西瓜种植物RAPD分析影响因子的研究

以西瓜种内的１２个品种（系）为模板ＤＮＡ,研究了影响ＲＡＰＤ扩增效果的因素。结果表明,模板ＤＮＡ、Ｔａｑ酶、随机引物、Ｍｇ２＋浓度以及ＰＣＲ反应程序在ＲＡＰＤ分析中都具有重要的作用。根据以上因子的研究结果,建立了适合西瓜种植物的ＲＡＰＤ分析的技术体系：１０μＬ反应液中,模板１０ｎｇ／１０μＬ,引物０５μｍｏｌ／Ｌ,ＴｒｉｓＨＣｌ（ｐＨ８３）５０ｍｍｏｌ／Ｌ,ＢＳＡ５００μｇ／ｍＬ,ＭｇＣｌ２２５ｍｍｏｌ／Ｌ,ＴａｑＤＮＡ０６Ｕ／１０μＬ,ｄＮＴＰｓ２００μｍｏｌ／Ｌ,１０％蔗糖４００和１ｍｍｏｌ／Ｌ甲酚红。     

小鼠金属硫蛋白基因—I在CHO细胞中稳定表达及其在医疗…

将小鼠的ＭＴ－Ｉ基因插入ｐＳＶ２－ｄｈｆｒ质粒的ＥｃｏＲＩ位点，构建了具有ＳＶ４０和ＭＴ双启动子并正向插入ＭＴ－Ｉ基因的表达载体。用改良的磷酸钙／ＤＮＡ沉淀法将表达载体导入ＣＨＯ－ｄｈｆｒ＾－细胞内，用不含次黄嘌呤（Ｈ）和胸腺嘧啶（Ｔ）的选择培养基筛选出稳定表达ＭＴ阳性克隆Ｄ－２２，经检测１０＾６细胞的ＭＴ表达量约为１．８μｇ，Ｄ－２２细胞对Ｃｄ＾２＋浓度抗性较之ＣＨＯ－ｄｈｆｒ＾－细胞高１４倍。     

姜黄素诱导人胃腺癌MGC80-3细胞凋亡研究

以５、１０和２０μｍｏｌ／Ｌ姜黄素处理ＭＧＣ８０－３７２ｈ,细胞存活率随药物浓度及处理时间依赖性下降,并呈现典型的凋亡细胞形态,以０、１０、２０及３０μｍｏｌ／Ｌ姜黄素处理细胞２４ｈ后,２０μｍｏｌ／Ｌ,以上的处理组ＤＮＡ琼脂糖电泳显示均有典型的凋亡梯形条带,同样条件处理后分别对断裂及未断裂ＤＮＡ作定量测定,计算细胞凋亡率分别为７．３％,３９．２％,５０．５％和６４．３％,表明姜黄素具有诱导ＭＧＣ     

红细胞生成素(EPO)在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中稳定表达

将ＥＰＯｃＤＮＡ分别插入真核表达质粒载体ｐＳＶ２ｄｈｆｒ和ｐｃＤＮＡ３的适当位点,用电脉冲法导入ＣＨＯ细胞,用ＥＬＩＳＡ法检测ＥＰＯ的表达量,用ＴＦ１细胞检测ＥＰＯ表达产物的生物活性．结果表明,用ｐＳＶ２ｄｈｆｒ作为载体,在抗ＭＴＸ阳性细胞克隆中,获得了表达ＥＰＯ（２５８ｎｇ／ｍＬ培养液）的ＣＨＯ细胞株,并且表达产物具有生物活性．进一步的传代和冻存试验表明,所得细胞株表达ＥＰＯ的水平不受传代和冻存的影响     

VP—16诱导的鼻咽癌细胞亚系多药耐受表型的研究

经ＶＰ－１６大剂量短暂冲击加递增低浓度诱导方法建立了鼻咽癌耐药细胞亚纱ＬＣＥ／ＶＥ,用ＲＴ－ＰＣＲ和ＰＣＭ免疫荧光法检测了耐药基因ＭＲＰ和ｍｄｒ１在ｍＲＮＡ水平和蛋白质水平的表达,并用ＭＴＴ法测定了ＬＣＥ／ＶＰ对９种化疗药物的敏感试验,结果发现ＬＣＥ／ＶＰ细胞几ｍｄｒ１在ｍＲＮＡ水平均有表达,且前明显高于后,蛋白质水平的表达情况与ｍＲＮＡ水平相一致,ＬＣＥ／ＶＰ对９种化疗药物中的６种药物敏感程     

