阿维链霉菌中转录因子AveR对阿维菌素生物合成的正调节

aveR是阿维链霉菌NRRL 8165阿维菌素生物合成基因簇中唯一可能的调节基因.为了验证aveR是否参与阿维菌素生物合成基因的转录调节,构建了用于敲除aveR的基因置换质粒pJTU2530,并通过接合转移引入了阿维链霉菌.通过筛选ThioSAprR转化子,经聚合酶链式反应(PCR)扩增验证,获得了aveR内部1 320 bp区域被阿泊拉霉素抗性基因aac(3)IV替换的突变株ZD10.高压液相色谱检测表明,与野生型菌株相比,突变株ZD10不再产生阿维菌素,并且ZD10中寡霉素的产量明显高于野生型菌株.进一步的反转录PCR(RT-PCR)分析表明,与野生型菌株相比,突变株ZD10的聚酮合酶基因aveA3不再转录.结果显示,AveR是阿维菌素生物合成的正调节因子,通过调节结构基因的转录表达来影响阿维菌素的产生.     

阿维链霉菌中一个双组分调控系统SAV931/932功能初探

双组分调控系统是链霉菌次级代谢产物生物合成调控中的一种重要调控机制。基于生物信息学分析,位于阿维菌素生物合成基因簇上游的双组分系统SAV931/932可能对阿维菌素合成起调控作用。敲除SAV931/932导致阿维菌素的产量提高25%以上,且菌体在发酵前期生长加快。RT-PCR显示阿维菌素合成结构基因aveA1和aveA3及调控基因aveR的转录水平均上调,说明此双组分系统在一定程度上抑制了阿维菌素的生物合成。研究表明,双组分调控系统SAV931/932可能对阿维菌素合成起负调控作用,这为研究阿维链霉菌次级代谢调控以及改善阿维菌素生物合成提供了借鉴。     

具有杀虫效果的生物肥料的研制

具有杀虫效果的生物肥料是一种集药效和肥效为一体的生物制剂.本项目研究了胶质芽孢杆菌、圆褐固氮菌和阿维链霉菌的发酵工艺,并研制出一种新型生物肥料.该产品的各项技术指标均符合农业部有关肥料的质量标准,既具有较好的增产作用,同时具有较强的杀虫效果.     

宇宙飞船搭载阿维链霉菌分离株N-5-6的代谢规律

通过在30 L自控发酵罐上对经航天育种后的阿维链霉菌菌株N-5-6的发酵过程进行研究,结合发酵过程中pH值、溶氧、残氮和残糖质量浓度、总效价等参数以及菌体形态的变化,分析了发酵基本特征,并确定184 h为最佳放罐时间,为进一步发酵条件优化和发酵控制研究奠定了基础.     

自溶链霉菌遗传操作研究

放线菌新种自溶链霉菌能够产生一种称为自溶霉素的抗肿瘤活性产物.虽然自溶霉素具有成为抗肿瘤药物的良好前景,但是自溶链霉菌遗传操作方法的缺乏严重阻碍了对自溶霉素生物合成的研究.本工作对自溶链霉菌中各种遗传操作方法进行了探索.优化了PCR扩增的反应体系和程序,建立了外源DNA导入的方法,确立了构建基因敲除突变株的最佳方案.此外,也摸索了自溶霉素发酵和HPLC检测的适宜条件.利用所建立的方法对自溶链霉菌基因almRⅠ和almRⅡ的功能进行了初步研究,结果表明它们在自溶霉素生物合成过程中起正调控作用.自溶链霉菌遗传操作方法的建立为进一步开发利用放线菌资源奠定了基础.     

阿维菌素生物合成

阿维菌素是迄今发现最有效的杀昆虫剂,杀螨虫剂和杀寄生虫剂之一.本文综述了其生物合成的途径、生物合成的基因簇.通过对合成基因进行不断的分离与测序,现在基本上对每一步合成途径的基因及编码的酶都有所了解.这使得人们可阻断特定基因表达构建新型菌株,以增加有效组分及新型的抗生素的产出.另外还可通过化学修饰的方法来提高阿维菌素活性.     

