肺癌A549细胞COX-2与MMP-2表达的关系

目的:探讨肺癌A549细胞环氧化酶-2(COX-2)表达和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达之间可能潜在的关系.方法:①用Western blot法检测对照组和干预组(5、10、15μg/mL脂多糖(LPS)干预12 h,10 μg/mL的LPS干预6、12、24 h)A549细胞MMP-2蛋白质表达;②用ELISA法检测对照组和干预组A549细胞培养上清液COX-2活性产物前列腺素E2(PGE2)及MMP-2的变化.结果:①在5、10、15μg/mL的LPS 12 h诱导下,肺癌A549细胞MMP-2蛋白表达及MMP-2和PGE2的分泌增加;②10 μg/mL的LPS干预肺癌A549细胞6、12、24 h后MMP-2蛋白表达及MMP-2和PGE2的分泌增加;③肺癌A549细胞PGE2与MMP-2正相关(r1=0.980,r2=0.975).结论:①肺癌A549细胞PGE2与MMP-2密切相关;②肺癌A549细胞可能通过激活肺癌A549细胞MMP-2,参与肺癌的侵袭与转移.     

孕酮和脂多糖对人羊膜细胞β-防御素-4(HBD-4)表达的影响

研究了孕酮(P4)和脂多糖(LPS)对人羊膜细胞内β-防御素-1(HBD-1) mRNA和β-防御素-4(HBD-4) mRNA表达的影响.使用10~(-9)M孕酮、0.5μg/mL脂多糖处理无血清羊膜细胞4 h、8 h、12 h、24 h,各时间点设无孕酮、无脂多糖添加的对照组(Control),然后使用10~(-9)M孕酮+0.5μg/mL脂多糖(P4+LPS)处理无血清羊膜细胞4 h、8 h、12 h、24 h,各时间点设0.5μg/mL脂多糖处理组(LPS)为对照组,并利用RT-qPCR技术检测各处理组中羊膜细胞内HBD-1、HBD-4 mRNA的表达变化.与对照组比较,孕酮和脂多糖对羊膜细胞HBD-1 mRNA的表达均无显著性影响.脂多糖可上调人羊膜细胞中HBD-4 mRNA的表达(P0.05),而只添加孕酮对羊膜细胞中HBD-4 mRNA的表达量无显著影响,但在孕酮与脂多糖共同诱导下可上调人羊膜细胞中HBD-4 mRNA的表达(P0.05).孕酮和脂多糖对羊膜细胞内HBD-1的表达无显著调节作用.羊膜细胞分泌的HBD-4是妊娠期羊膜腔天然免疫的重要组成部分,羊膜及羊膜腔感染时缺少孕激素将会影响羊膜细胞中HBD-4的表达,从而易引起抗菌能力降低而危及母亲和胎儿健康.     

牙周上皮细胞中CD24与Twist2的表达水平与牙周炎的关系

目的 探讨牙周上皮细胞中CD24多肽抗体和Twist2抗体的表达水平及与牙周炎的关系.方法 将培养生长良好的牙周膜上皮细胞随机分成3组,即对照组、实验1组和实验2组,其中,对照组用α-MEM培养液进行培养,实验1组用含1μg/mL LPS的α-MEM培养液进行培养,实验2组用含1μg/mL LPS的α-MEM培养液进行培养,并加入CD24多肽抗体.用LPS处理牙周细胞,模拟牙周炎炎性环境,将牙周细胞应用Trizol法提取总mRNA后,应用qRT-PCR法检测3组细胞中CD24 mRNA和Twist2 mRNA的表达水平.结果 经1μg/mL LPS刺激24 h后,CD24 mRNA、Twist2 mRNA的表达量显著增加,经CD24多肽抗体处理细胞后Twist2 mRNA的表达量降低(P<0.05).结论 牙周细胞的炎症反应引起CD24和Twist2表达增加,CD24表达受到抑制后,Twist2表达降低,结果显示:CD24参与调节牙周炎中Twist2的表达.     

