某些细菌产生的细胞分裂素的研究初探

用根瘤菌和固氮菌的7个菌株进行实验,以紫云英据瘤菌(Rhizobium astr-agali 1.8)产生细胞分裂素的能力最强。其产生的量与菌体生长情况有关。在菌体生长的对数期,产生细胞分裂素的量随着菌体生长量的增加而增加,到稳定期初,产生细胞分裂素的量可达最大值。之后,发酵液中细胞分裂素的量反而明显减少。此种细胞分裂素的紫外吸收特性与玉米素相类似。     

几种草坪草组织培养和植株再生的研究

以6种草坪草种子和2种草坪草愈伤组织为材料,研究了基本培养基种类和2,4-D浓度对愈伤组织诱导以及不同的细胞分裂素对分化的影响.试验结果表明,N6培养基较MS、NB培养基适合草坪草组织培养,诱导愈伤的2,4-D浓度宜采用6 mg/L,有机添加物对愈伤组织的生长有利,特别是肌醇对草坪草愈伤组织的生长有明显的促进作用.在分化培养中,不同材料所需的细胞分裂素适宜种类需要通过试验来确定.     

大肠杆菌DH5α及其耐乙酸突变株生长和产乙酸规律

大肠杆菌DH5α的耐乙酸突变株DA19在复合培养基中有生长优势,最大比生长速率提高,产乙酸减少,对乙酸的耐受力增加。在基本培养基中DA19生长优势更加明显,消耗葡萄糖速率加快,单位菌体产乙酸得率YA/X比DH5α低,以消耗葡萄糖为基准的菌体得率YX/G提高。在添加乙酸的基本培养基中,DA19细胞浓度高于DH5α,更快利用葡萄糖。DA19在高葡萄糖浓度下(102g／L)也能良好生长,菌体浓度达26g／L,YX/G为0．257g／g。在变速补料分批培养中,DA19可以有效地控制乙酸的生成,细胞浓度达到20g／L,YX/G为0．360g／g,为其在高密度培养中的应用奠定了基础。     

中华芦荟愈伤组织的诱导

以中华芦荟幼苗茎段为外植体,以MS为基本培养基,通过添加不同浓度的生长素、细胞分裂素或两者组合,以及添加Vc或活性炭(共350种组合),研究中华芦荟愈伤组织的诱导及生长情况.结果表明, 在单独使用不同种类的生长素时,不同浓度的生长素诱导的愈伤组织频率差异明显,且愈伤组织的生长状态也各异;单独使用细胞分裂素时,愈伤组织的诱导率极低.当组合不同浓度和种类的生长素和细胞分裂素时,愈伤组织诱导频率差异显著;同时发现在减轻愈伤组织褐化的效果上,Vc较活性炭好.通过对愈伤组织诱导结果的比较,MS 2.0 mg/L 6-BA 0.5 mg/L 2,4-D 10 mg/L Vc为中华芦荟愈伤组织诱导的较好培养基,愈伤组织诱导率达到91.4%,且愈伤组织生长较旺盛.     

响应面法优化南靖金线莲组培培养基工艺研究

采用南靖金线莲为组培材料,以金线莲接种60 d后鲜植株增殖倍数为评价指标,在研究培养基中各单因素对金线莲鲜植株增殖影响的基础上,再利用响应面法优化金线莲培养基。结果表明:细胞分裂素(6-BA)和生长素(NAA)对金线莲生长影响显著;同时各组培成分对金线莲增殖倍数影响顺序为:6-BANAA基本培养基MS蔗糖;最佳组培培养基制作工艺为1/2 MS+6-BA 2.5 mg/L+NAA 0.55 mg/L+蔗糖为38 g/L,在此条件下,金线莲增殖倍数可达9.48。     

月季茎尖离体培养的研究

试验以MS为基本培养基附加不同种类、不同浓度的植物激素,其对月季离体芽萌发、芽的生长增殖及诱导生根和移栽成活率进行研究.结果表明:以BA与NAA配合使用诱导离体芽的萌发效果优于单纯使用BA.继代间隔时间对增殖系数和幼苗生长有一定影响,以30 d继代一次为宜.7种继代增殖的培养基的处理中,MS BA2.0 mg/l NAA0.1 mg/l为最佳继代增殖培养基;生根培养基中,5种处理的生根结果均在90%以上,最佳生根培养基为1/2Ms NAA1.0 mg/l;温室过渡移栽时,以草炭土∶田园土=2∶1为基质,移栽成活率以1/2MS NAA1.0 mg/l为最高,达87%.     

