牛病毒性腹泻/黏膜病病毒(BVDV/MDV)的分子生物学研究进展

牛病毒性腹泻/粘膜病病毒(Bovine viral diarrhea virus/mucosal disease virus,BVDV/MDV)是引起牛病毒性腹泻/粘膜病的病原,与猪瘟病毒(CSFV)、羊边界病病毒(BDV)同属.其基因组由5‘非翻译区(5‘UTR)、一个大的开放阅读框(ORF)和3‘非编码区(3‘NCR)组成,编码结构蛋白P14、gP48、gP25、gP53及几种非结构蛋白.下面就BVD/MD的分子生物学研究进展做一综述,以便给该病的进一步防制奠定理论基础.     

牛病毒性腹泻-黏膜病的持续性感染

牛病毒性腹泻-黏膜病(BVD/MD)是一种较为特殊的病毒性传染病,除具有传染病的一般特征外,与其他绝大多数传染病的重要区别之一是产生持续性感染(PI).PI由非致细胞病变型(NCP)毒株所引起的,PI动物往往血清阴性,机体呈带毒状态并不断向外排毒,从而促进了本病的流行和蔓延,给养牛业造成了极大的危害.笔者对持续性感染原因、机理、危害、检测和防制等作简要综述.     

新疆石河子地区牛病毒性腹泻病毒的分子流行病学调查

根据GenBank中公布的牛病毒性腹泻病毒（BVDV）5’UTR保守区基因序列,设计3对引物,应用逆转录一聚合酶链反应（RT-PCR）检测方法对采白石河子地区3个场的64份牛全血样品进行核酸检测及测序。结果表明：BVDV阳性率为39．06％（25／64）,其中有22对母子对应样品,母牛阳性率为40．91％,犊牛为45．45％,提示新疆石河子地区BVDV垂直感染较严重。9头牛表现临床症状,阳性率为22％,其余为临床健康牛,阳性率为41．81％,数据显示新疆石河子地区奶牛BVDV隐性感染严重。测序得到2条不同的序列,经5’UTR区域核酸序列同源性比较和系统发生分析表明2株病毒与VEDEVAC（匈牙利弱毒疫苗株）亲缘关系最近,同源性达96．2％-100％,用DNASTAR软件进行基因与系统发生进化关系分析属于BVDV-1b基因亚型,未检测到BVDV-2型病毒。提示新疆石河子地区BVDV流行株为BVDV—1b亚型,且经生物型鉴定,所测阳性样品为非致细胞病变型。本研究可为今后的流行病学研究和疫苗应用等防制措施提供依据。     

牛病毒性腹泻病毒GSTZ株E1基因原核表达载体的构建及表达

为研究牛病毒性腹泻病毒的囊膜糖蛋白E1的抗原性,参考了Oregon C24V BVDV毒株的基因组序列(AF091605.1),并设计一对特异引物(上游引物5’-CCC GGA TCC ATG GCC TCT CCC TAC TGT-3’,下游引物5’-GGG CTC GAG TTA CCC TTG TGC TCC TGT T-3’),利用RT-PCR从病毒基因组中扩增E1基因609 bp全长片段,测序结果表明,与C24V株核苷酸同源性达100%.扩增产物经BamHI和XhoI双酶切,亚克隆至原核表达载体,双酶切鉴定表明成功构建了重组表达载体pET-32a(+)-E1.重组表达载体转化BL21(DE3)宿主菌,IPTG诱导表达,经SDSPAGE和Western-blot检测,成功诱导表达出25ku E1蛋白.实验结果为进一步研究BVDVE1蛋白的功能提供了参考.     

牛疱疹病毒1型检测技术及疫苗研究进展

牛传染性鼻气管炎(Infectious bovine rhinotracheitis,IBR)是由牛疱疹病毒I型(Bovine herpes virus-1,BHV-1)引起的牛的一种急性、热性、接触性传染病.该病毒的危害性在于病毒侵入牛机体后,潜伏在一些特定的部位,致使病毒持续性感染,病牛长期甚至终身带毒,给控制和消灭本病带来很大困难,给全球养牛业造成了重大经济损失.文章就BHV-1分子生物学、诊断及各类疫苗进行阐述,旨在为该病的进一步研究提供理论参考.     