睾酮可通过抑制StAR蛋白的表达调节自身的分泌

为了研究睾酮的自分泌调节机制,选取2-3周龄的仔猪睾丸间质细胞为研究材料。不同浓度的睾酮(0、10mg/mL、20mg/mL、50mg/mL、100mg/mL)与间质细胞共孵育48h,更换培养液,加入hCG(50U/mL)孵育4h,收集培养液,用放射免疫法(RIA)测定睾酮、hCG和cAMP的浓度。然后用浓度为50mg/mL的睾酮与胆固醇,5mg/mL;孕烯醇酮,500ng/mL;脱氢表雄酮,500ng/mL;雄烯二酮,500ng/mL和22R-羟胆固醇(3μg/mL)共同孵育间质细胞48h,更换培养液,加入hCG(50U/mL)孵育4h,收集培养液和细胞,用放射免疫法(RIA)测定睾酮,用免疫印迹测定StAR水平。实验结果如下:(1)随着睾酮浓度的增加,睾酮对自身合成的抑制作用逐渐增强,当睾酮浓度为50mg/mL,睾酮分泌、hCG的结合率以及间质细胞内cAMP的浓度分别下降了69.93%、61.24%和52.4%。(2)尽管睾酮抑制了胆固醇和雄烯二酮向睾酮的转化,但对其它几种前体物的转化没有明显影响。(3)睾酮不但抑制了基础水平StAR的表达,而且也抑制了hCG刺激的StAR蛋白的表达,这表明睾酮可以通过抑制StAR蛋白的表达降低自身的合成。     

交通相关PM2.5对人外周血淋巴细胞凋亡的影响

为探讨交通相关PM2.5对人外周血淋巴细胞凋亡的诱导作用及可能机制,为交通相关PM2.5的免疫毒性提供实验依据,采用0、50、100、200μg/mL PM2.5对人外周血淋巴细胞进行24 h和48 h染毒,FITC-AnnexinV/PI染色,流式细胞仪检测淋巴细胞早期凋亡和坏死;采用0、20、80、320μg/mL PM2.5浓度分别染毒人外周血淋巴细胞24、48、72 h,Western blot法测定细胞内含半胱氨酸的天冬氨酸特异蛋白水解酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase 3,Caspase-3)和cAMP反应元件结合蛋白(cAMP-response element binding protein,CREB)蛋白表达水平,ELISA法检测细胞内环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophos-phate,cAMP)含量.结果表明,50、100、200μg/mL PM2.5染毒细胞24 h和48 h后,淋巴细胞早期凋亡和坏死均高于生理盐水组,差异有统计学意义(P<0.01),且具有一定的剂量-效应关系;20、80、320μg/mL PM2.5染毒细胞24、48、72 h后,各剂量组Caspase-3蛋白表达水平均高于对照组,除80μg/mL PM2.5染毒72 h外,差异均具有统计学意义(P<0.01).320μg/mL PM2.5染毒细胞24、48、72 h后,细胞内cAMP含量均比生理盐水组升高(P<0.05).PM2.5染毒72 h后,CREB表达水平随PM2.5浓度的升高而降低(P<0.01).可见,交通相关PM2.5可诱导人外周血淋巴细胞产生凋亡,且细胞内cAMP和CREB参与了凋亡的调控.     

土荆芥组培根分泌物对大豆根尖细胞的氧化损伤

采用生化分析方法,研究了土荆芥根系分泌物对大豆根尖细胞的氧化损伤.结果表明,在土荆芥组培根分泌物处理下,大豆根尖细胞O2.-和H2O2水平升高,丙二醛(MDA)含量增大,其中,100和1 000μg/mL处理组活性氧自由基(ROS)水平升高达到显著程度;随着处理时间延长,根尖细胞的超氧化物歧化酶(SOD)活性和过氧化物酶(POD)活性在1和10μg/mL处理组持续升高,而在100和1 000μg/mL处理组则呈先升高后降低的趋势.过氧化氢酶(CAT)活性变化规律表现出持续升高的态势,在处理24 h后达到最大.电泳分析结果显示处理未造成大豆根尖细胞产生DNA片段.土荆芥组培根分泌物未导致大豆根尖细胞凋亡.     

