视点

中国专家发现新粒子 被评为2005年最重要成果，日本拟发射两颗间谍卫星 重点盯防周边国家，家蚕基因芯片与表达图谱诞生，中国2005年度国家科学技术奖励名单公布，……[编者按]     

非损伤性取样的蚕类DNA提取及检测

对家蚕和蓖麻蚕的蚕蜕和蛾翅分别采用SDS裂解法和动物组织基因组试剂盒提取法提取DNS，并与常规方法以蚕蛹提取的DNA一起进行RAPD扩增图谱比较、分析，结果表明用非损伤性方法提取的DNA的RAPD图谱和常规方法提取的DNA的RAPD图谱基本一致。     

家蚕生物反应器与家蚕实验动物化饲育技术

以家蚕为生物反应器 (重组家蚕核型多角体病毒表达系统 )生产基因工程产品 ,具有成本低、安全、产品产量与活性高的优点。随着近年生命科学和生物技术的迅猛发展 ,需要发展新的实验动物品种、特别是利用低等动物代替哺乳动物 ,大力开发动物资源型功能 ,造福人类。本文报道我所利用家蚕表达外源基因与家蚕实验动物化饲育技术方面一些研究成果。由家蚕细胞、转移载体、修饰的BmNPV、家蚕幼虫或蛹组成家蚕表达系统。获得了含有日本血吸虫脂肪酸结合蛋白基因的重组病毒 (rsj14NPV)和含有日本血吸虫 2 8KDGST基因的重组病毒 (rsj2 8NPV)。r…     

基因芯片技术及产品的应用研究与开发

建立了完备的基因芯片制备应用体系 ,其核心包括高密度ｃＤＮＡ基因芯片制作和应用、寡核苷酸基因芯片制备以及修饰基片制备等 研制出一系列人ｃＤＮＡ表达谱芯片、小鼠ｃＤＮＡ表达谱芯片和水稻ｃＤＮＡ表达谱芯片 ;研究出一种基于ｃＤＮＡ基因芯片的新型抗肿瘤药物筛选模型 ,它具有经济、快捷、高通量的特点 ,所提供大量信息不仅能辅助比较药物疗效 ,且可解释药物作用机理 该项目 2 0 0 1年 1 1月获得上海市人民政府颁发的上海市科技进步奖一等奖基因芯片技术及产品的应用研究与开发$遗传工程国家重点实验室     

Ice-2和Ice-5基因在家蚕凋亡信号通路中的作用研究

细胞凋亡是细胞自主的有序死亡，caspase家族在细胞凋亡中起着重要的作用，ICE（Interlukin-1β—converting enzyme，白细胞介素-1β转换酶）是Caspase家族的一员，又称Caspase-1。为了了解家蚕ice-2和ice-5基因（GenBank登录号为：DQ360829和DQ360830）在凋亡信号通路中的作用，采用紫外线等刺激家蚕幼虫和家蚕细胞，利用荧光定量PCR的方法测定不同因素刺激下的ice-2和ice-5的表达量的变化。结果显示ice-2和ice-5都与家蚕的细胞信号转导有关，ice-5可能比ice-2起更重要的作用。     

水稻花期干旱胁迫应答基因Os07g0422100启动子的克隆及鉴定

水稻作为需水量最大的作物之一,对于水分的胁迫异常敏感.对处于花期的水稻进行干旱胁迫处理,利用基因芯片技术筛选出在水稻花穗中特异性表达的应答干旱胁迫的基因Os07g0422100.在对该基因的研究中发现,该基因的表达图谱有较高的专一性,且该基因的启动子属于诱导型启动子,仅在受到干旱胁迫的水稻花穗中表达.利用Os07g04...     

应用核型多角体病毒载体在家蚕和家蚕培养细胞中高效表达人尿激酶原cDNA基因

将人尿激酶原(pro-UK)cDNA分别插入家蚕核型多角体病毒转移载体pBK283和pBF4中,构建成两个重组质粒。所构建的这两个重组质粒与野生型家蚕核型多角体病毒DNA(BmNPV genomic DNA)共转染家蚕培养细胞,经病毒斑实验(Plaque assay)筛选出含pro-UK cDNA的稳定重组病毒株BmNPV-pk1和BmNPV-pk2。将此两株重组病毒分别感染家蚕培养细胞和家蚕幼虫4天后,用酶联免疫测定法(ELISA),纤维蛋白平板溶圈测活法和Western印迹法分析细胞培养上清及细胞和家蚕的体液及组织,证实均有pro-UK表达。家蚕培养细胞的表达量分别为0.0012mg/mL(上清液和10~6细胞)和0.0031mg/mL(上清液和10~6细胞),家蚕幼虫体液的表达量分别为0.0100mg/mL和0.0300mg/mL。从以上结果可看出,家蚕幼虫体液的表达量是培养细胞的10倍,以上表达产物在纤维蛋白平板上测活均有溶纤活性。     

