出菌剂制备的最佳条件为:麦麸为载体、pH为9、料水比1∶3.6、10g麦麸、25℃培养3d和30℃烘干,菌剂中活菌数可达7.24×1010 CFU/g.     

微生物絮凝剂产生菌筛选及絮凝条件优化

从空气和活性污泥中筛选出絮凝剂产生菌,并对其絮凝条件进行优化研究。实验共分离纯化出纯种菌株19株,经絮凝试验筛选得到有絮凝能力的菌株9株,复筛得到3株絮凝活性较高且稳定的菌株,分别命名为M-2、M-3、G-3。以M-3为例,研究了碳源、氮源、培养基初始pH值、培养时间、培养温度及通气量等对菌株絮凝性能的影响,结果表明玉米面、黄豆面分别为最佳碳源和氮源,M-3的最佳培养条件为：温度30℃,培养基初始pH值为8．5,培养时间为36或60小时,摇床转速为160r／min。     

一株氨氧化菌的分离及其生物学特性研究

从青岛近海养殖场废水样品中筛选到一株具有硝化与反硝化双重功能的细菌,命名为YZC.菌株YZC兼性厌氧,革兰氏阳性,杆状;菌落干燥、圆形隆起、边缘锯齿状,在不同培养基上菌落颜色有所变化.该菌能以硝酸钠为氮源在好氧条件下进行反硝化作用;能以乙酸钠和硫酸铵分别为碳源和氮源进行硝化作用;该菌能以乙酰铵为唯一碳源和氮源而生长,并能利用多种糖和其他碳源.我们还测定了该菌的最适pH值和其生长盐浓度,以及其水解淀粉和明胶的能力,因此,YZC菌株对自然水体,尤其是废水的生物脱氮具有潜在的研究价值.     

一株甲烷氧化杆菌的分离及其功能的初步研究

采用Ｍｕｎｚ培养基,由河底淤泥等土样中分离以甲烷为唯一碳源的细菌。对其中一株杆菌经透射电镜观察及生理学鉴定,认为该菌为甲基单胞菌属（Ｍｅｔｈｙｌｏｍｏｎａｓ）甲烷氧化杆菌。该菌能将乙烯氧化产生环氧乙烷,能在质量分数为０１％苯酚、对苯二酚和体积分数为０１％苯的培养液中增殖并发生降解或氧化反应。该菌粗蛋白质量分数为２２５％以上。下一步将对该菌的实际应用作深入研究     

陕北地区高效石油降解菌的筛选及其对油污土壤的修复研究

通过筛选陕北地区的高效石油降解菌,为后续的土壤修复提供优良的菌种资源。本研究的石油降解菌分离来自延安市延长县某油井的土壤样品,通过以石油为唯一碳源,进行筛选、富集培养和平板划线分离,得到可降解石油的菌株,并采用紫外可见分光光度法测量其对富集培养基中的石油降解率。利用PCR扩增技术对筛选的石油降解菌的16S r DNA序列进行扩增,通过对16S r DNA序列的测定和NCBI数据库集进行基因序列比对确定其种属;在被石油污染过土壤中加入筛选出的石油降解菌进行修复试验,经50 d的修复反应,测定石油降解菌对油污土壤中石油的降解效率;最后通过种植小麦检验石油降解菌的降解效果。共筛选出3株高效的可降解石油的菌株:W1、W3、N4,三株菌均可以在以石油为唯一碳源的环境中生长,它们在富集培养基中的石油降解率分别为42. 55%,37. 18%和33. 57%,利用分子生物学技术对三株菌进行鉴定,结果是W1菌株为假单胞菌属,W3菌株为芽孢杆菌属,N4菌株为红球菌属。在菌株对油污土壤修复的研究中,菌W1和菌W3分别对油污土壤进行50 d的降解,土壤中石油量得到很大程度的降解,W1菌株的降油率为52. 20%,W3菌株的降油率为47. 84%,修复后土壤的质量对于小麦的生长没有影响。通过本研究课题,为陕北地区石油污染土壤修复提供了优良的菌种资源,同时为陕北地区的石油污染土壤的微生物修复提供了一定的科学依据。     