应用流式细胞术研究乳腺癌MCF-7细胞周期同步化

目的筛选出适宜的血清及秋水仙碱的作用浓度及时间,使乳腺癌MCF-7细胞分别达到G0/G1和G2/M期同步化。方法采用血清饥饿法诱导MCF-7细胞G0/G1同步化,秋水仙碱诱导细胞G2/M期同步化,流式细胞仪检测细胞各期分布情况。结果处理24 h后,1%血清浓度组G0/G1期细胞分别达到(72. 96±0.84)%,1. 0μg/mL秋水仙碱处理组G2/M期细胞分别占总细胞数(73. 67±1. 77)%。处理36 h后,1%血清浓度及秋水仙碱实验组细胞发生凋亡。结论MCF-7在血清浓度为1%处理24 h后完成G0/G1同步化,在1. 0μg/mL的秋水仙碱处理24 h后完成G2/M期同步化。     

白桦脂酸对Cx32组成的细胞缝隙连接功能的影响

目的:体外观察白桦脂酸对天然表达缝隙连接蛋白32(Cx32)的BRL-3A细胞的细胞缝隙连接(GJ)功能及Cx32蛋白表达水平的影响.方法:SRB法检测不同质量浓度白桦脂酸对BRL-3A细胞的毒性;细胞接种荧光示踪法观察不同质量浓度白桦脂酸对GJ功能的影响;Western blot方法检测白桦脂酸影响GJ功能的质量浓度对Cx32蛋白表达水平的影响.结果:白桦脂酸在0~1μg/m L质量浓度对BRL-3A细胞无毒性作用;白桦脂酸(0.01~1μg/m L)质量浓度依赖性地降低GJ功能,但对Cx32表达无影响.结论:白桦脂酸在0.01~1μg/m L质量浓度范围内,降低BRL-3A细胞的GJ功能;这种作用与Cx32蛋白的表达水平无关.     

血管段孵育和原代血管平滑肌细胞培养的比较

探讨微血管段孵育方法能否与原代平滑肌细胞培养一样检测蛋白表达,以用于初步的基础研究,解决原代培养耗时、不易存活的问题。分离大鼠肠系膜动脉三级以下分支,使用胶原酶和木瓜蛋白酶混合消化单个血管平滑肌细胞,获取的平滑肌细胞采用含20%胎牛血清的DMEM培养基进行培养。培养的平滑肌细胞经特异性的α-actin进行免疫组化鉴定;血管段孵育是在无菌条件下分离大鼠肠系膜动脉三级以下分支,培养基孵育72 h。分别使用不同浓度的尼氟灭酸(niflumic acid,NFA)孵育原代培养的平滑肌细胞和肠系膜三级分支血管段24 h,观察平滑肌细胞连接蛋白43(connexin43,Cx43)的变化。形态学和免疫组织化学鉴定表明,培养的原代细胞为血管平滑肌细胞。不同浓度NFA处理原代平滑肌细胞能够使Cx43表达量呈浓度依赖性下降,相对于对照组具有统计学意义(P0.01);不同浓度NFA处理血管段能够使Cx43的表达量也呈浓度依赖性下降,相对于对照组具有统计学意义(P0.01)。由此可知,观察平滑肌细胞特异性蛋白Cx43的表达情况,使用血管段孵育的方法检测结果与细胞培养的结果相似。血管段孵育简单易行,可以作为类似实验的初步研究。     