茉莉酸甲酯对水稻幼苗呼吸代谢途径的影响

水稻幼苗在其生长过程中，叶片及根部的ＴＣＡ循环所占比重不断减少，而ＨＭＰ途径不断增强．０２５μｍｏｌ／Ｌ及０２５ｍｍｏｌ／Ｌ茉莉酸甲酯处理均能减少幼苗叶片及根部ＴＣＡ循环所占比重，增加ＨＭＰ途径所占比重，但对呼吸作用中的电子传递途径没有明显的影响．     

REGULARIZING OPERATOR ALGORITHM FOR INVERSION OF PARTICLE SIZEDISTRIBUTION FROM LIGHT SCATTERING SPECTRUM

ＲＥＧＵＬＡＲＩＺＩＮＧＯＰＥＲＡＴＯＲＡＬＧＯＲＩＴＨＭＦＯＲＩＮＶＥＲＳＩＯＮＯＦＰＡＲＴＩＣＬＥＳＩＺＥＤＩＳＴＲＩＢＵＴＩＯＮＦＲＯＭＬＩＧＨＴＳＣＡＴＴＥＲＩＮＧＳＰＥＣＴＲＵＭ￥ＨｅＪｉｎｇ；ＷａｎｇＳｈｉｍｉｎ；ＣｈｅｎｇＪｉａｎｃｈｕ...     

氯化镉对条斑星鲽卵巢细胞的毒性作用及其机理研究

使用不同浓度的氯化镉（CdCl2）处理体外培养的条斑星鲽卵巢（BFO）细胞系细胞,利用毒理学和细胞生物学方法研究了重金属镉对BFO细胞的细胞毒性及其作用机理。毒性作用研究结果显示,BFO细胞对CdCl2敏感,浓度大于10ixmol／L的CdCl2对细胞的生长具有显著的抑制作用,能引起细胞内超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GST—Px）活性的持续降低和丙二醛（MDA）含量的持续升高,且具有浓度依赖性;机理研究结果显示．浓度大于40μmol／L的CdCl2可引起BFO细胞出现典型的凋亡细胞形态,BFO细胞在AO／EB荧光双染色中的质膜通透性显著提高,在单细胞凝胶电泳中出现明显的彗尾,且细胞凋亡率、彗尾的长度和亮度随CdCl2浓度的增加而逐渐升高,并具有浓度依赖性。可见,镉对BFO细胞具有显著的毒性作用,其毒性作用是通过诱导细胞凋亡来实现的,为利用BFO细胞系研究镉等重金属的细胞毒性及其作用机理奠定了基础。     

去甲斑蝥素对人乳腺癌细胞MCF-7的杀伤效应及其可能机制

用１０μｇ／ｍＬ去甲斑蝥素（ＮＣＴＤ）作用于人乳腺癌细胞,以ＭＴＴ法、流式细胞仪、台盼蓝排斥法和透射电镜等方法分别观察ＮＣＴＤ对癌细胞的增殖抑制作用及对细胞周期和细胞凋亡的影响。结果表明：ＮＣＴＤ对乳腺癌细胞的杀伤作用有时间和剂量依赖性,药物作用２４ｈ后,Ｇ１期细胞减少,Ｇ２＋Ｍ期细胞明显增多,凋亡细胞百分比升高并可见到凋亡细胞的形态学变化。     

镁离子浓度对猪心细胞色素C的反胶团萃取的影响

用ＡＯＴ／异辛烷反胶团系统萃取了添加不同浓度镁离子的猪心提取液中的细胞包素Ｃ．其结果为：添加０．０２５ｍｏｌ／ＬＭｇ２＋的萃取率Ｅ．Ｒ，（ＥｘｔｒａｃｔＲａｔｉｏ）为９６．５％（氧化型和还原型平均值）．添加０．３ｍｏｌ／ＬＭｇ２＋的萃取率为２８．３％。萃取后水相的吸收光谱中，还原型细胞色素Ｃ在５２０ｎｍ、５５０ｎｍ的吸收峰值消失。１２０ｎｍ的吸收峰值显著降低。萃取有机相的吸收光谱中，还原型细胞包素Ｃ在４２０ｎｍ、５２０ｎｍ和５５０ｎｍ处的特征吸收峰值显著。经反萃取后水相的吸收光谱与提取液以及萃取有机相的吸收光谱相同。说明添ＷＭｇ２＋后，经ＡＯＴ／异辛烷萃取和反萃取过程能将细胞包素Ｃ从猪心提取液中萃取分离出来。     