高产5-氨基乙酰丙酸光合细菌株的分离鉴定

从不同生态环境中分离培养出20株光合细菌,进行5-氨基乙酰丙酸(5-ALA)的产量检测,筛选出一株分离自广州市云溪公园池塘底泥的菌株R5,其5-ALA产量最高,达4.92 mg/L.为了确定菌株R5的分类学地位,对该菌株的形态学、碳源利用情况等生理生化特性进行了研究,表明该菌株符合红假单胞菌属的生物学特征;以菌株R5基因组DNA为模板PCR扩增16S rDNA基因,对PCR产物进行了序列测定,将所测得的核酸序列与相关细菌的16S rRNA序列进行比对,并构建进化树进行系统发育分析,发现菌株R5与沼泽红假单胞菌株KUGB306(Rhodop-seudom onas palustrisKUGB306)形成一个类群,序列同源性为99%.故最后确定该高产5-ALA的菌株属于红假单胞菌属(Rhodopseudom onas).     

棘白霉素B脱酰基酶产生菌N07W61的分类鉴定

菌株N07W61是由前期筛选获得的具有棘白霉素B脱酰基酶活性的菌株.通过形态特征、培养特征观察、生理生化特征、胞壁分析及16SrDNA基因序列同源性分析等多相分类研究对该菌株进行了鉴定,结果表明N07W61属于小单孢菌属(Micromonospora).     

鰤鱼诺卡氏菌与黄粉色诺卡氏菌原生质体融合的研究

鰤鱼诺卡氏菌是鱼类诺卡氏菌病的主要病原,黄粉色诺卡氏菌为一种近缘无毒环境诺卡氏菌.本实验研究主要以鰤鱼诺卡氏菌和黄粉色诺卡氏菌为两亲本,开展了原生质体融合研究.针对诺卡氏菌细胞壁厚的特性,本实验对原生质体制备时的溶菌酶脱壁时间进行了筛选,确定鰤鱼诺卡氏菌和黄粉色诺卡氏菌的最佳脱壁时间分别是65 min和100 min.用聚乙二醇促使两亲本菌的原生质体融合后,通过选择性培养基培养、菌落形态筛选、革兰氏染色观察、16S rRNA测序等方法,对融合菌株进行了初步鉴定.鉴定结果表明:融合菌株的菌落形态较两亲本发生了改变,为革兰氏阳性菌,通过16S rRNA基因序列比对,其与鰤鱼诺卡氏菌的同源性为99%.融合菌株的毒力较鰤鱼诺卡氏菌野生株有所降低.本研究为鰤鱼诺卡氏菌活疫苗的研制提供了新思路,对鱼类诺卡氏菌病的防治具有一定的潜在价值.     

降解甲烷微生物的生物学特性研究

瓦斯是煤矿安全生产的最大隐患,利用微生物技术治理煤矿瓦斯的研究是目前国内外学者研究的热点.从垃圾填埋场的湿土中成功筛选出一种能降解甲烷的菌株,应用形态学观察及16S rDNA序列的同源性分析对该菌种进行了鉴定,同时研究了其培养条件及降解甲烷的性能.结果表明:该菌种属萎缩芽孢杆菌属( Bacillus atrophaeus),其最佳生长温度为32℃,pH值为6.5,氧气与甲烷体积比为2∶3,在此条件下48 h内甲烷降解率接近50％.     

氧化葡萄糖酸杆菌的选育及其发酵条件优化

目的 提高氧化葡萄糖酸杆菌的生物量.方法 采用紫外诱变育种、梯度平板半理性设计筛选、单因素实验进行培养条件优化、2 L发酵罐内进行补料培养.结果 筛选到了一株生物量高产菌株,命名为Gouv2007,其生物量比原始菌株提高了11.2%,脱氢酶比酶活与原始菌株持平,培养时间缩短了6 h.该菌生长的最佳碳源为山梨醇,氮源为酵母粉,无机离子为硫酸镬和磷酸氢二钾;最佳培养条件为:培养温度28℃,500 mL烧瓶装液量100 mL、摇床转速200 r/min、培养基的初始pH自然.在最佳条件下培养,其生物量为1.34 g/L,比原始菌株提高了50.6%,脱氢酶比酶活有所提高.在2 L发酵罐内补料培养,其生物量达到了5.58 g/L.结论 通过紫外诱变育种和条件优化提高了该菌的生物量,并在发酵罐内进行了小试.