镍离子亲和层析介质的制备及其用于组氨酸标记蛋白质的纯化

以交联琼脂糖微球为基质,通过环氧氯丙烷活化,偶联亚胺二乙酸并螯合Ni2+,制备得到一种镍离子亲和层析介质.结果发现,在强碱条件下环氧活化率达到了38.0 μmol/mL,最终Ni2+配基密度达到了30.9 μmol/mL,偶联效率为81.3%.利用得到的镍离子亲和介质对基因工程大肠杆菌表达的组氨酸标记3-羟基丁酮还原酶进行了一步层析纯化,酶活回收率达到了58.8%,纯化倍数为2.1,蛋白纯度在85%左右,纯化效果与常用商品介质基本相当.     

免疫磁珠的制备及其在捕获乳腺癌患者白细胞中的应用

应用生物素-亲和素系统制备免疫磁珠,考察了不同条件对制备免疫磁珠的影响.结果表明:当反应温度为4℃、亲和素浓度为0.2mg/mL、PBS pH=5.8、反应时间为2h时,磁性微球的亲和素载量为25~55mg/g;BNHS与抗体质量比1∶7时,生物素与抗体的结合率最高;亲和素与生物素化抗体摩尔比在1∶3时,亲和素与生物素的偶联率最高.抗CD45免疫磁性微球的白细胞去除率高达78%,磁珠回收率达98%,可用于进一步捕获乳腺癌外周血循环肿瘤细胞.     

谷胱甘肽亲和层析介质的制备条件及其层析特性研究

以琼脂糖凝胶4FF(Sepharose 4 Fast Flow)为基质,1,4-丁二醇二缩水甘油醚(BDGE)为活化剂,通过活化、偶联谷胱甘肽(GSH),得到GSH亲和层析介质.实验结果表明:活化及偶联的优化条件为10,m L基质加入0.42,g Na OH、15,m L二甲基亚砜(DMSO)、15,m L BDGE,反应温度为40,℃,反应时间为6,h;偶联溶液p H 6.5,反应温度为37,℃,反应时间为24,h.在此条件下,环氧基修饰密度可达60~65,μmol/m L;所制备的介质载量为(14.19±0.98)mg/m L.以此介质对谷胱甘肽S–转移酶(GST)、融合蛋白GST-Bcl-2、GST-Ald、GST-PTPN12进行纯化,结果表明,该介质纯化效果较好、载量高、稳定性能较好,可重复使用.     

壳聚糖金属螯合亲和吸附剂的制备

目的 研究利用壳聚糖为载体、戊二醛为交联剂、亚氨基二乙酸(IDA)为螯合配基制备金属螯合亲和吸附剂的条件.方法 戊二醛对壳聚糖进行交联,环氧氯丙烷法进行载体活化和螯合配基的偶联.键合IDA后与Cu2+螯合.结果 采用0.22 mL/g(壳聚糖)戊二醛对壳聚糖进行交联.交联壳聚糖加入0.4 mol/L NaOH与体积分数为0.5的二甲亚砜的混合溶液中,充分搅匀,25℃下缓慢滴加1.2 mL(体积分数为0.3)的环氧氯丙烷,升温至40℃,170 r/min下振荡反应3h进行活化.之后,以4.26 g/g(壳聚糖)浓度的IDA进行连接反应,65℃下反应18 h.结论 采用优化条件制备的金属螯合亲和吸附剂对Cu2+有较大螯合量,可用作固定化金属亲和层析的固定相.     

磁性琼酯糖亲和吸附剂的合成与应用

采用反相悬浮包埋技术合成了粒径在43-295μm之间的磁性琼脂糖微球。磁性琼脂糖微球经环氧氯丙烷活化后，分别键合6-氨基已酸、氨基乙酸和乙二胺为间隔臂，用水溶性碳二亚胺为缩合剂，分别偶联对氨基苯甲脒、l-精氨酸甲酯和胍基已酸，制备了3种磁性亲和吸附剂，并用于尿激酶粗品的分离纯化。测定了活性回收率和比活提高倍数，并与以磁性葡聚糖为基质的磁性亲和吸附剂对尿激酶的纯化效果进行了对比。     