贝特舒对人角膜上皮细胞凋亡诱导作用的实验研究

为了揭示常用青光眼药物贝特舒(betaxolol)对人角膜上皮(HCEP)细胞的毒性及其作用机理,使用不同质量浓度贝特舒对体外培养HCEP细胞进行了处理,并利用倒置显微镜跟踪观察了细胞的生长和形态,用吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)荧光双染色法检测了质膜的通透性,用琼脂糖凝胶电泳法检测DNA的断片化,用透射电镜检测细胞的超微结构。发现在0.17500~2.80000g/L的质量浓度范围内,贝特舒对HCEP细胞具有显著的毒性,并随着质量浓度的提高和处理时间的延长而逐渐增大,处理24h即可使大部分细胞皱缩死亡;进一步的研究结果发现,质量浓度为0.17500~2.80000g/L的贝特舒能显著提高HCEP细胞的质膜通透性,并使其出现DNA断片化、染色质凝缩和形成凋亡小体等凋亡细胞的结构变化。可见,在贝特舒0.17500~2.80000g/L的质量浓度范围内对HCEP细胞具有显著的毒性,并具有质量浓度和时间依赖性,其毒性作用的发挥是通过诱导细胞凋亡实现的,在眼科临床应用中毒副作用极大。     

EVn-50抑制人宫颈癌Hela细胞增殖及诱导凋亡的研究

目的探讨EVn-50对体外培养的人宫颈癌Hela细胞增殖及凋亡的影响。方法体外培养人宫颈癌Hela细胞,台盼蓝拒染法检测EVn-50对人宫颈癌Hela细胞增殖的影响;平皿克隆形成法、软琼脂克隆形成法测定EV-n50对人宫颈癌Hela细胞锚定依赖性生长和锚定非依赖性生长作用的影响;AO／EB染色荧光显微镜观察EVn-50诱导Hela细胞凋亡的形态学改变;DNA凝胶电泳确证EVn-50诱导Hela细胞凋亡作用。结果EVn-50对体外培养人宫颈癌Hela细胞的增殖具有显著抑制作用,呈浓度依赖性。EVn-50可诱导Hela细胞凋亡,AO／EB染色可见典型凋亡小体;DNA凝胶电泳在EVn-50浓度100μg／mL作用48h出现典型“梯形”DNA条带。结论EVn-50具有抑制人宫颈癌Hela细胞增殖并诱导细胞凋亡作用。     

赤参水提物对人肝癌细胞株HepG2细胞的影响

探讨了赤参水提物对人肝癌细胞株HepG2细胞的影响.采用体外培养的人肝癌细胞HepG2细胞株,接种入96孔板,24 h后加入赤参水提物,MTT(methyl thiazolyl tetrazolium)法,计算肝癌细胞生长存活率;Acridine orange/ethylene dibromide(AO/EB)荧光染色法,检测细胞形态学变化;RT-PCR法检测细胞Bcl-2、Bax、p53基因表达变化.结果表明,赤参水提物可剂量-时间依赖性地抑制HepG2细胞增殖;1.0 mg/mL赤参水提物处理HepG2细胞24 h后,细胞荧光染色出现了明显的凋亡细胞;赤参水提物处理HepG2细胞后,Bcl-2 mRNA表达量剂量依赖性地减少,而Bax和p53 mRNA表达量剂量依赖性地增加.     

黄荆子乙酸乙酯提取物诱导结肠癌HT-29细胞凋亡

目的研究黄荆子乙酸乙酯提取物（EVn-50）诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡作用。方法用不同浓度的EVn-50处理体外培养的HT-29细胞;碘化丙啶（PI）染色流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡率;琼脂糖凝胶电泳观察DNA梯形条带;Western blot分析Bcl-2和Bax蛋白表达。结果EVn-50以浓度依赖的方式增加HT-29细胞凋亡率（P〈0．05）。10．0tanoVLEVn-50处理HT-29细胞48h导致典型DNA梯形条带形成。10．0umol/LEVn-50以时间依赖方式下调Bcl-2蛋白表达,同时,上调Bax蛋白表达（P〈0．05）。结论EVn-50诱导HT-29细胞凋亡作用与增加Bax／Bcl-2比值有关。     

