高迁移组染色体蛋白-17的分离提取及其抗体ELISA测定方法的建立

纯化高迁移组染色体蛋白－１７（ＨＭＧ－１７）,建立检测抗ＨＭＧ－１７自身抗体的ＥＬＩＳＡ方法,探讨抗ＨＭＧ－１７抗体与临床疾病的关系。用水煮沸法提取,甲酸－吡啶缓冲液酸化和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０凝胶过滤技术,自小牛胸腺组织中分离ＨＭＧ－１７,用此纯化物包被,方阵滴定,建立测定抗ＨＭＧ－１７抗体的间接ＥＬＩＳＡ方法,并进行方法学考核和临床标本检测。纯化的ＨＭＧ－１７抗原经十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）分析,呈现一条分子量约９２００的蛋白带;建立的ＥＬＩＳＡ方法批内平均变异系数（ＣＶ）为５．８％,批间ＣＶ值为９．６％,ＥＬＩＳＡ抑制试验最高抑制率达８７．２％;临床检测结果表明,在系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）、混合性结缔组织病（ＭＣＴＤ）和干燥综合征（ＳＳ）患者中分别有１７．４％～３７．３％的抗ＨＭＧ－１７抗体的阳性检出率（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５）,而在其他自身免疫病和内科疾病者中,抗ＨＭＧ－１７抗体均为低水平。抗ＨＭＧ－１７抗体ＥＬＩＳＡ测定法具有较好的特异性和重复性,便于常规检测,该类抗体的存在似与某些自身免疫病（尤其是ＳＬＥ）的关系较为密切     

ELISA技术及在甘肃马铃薯脱毒种薯生产中的应用现状

酶联免疫吸附（Ｅｎｚｙｍｅ－ＬｉｎｋｅｄＩｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔＡｓｓａｙ）测定即ＥＬＩＳＡ技术，是近年来继免疫荧光技术与放射免疫分析法之后发展应用于植物病毒检测的新方法。它不仅可以定量测定抗体，也可以鉴定抗原，具有灵敏度高、特异性强、测定方法简单、便于直接观察、可快速大规模检测样品的特点。目前已广泛应用于生物学和医学的许多领域，成为检测鉴定病毒的最新血清学方法之一。１ＥＬＩＳＡ技术的起源与发展１９９６年Ｎａｋａｎｅ和Ａｖｒａｍｅａｓ分别用酶代替荧光色素标记抗体，进行生物组织中抗原的鉴定及定位…     

大肠杆菌新菌毛抗原的研究Ⅳ．菌株的致病作用检验

应用消化道接种途径，测定了产生Ｆ１９８７新菌毛抗原大肠杆菌菌株对貂、兔、犬、猪、貉子的致病作用，同时对貉子进行了静脉、肌肉接种的感染试验。结果初步表明：供试菌株仅引起了貉子明显发病，经消化道接种能引起腹泻并随粪便向外界排菌，剖检可见出现眼观、组织学及超微结构的病变，且在肠道内容物中能回收到原感染菌。     

催化杀虫剂西维因水解的抗体酶制备(Ⅱ)多克隆催化抗体的制备、纯化及检测

以优选的合成抗原（Ｈ(ａｐ)－ＢＳＡ）免疫动物产生了滴度为１：５５０００（１号兔,Ｒｔ－１）的兔抗多克隆催化抗体．采用盐析和ＰｒｏｔｅｉｎＡ－ＳｅｐｈａｘｏｓｅＣＬ４Ｂ亲和层析法,从兔抗血清中分离出了具有电泳纯度的多克隆催化抗体．经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测,ＩｇＧｓ相对分子质量为１４８０００．纯化后的多克隆抗体,经ＥＬＩＳＡ法测定,其最低检出活性为２×１０(－６)～４×１０(－６)ｇ／Ｌ．     

分泌抗弓形虫单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用弓形虫可溶性抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠,取脾细胞,与Ｓｐ２／０ 细胞融合,获得３ 株能稳定分泌抗弓形虫单克隆抗体的细胞。细胞培养上清液和腹水中的单克隆抗体效价分别为１∶１６ ～２５６ 和１０ － ６ ～１０ － ７ 。单抗类型均为ＩｇＭ。杂交瘤细胞经液氮冻存１２ 个月后,复苏生长良好,分泌活性稳定。在ＭｃＡｂ－ Ｄｏｔ－ ＥＬＩＳＡ 实验中,所能测出可溶性抗原的最小浓度为１０ ｎｇ／ ｍＬ     