福建龙岩规模化猪场BVDV感染的血清学调查

为了解闽西地区规模化猪场牛病毒性腹泻病毒(BVDV)流行情况,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)对闽西地区18个猪场送检猪血清进行BVDV感染的血清学调查,同时检测这些猪血清的猪瘟抗体,结果表明:规模化猪场BVDV的感染比较严重,血清阳性率为28.6%,猪场阳性率达到94.4%。种猪、育肥猪、保育猪、哺乳仔猪的BVDV的血清阳性率分别为38.5%、17.3%、2.1%、27.4%,种猪的阳性率明显高于生长猪。BVDV抗体与猪瘟抗体的相关性分析结果表明在猪瘟抗体阳性猪群中的BVDV感染率较高,某些猪瘟抗体阴性猪群中也发现BVDV感染的现象。     

猪瘟弱毒苗预防牛病毒性腹泻/粘膜病的短期安全性与微量中和试验

作者用猪瘟弱毒苗预防牛病毒性腹泻／粘膜病的短期安全性和中和抗体效价进行了测定,动物短期安全性试验结果表明：用大剂量(每头10～25个免疫剂量单位)猪瘟弱毒苗注射犊牛、成年奶牛、怀孕母牛和牦牛后,对体温、食欲、生产性能及妊娠牛的胎儿均无不良影响,微量中和试验结果表明：成年奶牛每头注射6个免疫剂量单位的猪瘟弱毒苗15d后,有50％产生保护性中和抗体;每头注射10个免疫剂量单位的猪瘟弱毒苗15d后,有83．3％产生保护性中和抗体;小牛每头注射3个免疫剂量单位的猪瘟弱毒苗15d后,有50％产生保护性中和抗体;抗体产生的滴度与免疫剂量成正比,上述结果表明用猪瘟弱毒苗预防牛病毒性腹泻／粘膜痛是安全有效的,具有实用价值。     

牛病毒性腹泻病毒牦牛株E0基因生物信息学分析及原核表达与抗原性检测

为研究牦牛BVDV E0蛋白的生物信息学及抗原性, 本研究对本实验室克隆并测序的牦牛病毒性腹泻病毒E0基因进行了生物信息学分析;同时用含有酶切位点、起始密码子、终止密码子的引物重新扩增E0基因, 并连接PMD18-T载体, 经BamHⅠ和HindⅢ双酶切后, 将获得的E0片段克隆至PET-28A原核表达载体, 构建重组质粒并转入JM109.酶切、质粒PCR鉴定正确后转入rosetta(DE3)菌进行诱导表达.经SDS-PAGE检测结果显示目的基因获得了较高的表达, 表达的融合蛋白约33ku, 经western-blotting检测表明目的蛋白具良好的有抗原性.     

牛病毒性腹泻病毒致病分子机制的研究进展

牛病毒性腹泻病毒(BVDV)常侵害牛等多种动物,引起一种极为复杂,呈多种临床症状的牛病毒性腹泻-黏膜病,严重危害全球畜牧业的健康发展.BVDV致病机理非常复杂,给该病的防控和净化带来极大的困难.文章从BVDV分子生物学、病毒感染细胞、免疫逃逸、细胞凋亡等方面进行综述,对BVDV与宿主相互作用研究进行了展望,有助于阐明BVDV致病及产生持续性感染的机制.     

牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的克隆、 表达及多克隆抗体制备

利用原核系统表达牛病毒性腹泻病毒（BVDV）E2蛋白, 制备鼠源多克隆抗体. 通过MDBK细胞增殖病毒, 提取RNA, RT-PCR扩增E2全长基因, 进行生物信息学分析后设计截短引物, 构建优化表达载体pET-30-E2, 转化BL21, 用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达; 用SDS-PAGE电泳分析蛋白表达, 纯化蛋白联合弗氏佐剂免疫小鼠; 用酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定抗体效价水平, 用免疫印迹(WB)和免疫荧光(IFA)法验证抗体特异性. 结果表明: E2基因在大肠杆菌中成功表达, 蛋白大小为32 000, 不可溶形式表达, 表达量为0.4 mg/mL; 多克隆抗体效价为1∶256 000, 可特异性结合重组蛋白及细胞中的病毒.