油菜转Bt基因研究

从以下几方面对油菜转Ｂｔ基因植株进行了研究：Ｒ１、Ｒ２代的Ｋｍ抗生，Ｒ０、Ｒ１代的Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交，Ｒ０代的抗虫试验以及Ｒ０代的酯酶活力测定。实验结果分别是：经Ｋｍ抗性试验，芥菜型油菜Ｒ１代在１２个无性系中有１０个无性系符合孟德尔单基因分离的遗传规律，Ｒ２代在７个无性系中有６个符合这一规律。     

转基因水稻纯系对褐飞虱的抗性研究

利用基因枪法将含潮霉素抗性基因、ＧＵＳ报告基因和雪花莲凝集基因的２个质粒ｐＷＲＧ１５１５和ｐＲＳＳＧＡ１共同转化粳稻品种鄂宜１０５的成熟胚诱导的愈伤组织,从轰击的１５２块愈伤组织中共再生出２６株独立转基因植株,ＰＣＲ／Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹法分析发现,７３％的转基因植株含有所有３个外源基因,遗传分析证实外泊基因在转基因植株后代中以孟德尔方式遗传,从其Ｒ１代亲本为孟德尔３：１方式遗传的Ｒ２代中,鉴定出     

nptⅡ基因在芥菜型油菜中的遗传规律

研究了转基因油菜Ｒ０、Ｒ１、Ｒ２代的Ｋｍ抗性。试验结果表明：芥菜型油菜Ｒ０的１，５，６，７，８，１０号无性系可抗Ｋｍ５０ｍｇ／Ｌ，其余的均抗Ｋｍ３５ｍｇ／Ｌ。Ｒ１种子在Ｋｍ２０ｍｇ／Ｌ的生根培养基上进行生根抗性试验，生根与不生根的比例经适合性检验（ｘ２检验）有１０个无性系符合孟德尔单基因分离的遗传规律，只有两个无性系不符合这一规律，出现了较高的抗性苗比例（３４：２；４０：６）。Ｒ２代共做了７个单株的种子抗性试验，其中６个单株的种子出现３：１的分离比，一个单株没有发生分离，种子全部可抗Ｋｍ。     

微弹射击将大麦黄矮病毒外壳蛋白基因转入小麦获可育植株

以小麦品种济南１７７、３８４、４７１的幼胚和济南１７７的胚性愈伤组织为材料，质粒为ｐＰＰＩ２［含大麦黄矮病毒外壳蛋白（ＣＰ）基因和ＧＵＳ（β－葡萄糖苷酸酶）基因］；ｐＰＰＩ５（含ＣＰ基因）＋ｐＥｍｕＧＮ（含ＧＵＳ基因），用高速基因枪轰击钨粉质粒进入幼胚和胚性愈伤组织细胞．ＧＵＳ基因的瞬间表达平均频率幼胚约为４２％，愈伤组织为１８．５％．转化处理后用ＰＣＲ扩增技术检测植株中ＣＰ基因是否存在并稳定遗传．检测结果表明，来源于幼胚的Ｔ０代转化频率为２～９％（１９９３～１９９４年），并获得Ｔ１、Ｔ２和Ｔ３代稳定表达的转化植株．用愈伤组织转化，其转化频率３月龄者为０．４％；２年龄者为零．潮霉素（Ｈｍ）用于对转化幼胚和愈伤组织的筛选，低浓度时不能抑制非转化细胞的生长，高浓度则使细胞受伤害，不能再生正常健壮的植株     

金鱼草Del基因影响烟草花色素苷的研究

采用根癌农杆菌介导法,获得转Ｄｅｌ基因的转基因烟草植株．对９株可能的转基因植株（Ｔ０代）ＤＮＡ进行ＮＰＴⅡ基因的ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交分析,其中８株显示ＮＰＴⅡ基因阳性．对其中５株开花的阳性植株进行ＤｅｌＤＮＡ的ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交分析,全部显示ＤｅｌＤＮＡ阳性．Ｋｍ抗性Ｔ１代转基因植株ＤＮＡ进行ＤｅｌＤＮＡ的ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交分析,结果显示全部含有ＤｅｌＤＮＡ．在５３０ｎｍ处测量Ｔ０代转基因植株中花色素苷含量和分布情况,３株转基因烟草的花萼、花冠和雄蕊部位花色素苷含量增加,而在雌蕊和叶中减少．在一定程度上验证了Ｄｅｌ基因的生物学功能,证实并补充了Ｇｏｏｄｒｉｃｈ等关于色素沉积模式的论述．     

