乌克兰科技周高洽会科技项目

H66.防病毒蛋白质药物的工业生产过程 目前,利用层离净化法从人体血浆中提取蛋白质药物的工业生产过程主要采用的是乌克兰国家科学院帕拉丁生物化学协会创造的酒精分馏与Conu法。层离法可以从冷凝蛋白质中获得一种新的药物——凝结素Ⅸ和一种特别的新药——凝结素Ⅷ,这种药是目前主要的母基抗出血药。     

牛血清白蛋白与头孢菌素相互作用的荧光法研究

研究血清白蛋白与药物分子之间的作用,对于理解具有生物活性的物质与蛋白质之间的相互作用机理很重要;有助于从分子水平上理解药物在体内的运输和代谢过程;对于阐明药物的作用机制、药代动力学以及蛋白质构象变化都有重要意义.本文通过荧光光谱和紫外-可见吸收光谱,研究了牛血清白蛋白与头孢菌素一代、二代和三代代表药物的作用机理,包括头孢拉定、头孢呋辛和头孢噻肟.详细讨论了牛血清白蛋白与头孢菌素作用的各种参数,包括猝灭参数、结合参数、热力学参数和作用模式等.推测头孢菌素是通过与牛血清白蛋白分子结构中Trp 212附近的活性位点相结合而导致荧光猝灭的.     

药物对大鼠急性心肌梗塞后心衰发生与血浆脑钠素浓度的影响

观察药物治疗对大鼠急性心肌梗塞(AMI)后心衰的发生及血浆脑钠素(BNP)浓度的影响,并探讨了BNP浓度在评价药物疗效方面的作用.将24只大鼠随机分为对照组、单纯缺血组、药物治疗组.结扎除对照组以外大鼠冠状动脉左前降支后惊醒笼养,其中药物组在术后既开始药物灌胃治疗.于86天后处死大鼠,取血并测定血浆BNP浓度,同时摘取心脏测定心肌梗塞面积,结果,药物组血浆BNP水平及心肌梗塞面积较缺血组低(p<0.01;p<0.01).结论:药物治疗可以降低心梗后血浆BNP浓度及缩小梗塞面积,减少心梗后心衰发生,监测血浆BNP浓度可评价心梗后药物治疗是否获效.     

基于非标记定量技术的肝细胞癌血浆蛋白质组学研究

采用非标记定量蛋白质组学技术获得10例肝细胞癌患者和10例健康人的血浆样本蛋白质组表达谱数据,并对其细胞定位与功能进行注释分析.利用修正t-检验算法对差异蛋白质进行筛选,通过DAVID平台分析软件对差异蛋白质进行功能注释分析,发现了一系列潜在的肝细胞癌血浆诊断生物标志物,包括16个肝细胞癌血浆上调蛋白质和15个下调蛋白...     

天冬块根药用成分对小鼠抗氧化延缓衰老的影响

通过天冬块根氨基酸、多糖、皂甙总量、浸提物含量测定和块根水提液饲养小鼠血浆以及肝脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)和蛋白质含量测定,探讨天冬块根药用成分对小鼠血浆和肝脑组织抗氧化延缓衰老的影响. 结果表明:天冬块根多糖是提高小鼠血浆和肝脑组织SOD活性,降低MDA含量的主要因素,是抗氧化延缓衰老的第一要素. 天冬块根氨基酸和浸提物的综合作用是导致小鼠血浆蛋白质含量增加,皂甙和浸提物的综合作用是导致小鼠肝、脑组织MDA积累的第二位影响要素.     

天青蛋白突变体的表达及其与顺铂前药的作用

天青蛋白是含有铜离子配位的蛋白质.基于天青蛋白的配位化学特点和生物学特性,将蛋白质进行改造得到了H117G突变体,使其具有结合外源咪唑和组氨酸的功能.该突变体可以用于结合具有抗癌作用的顺铂的Pt(IV)前体药物.采用紫外可见滴定等方法对蛋白质与咪唑类化合物的结合作用进行了研究,在此基础上,制备了一种新型的蛋白-药物复合物,并初步检验了该复合物对肿瘤细胞生长的抑制作用.     