白介素24对单个核细胞bcl-2表达的影响

为探讨白细胞介素24(IL-24)对成人急性白血病骨髓单个核细胞(BMMNC)体外生长的影响,并初步研究其作用机制。随机选取急性白血病住院患者15例,均经FAB分型或免疫学分型确诊,其中确诊未治的成人急性淋巴细胞白血病(ALL)患者5例,成人急性非淋巴细胞白血病(ANLL)患者10例。取患者骨髓,分离单个核细胞并培养,将不同浓度IL-24作用于BMMNC。应用四氮唑蓝(MTT)比色还原法、AnnexinV-FITC染色流式细胞术及逆转录-聚合酶联反应(RTPCR),分别检测IL-24对急性白血病BMMNC体外细胞增殖与凋亡及bcl-2表达的影响。结果显示,IL-24对体外培养的白血病BMMNC有明显的生长抑制作用,且呈时间、剂量依赖性,与阴性对照组相比差异有统计学意义(P0.05)。IL-24浓度50 ng/mL作用急性白血病BMMNC,48 h后凋亡率为39.21%±5.79%,高于对照组(P0.01)。不同浓度IL-24处理白血病BMMNC,能够降低bcl-2 mRNA的表达。IL-24体外培养的成人急性白血病BMMNC,有明显的生长抑制、诱导凋亡作用。由此可知,IL-24可以下调bcl-2 mRNA表达,可能是IL-24抑制急性白血病BMMNC生长作用的重要机制。     

阿霉素诱导肝癌QGY-7701细胞凋亡的研究

观察阿霉素对人肝癌细胞株QGY-7701的凋亡诱导作用。实验用阿霉素处理QGY-7701细胞后,用台盼蓝拒染法检测细胞增殖活性;光镜、荧光显微镜、透射电镜观察细胞凋亡形态;DNA琼脂糖凝胶电泳技术观察分析细胞凋亡情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化。结果显示,阿霉素处理QGY-7701细胞后,出现了明显的凋亡现象,而且随着药物浓度的增加,细胞凋亡的趋势越明显。分析结果可知,阿霉素作用QGY-7701细胞48 h的IC50值为4.9μg/mL。流式细胞仪检测出阿霉素处理QGY-7701细胞的凋亡率逐渐上升。综上所述,阿霉素可以诱导QGY-7701细胞出现凋亡的现象。     

呋喃二烯的体内外抗肿瘤作用研究

探讨了呋喃二烯的体内外抗肿瘤作用及作用机理．采用MTT法检测呋喃二烯对10种人肿瘤细胞的体外增殖抑制作用,研究发现呋喃二烯对体外培养的多种肿瘤细胞具有很强的抑制和杀伤效应,其IC50在0．98-4．81μg/mL．并对敏感的白血病细胞HL-60进行初步的作用机制研究,其形态学和流式细胞分析试验均表明它能有效诱导细胞调亡．整体动物试验结果可证实呋喃二烯乳注射液能明显延长荷腹水癌S180小鼠的生存期,生命延长率分别为80mg／kg（91．2％）,30mg／kg（82．4％）,10mg／kg（70．59％）．     

Phytophthora elicitor PB90 induced apoptosis in suspension cultures of tobacco

The protein elicitor PB90 secreted by Phytophthora boehmeriae is an efficient elicitor inducing the hypersensitive response and systemic acquired resistance in tobacco plants. Here, we observed cell death in suspension-cultured cells of Nicotiana tabacum BY-2 with PB90 treatment using Trypan blue staining method. And this cell death could be suppressed by cycloheximide, an inhibitor of proteins synthesis, which implies that PB90-induced celldeath was an active cell death process requiring new protein synthesis. DAPI staining revealed that PB90 induce rapid chromatin condensation, margination, apoptotic bodies‘ formation and DNA laddering, further TUNEL assay also observed the specific breakage of 3 ‘-OH ends. All of the above common morphological characteristics indicated that PB90 induced apoptosis in suspension cultures of tobacco, suggesting that hypersensitive response induced by PB90 is an apoptotic process.     

葡萄籽提取物诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡的实验研究

该文研究葡萄籽提取物(GSE)对前列腺癌PC-3细胞的生长抑制及凋亡作用,分析GSE诱导PC-3细胞凋亡的途径.采用四唑盐(MTT)比色法测定GSE对PC-3细胞的毒性作用;利用倒置显微镜、透射电镜观察GSE对PC-3细胞引起的形态学改变;碘化丙啶(PI)、吖啶橙(AO)/溴化乙锭(EB)双染法观察GSE诱导PC-3细胞凋亡的作用;Western blot探索细胞凋亡途径.结果表明,MTT法测定GSE能显著抑制PC-3细胞生长.倒置显微镜、透射电镜下可见细胞形态改变.PI染色显示,GSE将PC-3细胞周期阻滞在G0/G1期;GSE诱导PC-3细胞凋亡,AO/EB染色,荧光显微镜下可明显看到凋亡细胞、死亡细胞.Western blot显示GSE通过caspase途径诱导细胞凋亡.从细胞和亚细胞水平研究证实了GSE对人雄激素非依赖性PCaPC-3细胞具有毒性作用,GSE可通过线粒体途径诱导PC-3细胞凋亡和坏死,抑制细胞生长.