应用核型多角体病毒载体在家蚕和家蚕培养细胞中高…

将人尿激原ｃＤＮＡ分别插入家蚕核型多角体病毒转移载体ｐＢＫ２８３和ｐＢＦ４中，构建成两个重组质粒。所构建的这两个重组质粒与野生型家蚕核型多角体病毒ＤＮＡ共转染家蚕培养细胞，经病毒斑实验筛选出含ｐｒｏ－ＵＫ ｃＤＮＡ的稳定重组病毒株ＢｍＮＰＶ－ｐｋ１和ＢｍＮＰＶ－ｐｋ２。将此两株蛋白平板溶圈测活法和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法分析细胞培养上清及细胞和家蚕的体液及组织，证实均有ｐｒｏ－ＵＫ表达。家蚕培养细胞的     

中国科学家抢占家蚕基因组研究制高点

2003年11月15日，中国科学家宣布了一条令世界为之瞩目的消息经过400多名科研人员5个多月的艰苦努力。我国已率先完成家蚕基因组“框架图”绘制工作，所获序列覆盖了家蚕基因组的95．54％，精确度达到了99．95％。这标志着我国在家蚕基因组研究方面已居世界领先地位。     

cDNA芯片应用在急性白血病研究中的初步探索

基因芯片技术对肿瘤基因组学的研究提供了一种高效的手段．采用基因芯片技术观察了14例初发急性髓系白血病患者12800条基因的表达谱,找到了一些和白血病发生有密切关系的基因．用表达谱的聚类方法分析难治性白血病的基因表达特征,发现一些与耐药相关的基因在难治性白血病人和易治性白血病人中表达有明显不同,证明难治性白血病与耐药有一定关系。     

家蚕新的非编码RNA功能初探

构建了家蚕50～500 nt非编码RNA的cDNA文库,发现了189个新的ncRNA,其中一个小RNA-Bm-86在家蚕幼虫和蛹中的表达量显著高于卵和成虫.利用生物信息学软件对该ncRNA的特性及其与上下游基因的关系进行了深入分析,并利用Northern杂交和半定量RT-PCR技术对该ncRNA与其宿主基因在家蚕不同组织的表达情况进行了研究.结果发现,该ncRNA属于H/ACA box snoRNA家族,是由家蚕eIF5A基因的第二个内含子转录产生的,且在家蚕中没有明显的靶标位点.分析其上下游基因结构发现,在其上游263 bp处存在着一个可能的启动子位点,表明其有独立转录的倾向.进一步分析Bm-86与其宿主基因eIF5A在家蚕不同组织部位的表达情况发现,二者在表达上存在着负相关的关系,且该现象在丝腺中尤其明显.推测Bm-86可能通过影响eIF5A基因的表达参与到家蚕丝腺发育调控过程中.     

家蚕抗菌蛋白Cecropin D和Lysozyme的分离纯化及性质鉴定

经大肠杆菌E．coli K12D31诱导后的家蚕幼虫，其免疫血淋巴经CM-Sepharose CL-6B离子交换层析、Sephadex G-100凝胶过滤层析及HPLC分离后，得到2种抗菌蛋白，经液相色谱-电喷雾质谱（ESI-MS）分析鉴定，纯化的2种抗菌蛋白分别是家蚕抗菌肽eeeropin D和溶菌酶lysozyme酸性电泳（A-PAGE）测活免疫血淋巴得到抗菌蛋白活性谱：cecropin D在8h无显著表达，12h有较强抗菌活性，30h达到最高，以后逐渐降低；lysozyme在8h后检测到表达，12h到达高峰，之后逐渐下降，48h的血淋巴中未检测到明显的表达．研究认为抗菌蛋白lysozyme和cecropin D是家蚕幼虫感染细菌8h后大量表达的抗菌蛋白，主要参与细菌感染12～30h的血淋巴对细菌的清除，是参与家蚕幼虫抗菌免疫的重要蛋白．     

微束激对单细胞诱变机制研究

本文报道用微束激光对家蚕进行外源染色质的转移获得成功，观察到转移的染色质基因在受体中的当代形态性状表达，并论述短脉冲微束激光照射家蚕 精卵大细胞转移外源基因的同时，引起变异的主要机制。     