西兰花中异硫氰酸盐诱导HepG-2凋亡的研究

探讨西兰花中异硫氰酸盐(isoth iocyanates,ITCS)诱导HepG-2细胞凋亡作用及其可能机制.用不同质量浓度ITCS处理肝癌HepG-2细胞,通过SRB法、细胞形态学观察、流式细胞仪和激光共聚焦显微镜实验,观察ITCS对HepG-2细胞的抑制率和细胞凋亡的影响.结果:1、10、50和150μg/mL的ITCS作用于HepG-2细胞72 h后,ITCS可抑制HepG-2细胞的增殖,其IC50为15.824μg/mL;120μg/mL的ITCS作用HepG-2细胞24 h后,细胞出现早期凋亡细胞的形态;60、120、240μg/mL的ITCS作用于HepG-2细胞48 h后,可见细胞凋亡率分别为(16.6±2.8)%、(21.9±4.4)%和(70.2±5.3)%;15、30、60μg/mL的ITCS作用于HepG-2细胞24 h后,细胞内的Ca2 质量浓度升高,且随着ITCS给药剂量的增加而升高(P<0.05).ITCS能够促进人肝癌细胞系HepG-2细胞的凋亡,其作用机制可能与ITCS升高细胞内Ca2 质量浓度有关.     

大鼠精索静脉曲张对睾丸生精细胞Cx43表达的影响

目的探讨精索静脉曲张(VC)对青春期大鼠睾丸生精细胞Cx43的影响.方法部分结扎大鼠左肾静脉,建立精索静脉曲张模型.取雄性SD大鼠30只,随机分为2组,每组15只,分为对照组、精索静脉曲张组(手术组),每组中再分为3个亚组,每组5只,结扎持续时间为2,4,8周;达到相应的时间段后取各组大鼠左侧的睾丸,运用RT-PCR法检测Cx43及HIF-1α基因的表达,并在8周时通过Western-blot法检测Cx43及bcl-2蛋白表达水平.结果对照组在2,4,6周时Cx43及HIF-1α基因表达无明显变化;手术组在2,4,6周时HIF-1α基因表达水平提高,Cx43基因表达水平下降,与对照组相比,差异具有统计学意义(P0.05);蛋白检测结果表明:8周时手术组Cx43及bcl-2蛋白表达水平显著下降.结论精索静脉曲张可致大鼠睾丸组织缺氧,Cx43及bcl-2表达下调,并诱导睾丸组织生精细胞凋亡增加,进而影响睾丸生精功能.     

DBP对大鼠睾丸支持细胞内Ca2+、线粒体膜电位及Caspase活性的影响

目的通过测定DBP对大鼠睾丸支持细胞内Ca2+、线粒体膜电位及Caspase活性的影响,探讨DBP是否通过影响线粒体膜电位而引起支持细胞凋亡.方法建立支持细胞原代培养体系,将细胞分为0.1%DMSO(对照组)、1 mg/L(低剂量组)、10 mg/L(中剂量组)、100 mg/L(高剂量组),分别处理细胞24 h;荧光分光光度计测定支持细胞内Ca2+的浓度,流式细胞仪检测线粒体膜电位,酶标仪测定Caspase-9和Caspase-3的活性.结果与对照组相比,高剂量组中Ca2+浓度明显升高,差异具有统计学意义(P0.05),而低、中剂量组与对照组比较无统计学意义(P0.05).DBP导致的线粒体膜电位升高在中、高剂量组中具有统计学意义(P0.05),随着DBP浓度的增加,Caspase-9与Caspase-3的活性升高,差异均具有统计学意义(P0.05).结论 DBP能显著降低支持细胞线粒体膜电位,改变线粒体膜的通透性,进一步升高Caspase-9及Caspase-3的活性,并最终导致睾丸支持细胞凋亡.     

姜黄素对人膀胱癌细胞系T24体外侵袭的作用

目的探讨姜黄素(curcumin)对人膀胱癌细胞系T24体外侵袭能力及其作用机制.方法以不同浓度的姜黄素作用于膀胱癌T24细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率,Transwell法实验观察T24侵袭能力的变化,Western blot法检测MMP-2和VEGF蛋白表达的差异.结果姜黄素能有效抑制T24细胞的增殖,并抑制T24细胞的体外侵袭能力,呈时间-剂量依赖性(P0.05).20μmol/L和50μmol/L姜黄素作用细胞24 h后,MMP-2,VEGF蛋白的表达量下降(P0.05).结论姜黄素对T24细胞的增殖和侵袭能力有抑制作用,其机制可能与下调MMP-2和VEGF的蛋白表达有关.     