高迁移组染色体蛋白-17的分离提取及其抗体ELISA测定方法的建立

纯化高迁移组染色体蛋白－１７（ＨＭＧ－１７）,建立检测抗ＨＭＧ－１７,自身抗体的ＥＬＩＳＡ方法,探讨抗ＨＭＧ－１７抗体与临床疾病的关系,用水煮沸法提取,甲酸－吡啶缓冲液酸化和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０凝胶过滤技术,自小牛胸腺组织中分离ＨＭＧ－１７,用此纯化物包被,方阵滴定,建立测定抗ＨＭＧ－１７抗体的间接ＥＬＩＳＡ方法,并进行方法学考核和临床标本检测,纯化的ＨＭＧ－１７抗原经十二烷基硫酸钠－聚丙烯     

148例孕妇弓形虫感染分析

对１４８ 例孕妇（妊娠八周至妊娠七个月），运用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测静脉血弓形虫（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍ ａ ｇｏｄｉｉ， ＴＯ）抗体；即Ｔｏｘ－ＩｇＧ抗体和Ｔｏｘ－ＩｇＭ抗体，发现近年来有猫犬接触史（指现在或曾经养过猫犬的）孕妇弓形虫感染率明显高于无猫犬接触史孕妇（Ｐ＜ ０．０５），两者有显著性差异。     

植物钙调素的分离纯化及其特性研究

本文以烟草愈伤组织和花椰菜这花序为材料，分离纯化钙调素。所得ＣａＭ的纯度用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定；生物活性用其对牛心肌环腺苷酸磷二酯酶（ＰＤＥ）的激活作用测定（ＣａＭ）的产量用酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）测定。并比较了上Ｐｈｎｅｙｌ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－４Ｂ柱前对ＣａＭ溶液的不同处理。纯化的烟草愈伤组织和菜花ＣａＭ，具有牛脑ＣａＭ所特有的一些性质。它对牛心肌ＰＤＥ有明显激活作用，在含有Ｃａ＾２＋     

邻联茴香胺—H2O2—辣根过氧化物酶伏安酶联免疫分析检测四种 …

将邻联茴香胺（ＯＤＡ）－Ｈ２Ｏ２－辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）伏安酶联免疫分析体系于测定南芥菜花叶病毒、黄瓜花叶病毒、南方菜豆花叶病毒和芜菁地病毒等四种重要植物病毒,其灵敏度高地酶联免疫吸附显色光度法（ＥＬＩＳＡ）。     

用酶联免疫印渍技术分析绵羊东毕血吸虫成虫抗原

采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、电泳转印技术和固相免疫标记技术结合的酶联免疫印渍技术（ＥＴＩＢ），首次分析东毕血吸虫成虫抗原。抗原蛋白组分显示：ＳＤ－ＰＡＧＥ共将绵羊东毕血吸虫成虫抗原分离出４２条带；经ＥＴＩＢ分析，与阳性血清反应有１２条带，其中主带有４条，分子量分别为３５、８０、９２和９４ｋＤ，试验表明，这四个分子量的蛋白质具有较强的反应原性，可做为东毕血吸虫的诊断抗原。     

SDS在HCV基因工程抗原包被中的应用研究

在间接ELISA法检测HCV抗体过程中,通过使用含有十二烷基硫酸钠（SDS）的包被液对HCV基因工程抗原固相化,发现使用SDS提高了HCV间接ELISA法诊断试剂检测的阳性标本和阴性标本的偏比,改善了反应模式,为改善HCV-ELISA法诊断试剂的质量提供了有效途径.     