基于蛋白质组学技术筛查维吾尔族妇女宫颈癌前病变患者血浆蛋白预警标志物

 依托蛋白质二维液相色谱和质谱技术,寻找与新疆维吾尔族妇女宫颈癌癌前病变高度宫颈鳞状上皮内瘤样变(HSIL)相关的血浆预警蛋白标志物,旨在对宫颈癌做到早期预防和诊断。收集维吾尔族HSIL(21例)和宫颈炎(22例)患者血浆标本并制备血浆低丰度蛋白质组样品,通过对蛋白质二维液相色谱系统的分离与鉴别分析,筛选出差异表达的组分,并运用质谱和生物信息学技术进行鉴定和功能识别分析。确定了宫颈炎和HSIL患者的基于蛋白质等电点和疏水性特征的血浆低丰度蛋白质组图谱,筛选出10个差异表达蛋白组分。结果表明,在HSIL患者血浆中3个低丰度蛋白组分含量明显上升,1个组分含量下降;而通过质谱技术鉴定出31种蛋白质,其中4种蛋白质与肿瘤进程密切相关,分别是代谢相关蛋白(APOA1)、信号转导相关蛋白(mTOR、EphA3)和免疫功能相关蛋白(HLA-DQB1)。本文针对维吾尔族妇女这一宫颈癌高发人群,展开癌前病变患者血浆低丰度蛋白组表达水平的研究,鉴定出多种差异表达血浆蛋白预警标志物,为本区宫颈癌的预防和早期鉴别诊断及癌变机制研究提供了依据。     

改进双抗夹心ELISA用于筛选单抗杂交瘤细胞株

本文利用改进双抗夹心ELISA筛选一种可测定血清样品中与血浆蛋白结合的蛋白质药物的单抗。用兔抗K102多抗经亲和层析纯化并包被后,加入用10%猴血浆PBS还原后的抗原K102,再加入杂交瘤细胞株上清液和HRP-羊抗鼠IgG、底物反应液筛选阳性单抗杂交瘤细胞株。结果用改进后的双抗夹心ELISA筛成功地选出6株能稳定分泌针对K102的单抗杂交瘤细胞株,分别命名为1C9、2D7、3E2、5F4、5F6、6B9;细胞株产生的单抗用ELISA法能检测出血清样品中的K102的浓度。提示改进的双抗夹心ELISA可用于针对与血浆蛋白结合的蛋白质药物的单抗杂交瘤细胞株的筛选。     

线粒体膜间隙蛋白质释放与细胞凋亡研究进展

近年来,国内外有关线粒体和肿瘤的关系研究的越来越多,开发与线粒体相关的新型药物并诱导肿瘤细胞凋亡逐渐成为热点.该文主要综述了近年来关于几种线粒体膜间隙蛋白质在细胞凋亡中的作用和由线粒体中释放的可能机制及其在肿瘤药物治疗中的最新进展,指出线粒体膜间隙蛋白质在诱导肿瘤细胞凋亡中具有重要作用.     

血清白蛋白与N-戊基-N′-(对氨基苯磺酸钠)硫脲(APT)相互作用的研究

我们已经报道了药物和蛋白质相互作用的机理研究[1],本文通过荧光光谱法研究新合成的试剂N-戊基-N′-(对氨基苯磺酸钠)硫脲(APT)与血清白蛋白的猝灭作用,可以了解他们的相互作用机理,并求出APT与血清白蛋白的结合常数,确定它们之间主要作用力的类型.这不仅拓展了新硫脲类试剂的应用领域,还为研究硫脲类药物对蛋白质的不同作用方式及其传输和药理作用提供了理论依据,对这些药物的临床医学研究具有重要的意义.同时可以从分子水平认识蛋白质分子与小分子之间相互作用的机理,为生命科学研究提供有用的信息和数据.当固定血清白蛋白的量,不断…     

静电场对大鼠皮肤角质层结构的调控

用热融法将多孔聚四氟乙烯(PTFE)、聚乙烯(PE)和聚丙烯(PP)制备多孔PTFE/PE/PP驻极体,通过表面电位衰减测量研究多孔PTFE/PE/PP驻极体的电荷储存稳定性;借助于电子显微镜和激光共聚焦显微镜观察静电场对大鼠皮肤角质层结构的影响,探讨静电场促进药物透皮吸收的作用机制.结果表明:1)多孔PTFE/PE/PP驻极体具有良好的电荷储存稳定性;2)静电场能有效改变皮肤角质层层状类脂的有序排列.     