辣椒的离体再生及抗虫基因转化的研究

研究建立起一套简单、高效的辣椒遗传转化系统。利用根癌农杆菌介导带柄子叶,将豇豆胰蛋白酶抑制剂（CpTI)基因转入辣椒栽培品种“益都羊角椒”中。对获得的33株卡那霉素（Km)抗性植物进行PCR检测,证明有6株为转CpTI基因植株。通过对转基因植株进行抗虫性研究,发现R1代植株对棉铃虫表达出一定的抗性,但不同转化体之间其抗性存在着差异。     

用Ti质粒的双元载体法将抗性基因转入西红柿体细胞

采用Ｔｉ质粒的双元载体法对西红柿（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）的叶片外植体进行遗传转化，经选择培养基的筛选，从抗性愈伤组织细胞中诱导出具有卡那霉素抗性的幼苗．分子杂交证实，卡那霉素抗性基因通过根瘤农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）的介导，整合到细胞核基因组中，转化子具有较高的新霉素磷酸转移酶活性，说明抗性基因在受体细胞得到表达．     

抗B.t.制剂昆虫细胞品系的选择及其酯酶同工酶的初？…

逐代以９０％的选择压力选择对Ｂ．ｔ．抗性的昆虫细胞品系，结果表明：５Ｂ１细胞对Ｂ．ｔ．抗性的发展是相当缓慢的，第２３代选择细胞的抗性水平突然由原来的３倍上升到１０倍以上，此后抗性在８～１０倍间波动，一直到第３２代，被选择细胞（Ｒ５Ｂ１）和正常细胞（Ｓ５Ｂ１）酯酶同工酶的分析结果表明两种品系细胞有３条共同的酶带，另外，二者也分别拥有２条特异性酶带，被选择细胞（Ｒ５Ｂ１）的细胞酯酶同工酶有此酶带的活力     

泡桐遗传转化系统的建立

通过农杆菌 Ｔｉ 质粒介导,将模式基因（ 新霉素磷酸转移酶＋ β葡萄糖酸苷酶基因） 导入泡桐,并对影响转化及选择再生的一系列因子进行优化,创建了泡桐的遗传转化系统．优化后的系统为：用泡桐完整叶片作外植体,侵染转化的菌液浓度 Ｏ Ｄ６００ 值控制在０ ．１ ～０ ．２ ,经２０ ｍ ｍ ｏｌ／ Ｌ Ｃａ２ ＋ 处理,共培养６ｄ ;在１０ｍ ｇ／ Ｌ 卡那霉素＋ ２５０ ｍ ｇ／ Ｌ 羧苄青霉素的选择压下培养数天,随后在仅含 Ｋａｎ的选择压下继续培养,直至抗性芽的再生．通过此遗传转化系统,获得了抗 Ｋａｎ的泡桐芽,转化频率可达８４ ％ ．组织化学法检测表明, Ｇ Ｕ Ｓ 报告基因不仅在侵染的叶片中得到短暂表达,而且在抗性芽和抗性愈伤组织中得到稳定表达     

转多个抗真菌蛋白基因水稻植株的获得及其抗稻瘟病菌的初步研究

用基因枪法将水稻碱性几丁质酶（ＲＣ２４）基因、苜蓿葡聚糖酶（βＧｌｕ）基因、大麦核糖体失活蛋白（ＢＲＩＰ）基因和潮霉素（ｈｐｔ）基因同时导入籼稻品种（七丝软占）中,获得了７个潮霉素抗性再生系,Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ证明２～３个抗真菌蛋白基因已整合到水稻基因组中．初步抗性鉴定表明Ｒ０代转基因水稻植株对稻瘟病菌的抗性有所提高