1.8%害极灭防治螨类的药效试验

害极灭(Agrimec)是阿维菌素系列生物农药,适用于防除多种作物的螨类和害虫.有效成分是爱比菌素(Abamectin),是一种从土壤微生物阿佛曼链霉菌(Streptomyces avermitilis)中提取的天然物质.因爱比菌素能渗透进作物叶片组织中,在其间形成药囊长期贮存,因而能长期发挥效力.     

前体物质对阿维菌素生物合成的影响

研究了前体物质添加对阿维菌素生物合成的影响。结果表明，丙酸钠是比乙酸钠更佳的阿维菌素合成前体物质；发酵培养48h，在发酵培养基中添加10mmol／L的丙酸钠，至发酵培养96h时阿维菌素发酵单位最高，可达5157．89μg/mL；与不添加前体物质相比，阿维菌素发酵单位提高了105．94％。     

六种生物农药对扶桑棉粉蚧的防效比较

比较6种生物农药对扶桑棉粉蚧的防治效果。结果表明,施药5d后和10d后,阿维矿物油(Abamectin and Mineral oil)、阿维菌素乳油(Abamectin EC)、苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis)3种生物农药的防效分别为93.5%、90.1%、85.6%和97.8%、84.8%、91.4%,其中阿维矿物油和阿维菌素乳油表现出良好的速效性,而阿维矿物油和苏云金杆菌具有良好的持效性。苦参碱(Matrine)、棉铃虫核型多角体病毒(Heliothis armigera Nuleopolyhedrovirus,Ha NPV)、印楝素(Azadirachtin)防治的防效、速效性和持效性都相对较差。在防治应用中,建议推荐阿维矿物油、阿维菌素乳油、苏云金杆菌3种生物农药,同时在实际防治过程中,应注意针对不同的虫态适当调整用药浓度和施药次数,以达到理想的防治效果。     

链霉菌S1抑菌活性及其对植物病害的防治

为了探明链霉菌S1的抑菌活性及其对植物病害的防控作用,通过抑菌圈法研究了链霉菌S1对不同病原菌的抑制作用并分析了链霉菌S1是否合成几丁质酶和葡聚糖酶,筛选了链霉菌S1的最佳发酵培养基、发酵时间和最佳接种量,进一步优化发酵培养条件。通过温室防效实验,研究了链霉菌S1发酵液对桃核腐病和番茄根结线虫(Meloidogyne incognita)的防治作用。结果表明:链霉菌S1对多种病原菌有较好的抑菌作用,其中对桃褐腐病原真菌(Monilinia fructicola)和平菇褐斑病原细菌(Pseudomonas tolaasii)的抑制效果最佳。链霉菌S1能够合成几丁质酶,不能合成葡聚糖酶。链霉菌S1的最佳发酵培养基为G117,最佳发酵时间为3 d,最佳接种量为8%。链霉菌S1的发酵上清液和发酵液对桃核腐病具有显著的防治作用,防效可到达80. 66%。发酵代谢产物对番茄根结线虫的杀线活性最高可达90%,发酵原液对番茄根结线虫的防治效果最高到达71. 02%。可见链霉菌S1具有较好的防治作用,为植物病害生物防治提供了优良的菌种资源。     

环境因子组合对甲氰·阿维杀螨活性的影响

通过测定不同环境因子组合下甲氰·阿维对朱砂叶螨的毒力效应,确定环境因子对药剂毒力及增效作用的影响.结果表明:温度是影响单剂及复配剂毒力的主导因子,阿维菌素和甲氰·阿维复配剂的毒力呈正温度效应,甲氰菊酯的毒力呈负温度效应;复配剂的增效作用在不同环境因子组合中变化不大,常规条件下筛选的最佳配比的复配剂甲氰.阿维Ⅱ在本实验中的不同环境组合下,仍然为最佳配比.     

链霉菌酯酶研究进展

酯酶是一类催化酯键水解和形成的酶类,主要包括脂肪酶和羧酸酯酶.作为生物催化剂,酯酶具有重要的应用价值并被广泛应用于工业领域.链霉菌富含丰富的、生物学特性多样的酯酶.本文对链霉菌酯酶的表达及分泌调节、酶学性质及晶体结构、筛选及发酵生产三个方面进行了综述,以期引起人们对于链霉菌酯酶研究的兴趣.     