肌红蛋白与药物作用的荧光光谱及同步荧光光谱研究——以盐酸洛美利嗪为例

以荧光光谱法和同步荧光光谱法研究肌红蛋白与药物盐酸洛美利嗪在水溶液中的相互作用,结果显示随着体系中盐酸洛美利嗪的增多,它们的相互作用增强,为阐明药物特别是脑血管扩张药与蛋白质作用提供了理论依据.     

诺氟沙星与牛血清白蛋白结合作用研究

应用荧光光谱法研究了水溶液中诺氟沙星和牛血清白蛋白的相互作用 ,测得该反应的结合常数K =9.92× 1 0 4 L/mol,结合位点数n =0 .85.实验结果表明 ,诺氟沙星和牛血清白蛋白分子间有较强的结合作用 ,且只形成一个位点数 .由此可见 ,诺氟沙星在体内可以被蛋白质所储存和转运 .     

保利尔胶囊对血液流变学的影响

为观察保利尔胶囊对血液流变学各项指标的影响,采用随机单盲对照试验方法对30例患者进行临床观察.结果表明:试验组治疗前后全血高切粘度、低切粘度及红细胞压积自身比较,无显著性差异(P>0.05).治疗前后血浆纤维蛋白原、血浆粘度自身比较,具有显著性差异(P<0.05),说明保利尔胶囊较好地降低血浆纤维蛋白原、血浆粘度作用,但两组间相比,无显著性差异(P>0.05),说明两组药物疗效相当.     

蛋白质药物：新世纪的朝阳产业

蛋白质药物是生物技术药物中重要组成部分之一,它是在蛋白质水平对疾病进行诊断、预防和治疗。当前全世界已有近百种蛋白质药物上市,几千种处于研发状态。 与以往小分子药物相比,蛋白质药物具有高活性、特异性强、低毒性、生物功能明确、有利于临床应用的特点。由于其成本低、成功率高、安全可靠,已成为医药产品中重要组成部分。但是由于分子质量较大,稳定性较差（引起蛋白质不稳定的原因有多种,如蛋白质的水解、氧化、沉淀、变性等）。因此,保持其稳定性（包括空间结构的稳定性）对发挥治疗作用至关重要。 随着药物研究的不断推进,蛋白质药物将为一些疾病的精确诊断和相关药物的开发奠定基础,更多的蛋白质药物将会面世,其蛋白质药物与化学药物在理化性质、生物学性质和工艺学性质等方面有很大区别,尤其是它在常温下稳定性差,在体内易降解,半衰期很短,在临床上常用的剂型为注射用溶液剂和注射用灭菌粉末,给药途径单一且必须频繁给药。这不仅给患者造成诸多不变,也不能满足日益增长的临床应用需求。因此,研究蛋白质药物给药新技术与新剂型并制备承高质量的制剂,也将随着如火如茶的生物医药产业和日新月异的药荆学科发展不断取得丰硕成果。     