头孢曲松通过抑制Cx43磷酸化参与治疗创伤性颅脑损伤的机制

目的观察头孢曲松(CFX)通过调控与缝隙连接蛋白43(Cx43)表达在治疗创伤性颅脑损伤(TBI)的相关性机制。方法选取100只体重350～450g的4月龄的SD雄性大鼠,采用液压打击仪建立脑损伤模型,具体分组为:①假手术(sham)组、②治疗(TBI+CFX)治疗组、③甘珀酸(CBX)阻断(TBI+CFX+CBX)组、④溶媒(TBI+生理盐水)组及⑤损伤(TBI)组,每组20只。实验时间均设定为TBI后48 h。每组取10只大鼠进行行为学检测和脑组织含水量测定,另10只则获取海马区胶质组织通过蛋白免疫印记法(WB)法测定神经元缝隙连接蛋白40(Cx40)及磷酸化Cx43蛋白(p-Cx43)的变化、采用酶联免疫荧光(ELFA)检测神经元氧化应激因子NADPH氧化酶活性的变化。结果实验结果显示,采用CFX干预组神经损伤严重度评分(NSS)、脑水肿程度、腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶活性及海马胶质细胞Cx40、p-Cx43表达均溶媒组及损伤组明显下降(P 0.05)。而CBX可明显抑制上述CFX对Cx40、p-Cx43蛋白表达下调及降低NADPH氧化酶的活性的作用(P0.05)。结论 CFX可能通过抑制Cx43蛋白磷酸化和Cx40蛋白异常增多,从而抑制氧化应激反应以达到脑损伤缓解作用。     

Effects of angiotensin II on connexin 43 of VSMCs in arteriosclerosis

Objective: To observe the effect of angiotensin II (Ang II) on expression of gap junction channel protein connexin 43 (Cx43) in the proliferation process of vascular smooth muscle cells (VSMCs) during the early stage of arteriosclerosis. Methods: Thirty-two adult male rabbits were randomly divided into 4 groups. Rabbits in Group A were fed common diet while others in Groups B, C, and D were fed high-cholesterol diet. Losartan (10 mg/(kg·d)) and ramipril (0.5 mg/(kg·d)) were added in the diet of Groups C and D, respectively. The animals were sacrificed after 8 weeks and abdominal aortas were removed and dissected. The expression of Cx43 was assayed using RT-PCR and Western Blotting analysis. Results: Cx43 was increased markedly in both protein and mRNA level in Groups B, C, and D fed high-cholesterol diet compared with that in control group (P<0.01). Cx43 level in losartan or ramipril treated groups was higher than that in control group (P<0.01, P<0.05), but lower than that in high-cholesterol diet groups (P<0.05, P<0.01). Conclusion: Cx43 level was upregulated in VSMCs during early atherosclerosis. Losartan and ramipril can inhibit the expression of Cx43.     

缝隙连接阻断剂18α-甘草次酸对大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用

为探讨缝隙连接是否参与抑制大鼠血管平滑肌细胞的增殖及可能的分子机制,本研究以原代及传代培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞为模型,实验分2组：对照组、缝隙连接阻断剂18α-甘草次酸（18α-—Glycyrrhetinicacid,18Q—GA）组。MTT法及流式细胞术检测细胞的增殖活性,染料示踪分子传递法（划痕标记染料传输法）检测细胞的缝隙连接功能,Westernblotting法检测细胞中缝隙连接蛋白40（Cx40）和43（Cx43）表达。结果显示：（1）与对照组相比,18α-GA组MTT法测得的氏,。值及细胞周期S期比例均降低（P〈0．01）,细胞增殖活性减弱;（2）与对照组相比,18α-GA组罗氏黄荧光染料传递百分数显著降低,缝隙连接功能明显减弱（P〈0．01）;（3）与对照组相比,18rGA组Cx40和总Cx43蛋白表达无显著差异（P〉0．05）,磷酸化Cx43与非磷酸化Cx43的比值显著降低（P〈0．01）。由此可知,18α-GA可能主要通过下调血管平滑肌细胞磷酸化Cx43蛋白表达,引起缝隙连接通讯功能减弱,从而抑制了血管平滑肌细胞的增殖。     