几种高分子微球与兔免疫球蛋白的偶联及偶联条件的优化

利用化学偶联法,将8种不同性质的高分子微球与自制的兔免疫球蛋白偶联,根据偶联量大小,考虑微球的性价比,选择出合适的高分子微球产品.实验对200目的氨基硅胶微球的偶联条件作进一步摸索.结果表明,当偶联时间6~8 h,EDC浓度10 g/L,反应pH为5.0,温度为4℃,蛋白质初始浓度为0.7 g/L时,兔免疫球蛋白的偶联量达到6 mg蛋白/g微球,黄曲酶毒素B1的柱回收率在90%以上,达到放大生产要求.     

AB-8大孔树脂对黑米花色苷的吸附性能研究

利用大孔树脂分离纯化黑米花色苷,得到最佳纯化条件.在最佳提取条件下得到黑米花色苷粗提液,利用AB-8大孔树脂对其进行纯化,研究各个因素对吸附率和解吸率的影响.静态吸附平衡时间为4 h,吸附液pH值为2.0,解吸时间为1.5 h,60%乙醇洗脱效果最佳.动态吸附上样液质量浓度0.5 mg/mL、流速为1.0 mL/min时吸附效果最好,解吸流速为1.0 mL/min、60%乙醇洗脱剂解吸效果最佳.在最佳纯化工艺条件下纯化后的花色苷质量比提高了大约7倍左右,说明AB-8大孔树脂对黑米花色苷具有较好的分离纯化效果.     

细胞培养用琼脂微球的制备与初步应用

用4%的琼脂溶液作为水相,环己烷为油相,司盘-80为乳化剂,采用乳化分散法制备了琼脂微球,再通过化学交联法固化.用DEAE-HCl修饰了微球表面的电荷密度,并通过正交试验优化了改性工艺,最终制得细胞培养用琼脂微球.通过对比研究了Cytodex1微载体与琼脂微球的表征及细胞培养效果.结果显示,最优改性工艺为:加入微球2倍体积4.5 mol/L的Na OH溶液,再加入微球2倍体积2.5 mol/L的DEAE-HCl溶液,在搅拌状态下加热至60℃,密闭反应4 h.最终制得琼脂微球表面电荷密度为4.00 mmol/100 g,与Cytodex1微载体的4.05 mmol/100g几乎相当.静置培养时,四种细胞在两种微球上的贴壁率和伸展性各有优劣.悬浮培养BHK-21细胞时,Cytodex1微载体表面出现一定程度的"空球"现象,而琼脂微球表面细胞较均匀地伸展.培养至120 h时,两种微球表面的细胞均达到4.5×107cells.继续培养,Cytodex1表面的细胞数开始下降,而琼脂微球表面仍增殖至168 h时才开始下降.综上所述,自制琼脂微球具备作为细胞培养用材料的条件.     

改良Lowry法和Bradford法测定O型口蹄疫病毒灭活抗原总蛋白含量的比较

通过采用考马斯亮蓝法(Bradford)和改良Lowry法,对O型口蹄疫病毒灭活抗原总蛋白浓度测定结果的比较表明,改良Lowry法能够更加精确、真实地反映O型口蹄疫病毒灭活抗原总蛋白含量.     

废酵母/壳聚糖微球的制备及其对活性红4的吸附

以壳聚糖为载体,用废酵母为原料,制备了复合吸附微球,以溶液中活性红4（RR4）为吸附对象对所制备微球的吸附性能进行了评价.结果表明：制备液中壳聚糖含量为3%（质量分数）,废酵母添加量7.5 g/L,交联剂戊二醛（25%,质量分数）量0.5 mL/L,交联时间2 h条件下,制得湿粒径为3.0-3.5 mm的复合吸附微球,其吸水量9倍左右,膨胀率15-20倍.微球在酸性条件下对RR4的吸附量大,常温下需22 h达到吸附平衡,等温实验数据对Freundlich等温方程的拟合情况良好,pH=2时,微球对RR4的最大吸附量为72.32 mg/g（以微球湿重计）.