核磁共振波谱研究蛋白质三维结构及功能

文中总结了中国科学技术大学生命科学学院核磁共振波谱实验室十多年来的工作.我们的研究主要集中于研究人和其他真核生物基因表达调控相关蛋白质以及细胞连接处相关蛋白质.在这两个体系中许多蛋白质与人类健康及疾病相关,有的可能是潜在的药物作用靶标.我们主要关注用核磁共振波谱方法研究蛋白质-蛋白质相互作用的结构基础.核磁共振适合研究在接近生理条件下的分子相互作用,特别是适合研究低亲和力的瞬态的复合物.它可以提供蛋白质相互作用界面,复合物结构,以及蛋白质相互识别过程动力学的信息.文中给出了一些例子.我们也研究蛋白质内部动力学,包括皮秒-纳秒时间尺度,与毫秒-微秒时间尺度的动力学.与圆二色谱及荧光光谱结合,核磁共振可以详细表征蛋白质的折叠与去折叠.文中给出的核磁共振应用的最后一个例子是用计算机虚拟筛选,核磁筛选,我们发现了一个人的双功能的磷酸酶的一种新类型的抑制剂,并研究了该抑制剂对细胞功能的影响.这一策略有可能用于早期药物的发现.     

食品添加剂与蛋白质相互作用的研究方法及进展

在食品科学领域中,从分子水平上研究生物蛋白质与食用性小分子的相互作用,对揭示食品添加剂在生物体中的分布、代谢、储存和添加剂对生物体的毒性等有着重要的参考意义.在查阅大量文献后,介绍了蛋白质与活性小分子在食品科学领域中的研究技术,总结了本领域的相关研究方法,综述了本领域近年来的研究成果,并对该领域未来的发展方向进行了分析和展望.     

蛋白质残基相互作用网络在线服务及可视化分析

蛋白质残基相互作用网络对理解蛋白质的结构特征，生物学功能和结合位点预测等研究有重要的作用.然而，现有的蛋白质残基相互作用分析方法易用性较差，需要下载和安装程序，较少提供友好易用的网络可视化功能，极大限制了蛋白质结构、功能和药物设计的相关研究.建立了蛋白质残基相互作用网络在线服务及可视化计算平台(http：//renault.fun)，用户不需要下载和编写程序，仅需上传蛋白质结构数据和口袋相关信息即可搭建蛋白质残基相互作用网络，并实现度中心度(degree centrality)，接近中心度(closeness centrality)和中介中心度(betweenness centrality)等网络特征的计算.该计算平台可进一步实现蛋白质残基相互作用网络的可视化，分析蛋白质表面结合口袋的网络特性，对理解蛋白质结构和药物设计的相关应用研究有较大的帮助.     

结核分枝杆菌酰基辅酶A脱氢酶的晶体学初步研究

结核病是人类健康的重要威胁. 随着多药耐药和广泛耐药结核分枝杆菌菌株,以及结核分枝杆菌与人类免疫缺陷病毒共感染现象的出现,寻找新的更安全有效的药物靶标迫在眉睫. 对来自结核分枝杆菌的潜在药物靶标进行蛋白三维结构的阐释是研究抗结核药物的有力手段之一. 酰基辅酶A 脱氢酶在结核分枝杆菌的脂肪酸合成酶系统中发挥着重要的作用,有可能成为潜在的药物靶标. 在大肠杆菌中克隆表达了酰基辅酶A 脱氢酶蛋白FadE5,经多步蛋白质的纯化和结晶条件的筛选后,获得具有衍射能力的蛋白质晶体,并收集了分辨率为0.29 nm 的X-射线衍射数据. 这些实验和衍射数据都为FadE5 蛋白的晶体结构与功能的研究奠定了基础.     

有机磷农药与牛血清白蛋白的相互作用及分析应用

应用荧光光谱、同步荧光光谱和紫外吸收光谱研究了3种有机磷农药(敌百虫、乐果和甲基对硫磷)与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用.实验表明敌百虫和甲基对硫磷与BSA的相互结合作用是单一静态猝灭过程,而乐果与BSA的相互结合作用是静态为主、动态为辅的猝灭过程.首次发现有机磷药物与BSA结合作用同药物疏水性直接相关:随着有机磷药物疏水性增大,猝灭常数KSV增大、BSA构象改变增大、药物与BSA的结合距离减小.有机磷药物与BSA的结合作用随着有机磷疏水性增强而增加.基于蛋白质与有机磷的结合作用研究,初步探讨了水产品中有机磷药物残留的提取方法,并利用气相色谱法检测了水产品中乐果和甲基对硫磷的含量,方法的回收率为85.71％～107.21％.该方法准确度高、简单、快速.