Losartan reduced connexin43 expression in left ventricular myocardium of spontaneously hypertensive rats

Objective： To assess the effect of angiotensin II type 1 （AT1） receptor antagonist losartan on myocardium connexin43 （Cx43） gap junction （GJ） expression in spontaneously hypertensive rats （SHRs） and investigate possible mechanisms. Methods： Sixteen 9-week-old male SHRs and 8 age-matched male Wistar-Kyoto （WKY） rats were included in this study. SHRs were randomly divided into two groups to receive losartan at 30 mg/（kg·d） by oral gavage once daily for 8 weeks （SHR-L） or vehicle （0.9% saline） to act as controls （SHR-V）; WKY rats receiving vehicle for 8 weeks served as normotensive controls. At the end of the experiment, rats were sacrificed and the hearts were removed. Expressions of Cx43 and nuclear factor-kappaB p65 （NF-κB p65） proteins in all three groups were observed and further investigations on the effect of angiotensin II type 1 receptor antagonist losartan （30 mg/（kg·d）, 8 weeks） on Cx43 expression were conducted with Western blot and immunohistochemistry. NF-κB p65 protein in nuclear extracts was determined by Western blot. Results： Left ventricular （LV） hypertrophy was prominent in SHRs, Cx43 and NF-κB p65 protein expressions were obviously upregulated and Cx43 distribution was dispersed over the cell surface. Treatment with losarton reduced the over-expressions of Cx43 and NF-κB p65 in LV myocardium. The distribution of Cx43 gap junction also became much regular and confined to intercalated disk after losartan treatment. Conclusion： Cx43 level was upregulated in LV myocardium of SHR during early stage of hypertrophy. Angiotensin II type 1 receptor antagonist losartan prevented Cx43 gap junction remodeling in hypertrophied left ventricles, possibly through the NF-κB pathway.     

右美托咪定对全麻腹腔镜手术术后CO_2蓄积患者复苏阶段的影响

目的观察右美托咪定对全麻腹腔镜手术术后CO2蓄积患者复苏阶段的影响。方法择期全麻行腹腔镜手术的患者,术毕前约40min测动脉血气,选取其中PaCO270⁹0mmHg,pH<7.30的患者40例,随机分为对照组(N组)和右美托咪定组(D组)各20例。在手术结束前约30 min,N组患者给予0.9%氯化钠10mL静脉缓注,D组患者用右美托咪定配成4μg/mL浓度以0.8μg/kg剂量缓慢静注。记录两组患者在拔管时(T0)、拔管后5min(T1)、拔管后30min(T2)的心率、血压及Riker评分。两组患者从拔管开始到恢复满意可以送回病房所需时间(T3)。结果D组患者在T0、T1、T2时的心率、血压及Riker评分与N组患者比较差异均有统计学意义(P<0.05)。两组患者从拔管开始到恢复满意可以送回病房所需时间的比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论腹腔镜手术中,在CO2蓄积致高碳酸血症患者的麻醉复苏阶段,右美托咪定的作用是安全有效的。     

LY333531对高糖高脂下系膜细胞分泌细胞外基质的影响

探讨PKCβ抑制剂(LY333531)对高糖高脂环境下系膜细胞分泌细胞外基质(ECM)的影响,单独培养人肾小球系膜细胞,实验分为对照组、LY333531组、高糖高脂组、高糖高脂+LY333531组.首先采用qRTPCR检测PKCβI的表达,然后通过ELISA法检测细胞上清液Col IV、Fn的含量.结果显示,高糖高脂组相较于对照组,PKCβI mRNA的表达水平明显增加(P0.05),LY333531可以明显抑制PKCβI的表达(P0.05);高糖高脂组相较于对照组,细胞上清液Col IV、Fn含量明显增加(P0.05),而这种作用可被LY333531所抑制(P0.05).表明高糖高脂可通过促进系膜细胞PKCβI表达从而诱导ECM的分泌,增加肾纤维化发生的风险,而LY333531可明显抑制这种作用.