阿维啶虫乳油防治苹果害螨的田间药效试验

用杀虫杀螨剂4%阿维啶虫乳油进行了苹果山楂叶螨、二斑叶螨的田间试验,结果表明,阿维啶虫2500～3500倍液对苹果山楂叶螨的防治效果为59.2%～96.8%,阿维啶虫2500～3000倍液对苹果二斑叶螨的防治效果为63.95%～85.3%,与其他常用杀螨剂阿维菌素和扫螨净的效果相当。     

一株高产抗菌活性物质链霉菌的初步分类鉴定

对一株土壤中筛选出的可以产抗菌活性物质的链霉菌进行了研究，测定了该菌的抗菌谱，发现该菌株对多种植物病原性真菌及细菌有拮抗作用，但对植物病原性真菌的抑制效果低于植物病原性细菌.通过形态特征、培养特征、生理生化特性及抑菌谱等系列比较，发现该链霉菌菌株与链霉菌属的黑胡桃链霉菌(Streptomyces nogalater)的特征基本相符；通过16S?rDNA序列比对，发现该菌株16S?rDNA与黑胡桃链霉菌的16S?rDNA同源性达99％.根据多项分类原则和系统进化树的构建分析，将该菌株暂归入黑胡桃链霉菌类.     

新霉素研究进展

新霉素是由新霉素链霉菌产生的氨基糖苷类抗生素,主要与细菌核糖体30s亚基结合,抑制细菌合成蛋白质,且对G 、G-及结核杆菌等都具有抑制作用.不过由于对耳、肾毒性大限制了其使用.当前,新霉素作为临床上外用和少量口服以及国内外最常用的兽用抗生素之一,需求急剧增长.本文就新霉素研究现状、生物合成、检测手段及应用进行了概述.     

Sanglifehrin A产生菌Streptomyces flaveolus DSM 9954遗传转化系统的建立

Sanglifehrin A的产生菌淡黄色链霉菌Streptomyces flaveolus DSM 9954,通过筛选,得到其菌丝培养基为TSB, 生孢培养基为ISP-4,抗性实验显示淡黄色链霉菌Streptomyces flaveolus DSM 9954对所选抗生素都较敏感. 利用原生质体转化和接合转移都成功地构建了两种遗传转移系统,并且从接合转移成功的链霉菌转化子中回收质粒pKC 1139,经EcoR Ⅰ单酶切电泳,验证了质粒确实通过接合转移从大肠杆菌转移至宿主链霉菌, 这为研究Sangl     

聚合酶链式反应递缩基因组文库以克隆抗生素生物合成基因簇

在克隆阿维菌素(avermectin)生物合成基因簇的过程中,探索出了一条运用聚合酶链式反应(PCR)扩增技术对链霉菌基因组文库进行递缩法筛选、以克隆抗生素生物合成基因簇的新方法.依次以96孔培养板整板混合质粒、单排混合质粒和单个菌落为模板进行PCR扩增,以逐步递缩的方式定位包含目的基因的克隆.结果表明,与传统的菌落原位杂交方法相比,该方法具有简单、快捷、准确率高等优点.     

厦门霉素生物合成基因簇在白色链霉菌及吸水链霉菌FR-008中的异源表达

将携带有厦门霉素生物合成的整合质粒p LMO09404,通过供体菌大肠杆菌ET12567(p UZ8002)与受体菌白色链霉菌及吸水链霉菌FR-008进行接合转移,将得到的接合转移菌株经PCR验证后进行发酵,发酵液经HPLC和质谱检测.结果显示,厦门链霉菌来源厦门霉素基因簇可以在白色链霉菌及吸水链霉菌FR-008中异源表达.     

链霉菌属一新种的多相分类

 从云南西双版纳分离到的1株中温放线菌N-98-1272(以下简称1272).对其形态,生理生化特性,细胞壁化学组分以及16SrDNA序列进行了研究分析,并与链霉菌属的已知种进行了比较,认为这是链霉菌属的1个新种,命名为版纳链霉菌(Streptomyces bananensis sp.nov.).     

多醚类化合物的研究和开发

由于世界各国对多醚类的化合物不断进行研究和开发,它的应用领域正在不断地扩大,尤其是通过微生物发酵产生的多醚类化合物,至今已经发现有200多种.它们大部份是由链霉菌发酵所产生的,其中尤其是吸水链霉菌、白色链霉菌是产生多醚类化合物最常见的产生菌.