家蚕BmMet2基因的组织定位与激素诱导表达分析

Met作为保幼激素(JH)的受体, 能编码bHLH-PAS结构域结合DNA并调控下游基因的表达。为了探究BmMet2是否作为JH的受体参与调控家蚕的生长发育,以家蚕为材料,用生物信息学方法分析了BmMet2蛋白结构,利用实时定量PCR检测其在翅原基不同时期和激素诱导下的表达情况;原核表达了BmMet2中能与DNA结合的蛋白区域BmMet2DBD,并制备了抗体;利用蛋白质印迹法(Western blotting)和免疫组化检测了BmMet2在家蚕多个时期和各组织中的定位表达情况。结果显示:在翅原基中,BmMet2在5龄第3天和5龄第6天有较高水平的表达,蛹期的表达量较低,这与家蚕体内JH的滴度一致;BmMet2在5龄第6天、吐丝期和预蛹期的胸节表皮、脂肪体及翅原基等组织中都有较高的表达;JH和20E均对BmMet2有不同程度的诱导,说明其可能同时参与了JH和20E的调控, 进而参与调控家蚕变态发育过程。     

4000多个基因开关位置确定，基因组图谱有了“全球定位系统”

新加坡基因组研究院科学家宣布成功绘制了4000多个基因开关位置图谱。 干细胞的活动受一种特殊蛋白质转录因子调控，它们会在基因组的特定位置与相应的蛋白质结合，启动或抑制某种基因的表达，影响干细胞分化成各种组织器官。所以，基因开关位置图谱就如同基因组图谱的“全球定位系统”，可使人类更准确地知道在基因组的哪些位置可以产生哪些基因表达。     

中国基因芯片技术应用获重大突破

日前，由军事医学科学院放射与辐射医学研究所和深圳益生堂生物企业有限公司联合研制的HLA-DRB1分型基因芯片试剂盒，获得了由国家食品药品监督管理局颁发的新药证书和生产文号。这是在国家自然科学基金重点项目和“863”计划的资助下，基因芯片技术应用的又一里程碑式的重大成果。该项重大成果的面世，不仅填补了我国HLA分型（组织相容抗原骨髓移植配型）试剂的空白，     

蜘蛛拖牵丝蛋白基因转家蚕表达质粒的构建

利用DNA重组技术对络新妇蛛(Nephila clavipes)拖牵丝蛋白基因MaSp1高度重复序列进行多次重组,人工构建成1.6 kb的蜘蛛拖牵丝蛋白人工基因Sil-E,DNA序列分析证明了人工基因序列的正确性.将家蚕L链基因启动子片段、L链cDNA、L链基因终止子融合在一起,构建成丝腺特异性表达单元.再与Sil-E融合构建成蜘蛛拖牵丝蛋白基因家蚕丝腺特异表达单元.将该表达单元克隆到转座子piggyBac的转基因载体中,获得了蜘蛛拖牵丝蛋白转基因表达载体.采用显微注射法将其与辅助质粒共导入到家蚕蚕卵中.筛选转基因阳性个体,经PCR和Southern杂交鉴定,结果表明目的基因整合到家蚕基因组中,为进一步研究家蚕作为生物反应器表达蜘蛛拖牵丝蛋白基因奠定了基础.     

用基因芯片研究苦丁茶甙对K562细胞基因表达的影响

以人红白血病K562细胞株为材料，应用基因芯片技术研究苦丁茶甙对人红白血病K562细胞作用前后基因表达的差异，以诱导分化药物羟基脲处理作为正对照，分别提取药物处理前后细胞RNA进行逆转录cDNA，使获得的cDNA分别标记上Cy3和Cy5两种荧光物质；然后与由1632条cDNA片段制作的基因表达谱芯片杂交，经扫描及对获得的数据用相关软件分析，确定K562细胞经苦丁茶甙处理前后差异表达基因48条，有41条与羧基脲处理相同，其中上调表达的基因有32条，下调表达的基因有16条，这将为进一步建立基因芯片技术药物筛选模型奠定基础。     

家蚕浓核病毒研究进展

本文介绍了家蚕浓核病毒的生理生化特性，包括其基因的组成、表达复制等，并综述了近年来在此领域内的各项新进展。     

小小家蚕引发“新丝路“之争——中国科学家抢占家蚕基因组研究制高点

首个家蚕基因组“框架图“问世 　　2003年11月15日,中国科学家宣布了一条令世界为之瞩目的消息:经过400多名科研人员5个多月的艰苦努力,我国已率先完成家蚕基因组“框架图“的绘制工作,所获序列覆盖了家蚕基因组的95.54%,精确度达到了99.95%.这标志着我国在家蚕基因组研究方面已居世界领先地位. 　　……