结核分枝杆菌和卡介苗抗原蛋白的比较研究

利用Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔ技术,对结核分枝杆菌和卡介苗抗原蛋白进行研究,发现两个菌种的３１ＫＤ和３０ＫＤ蛋白均能单克隆抗体识别,且两蛋白均存在于培养基滤液中,并对卡介苗诱发抗结核反应的机制进行了探讨。     

低强度瞬态电磁场下动物细胞的电穿孔效应

用低强度瞬态电磁场处理动物细胞后,一些胞内蛋白可以溢出细胞,荧光标记抗体蛋白（ＩｇＧ）可以进入细胞,通过扫描电镜观察到红细胞膜上有电致孔洞,证实了低强度瞬态电磁场作用能起电穿孔。     

丙型肝炎病毒抗体快速诊断试剂的方法学研究

通过将抗原片段用点膜仪固相在硝酸纤维素膜上,依次加入标本、生物素标记的IgG、链霉亲和素-碱性磷酸酶,最后加底物显色,建立一种快速、敏感、实用的丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)检测方法.结果表明,整个检测过程仅需15～25 min,操作简便,已通过"第3代ELISA抗-HCV诊断试剂国家参考品".该方法简便、快速,结果易判断,既有ELISA的特异性和灵敏性,又有金标记法的检测速度;既适合输血筛查实验,又适合临床常规检查.     

Simultaneous ultrastructural demonstration of multiple peptides in endocrine cells by a novel immunocytochemical method.

Current immunocytochemical techniques detect all antibodies that react with tissue. Unfortunately, some of these antibodies may react with antigens other than those intended. Such problems are minimised by using sets of antibodies detecting different regions of the desired antigen. However, as immunocytochemical methods can now detect very low antibody concentrations, the purity of antisera is critical. Furthermore, although antisers may be purified by affinity chromatography, difficulties in recovering high-avidity antibodies cause most affinity-purified antisera to be enriched in low-avidity antibodies, which may be dislodged during staining. We have therefore developed, and describe here, a new ultrastructural post-embedding staining technique, based on the divalency of IgG molecules and using antigen-coated colloidal gold granules. Previously, colloidal gold-labelled antibodies have been used for post-embedding staining. Unlike our gold-labelled antigen detection (GLAD) technique, however, these methods do not differentiate between specific and nonspecific antibodies. The GLAD method detects only specific antibodies and does not select against high-avidity antibodies, and in this it resembles the radioimmunocytochemical method. However, the GLAD method differs from the latter in that it is useful for ultrastructural studies, does not require autoradiography and allows simultaneous detection of multiple antigens. Moreover, specific activity compared with background may be quantitated.     

菜青虫(Pieris rapae)感染苏云金杆菌晶体毒素后中肠上皮细胞的免疫酶标电镜观察

用双相法提纯青虫菌(Bacillus thuringiensis var.galleriae)的晶体,碱解后免疫家兔获晶体蛋白抗体,然后用纯化的晶体感染莱青虫,半小时至1小时取中肠上皮细胞作酶标电镜观察,结果表明仅在细胞膜上看到抗原的存在。     

肝片吸虫DNA疫苗的构建及其免疫效应的初步研究

用ＥcorRI酶切含肝片吸虫保护性抗原基因ＦＨ３的重组质粒pUC18/FH3,回收ＦＨ３（－１．０Ｋb)片段克隆到真核表达载体pBlueCMV上,酶切筛选顺向插入重组子pBlueCMV-FH3,即得到一种肝片吸虫ＤＮＡ疫苗,制备纯化该疫苗并免疫小鼠,小鼠肌肉细胞中有一定的ＦＨ３抗原表达;用ＥＬＩＳＡ检测抗血清表明,注射疫苗的小鼠均伴随产生一定量的特异性抗体,用肝片吸早囊蚴攻击（２０囊蚴／鼠）小鼠,初步显示有一定的减虫率。     

一种新的免疫荧光-酶双重染色技术

通过对原代培养DRG细胞进行免疫荧光染色、免疫酶染色和免疫荧光-酶双重染色,研究了原代DRG细胞中P物质及NK-1R与神经元相互定位关系,对比分析了3种染色效果.结果表明:免疫荧光-酶双重染色效果较好,既能清楚辨识组织细胞结构,又可对标记物进行清晰区分.故免疫荧光-酶双重染色技术是一种结合了免疫酶法和荧光法的优势的免疫染色新方法,值得在病理药理研究中推广.     

核仁抗原在白血病诊断中的初步观察

用抗核仁抗原NAg-1的抗血清对各种白血病人骨髓组织进行免疫荧光染色.结果表明,急性白血病患者的NAg-1阳性细胞率显著高于正常人及各种非白血病贫血患者.在处于完全缓解的白血病患者中,具有较高的NAg-1阳性率者(>10％)比较低者(<10％)更易复发.