雷公藤愈伤细胞悬浮培养生产雷公藤甲素的研究

对雷公藤叶愈伤组织进行悬浮培养,研究不同营养条件对雷公藤愈伤细胞生长及其雷公藤甲素质量分数的影响.结果表明：悬浮细胞在White培养基上增殖最快,而在MS培养基上生长最慢;White和MS培养基中悬浮细胞在第6天时雷公藤甲素质量分数最高,分别为7.14 mg/g和4.77 mg/g,而N6培养基中雷公藤甲素最大产量为6...     

卡拉胶固定化Nocardia sp.生产L(+)酒石酸

采用卡拉胶包埋具有环氧琥珀酸水解酶活性的诺卡氏菌菌体用于生产酒石酸。固定化的最适卡拉胶浓度为20 g/L,菌体浓度为200 g/L,交联剂戊二醛浓度为5 g/L,固定化后的酶活回收率可以达到70%。高浓度的环氧琥珀酸对水解反应产生抑制作用,游离细胞的米氏常数(Km)为0.234 m o l/L,抑制常数(KI)为0.22 m o l/L,固定化细胞则分别为0.31 m o l/L和0.21 m o l/L。游离细胞和固定化细胞反应的最适pH分别为8.0和8.5。细胞固定化以后,耐热稳定性增强。30°C 0.2m o l/L的底物浓度下,摇瓶中连续转化25批,L( )酒石酸的转化率接近100%。     

酵母细胞膜透性变化对发酵油莎豆粕制乙醇的影响

研究发现,通过在发酵培养基中添加0.8mmol/L棕榈酸可将燃料乙醇产量提高12.7%.生长在培养基中分别添加棕榈酸、亚油酸和不添加任何脂肪酸的菌体经过18%(v/v)乙醇冲击7h,酵母存活率分别为39%、5%和0%.生长于不同脂肪酸条件下酵母的细胞膜富含各自所添加的脂肪酸.菌体生长曲线表明在稳定期,生长于添加棕榈酸条件下的菌体的细胞浓度最大.菌体膜透性由大到小排列顺序为:不添加脂肪酸、添加亚油酸、添加棕榈酸;这与菌体乙醇耐性由弱到强的顺序完全一致,这说明菌体乙醇耐性的提高与细胞膜透性维持较低水平存在密切联系.从乙醇生成动力学模型参数分析可知:随着菌体乙醇耐性的增强,细胞的生长速率和细胞浓度对产物生成速率的贡献也在逐渐加强,这说明在发酵培养基中添加棕榈酸对于缩短发酵周期是有可能的.     

植物生长调节剂对月季组培萌芽和成芽的影响

以ＭＳ为基本培养基，附加不同种类、不同浓度的细胞分裂素（ＢＡ，６－苄基腺嘌呤，ＺＴ，玉米素）和生长素（ＮＡＡ，荼乙酸），对月季组培快速繁殖进行了研究。结果表明：在萌芽率上均以较低浓度的细胞分裂素与生长素按一定比例混合使用效果较好，适宜的培养基为ＭＳ＋ＢＡ１ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ．而在成芽率上以较高浓度的细胞分裂素单独使用效果最好，适宜的培养基为ＭＳ＋ＺＴ２ｍｇ／Ｌ。     

碳酸钾对组织培养中卡拉胶培养基特性的影响

研究了碳酸钾对植物组织培养中卡拉胶培养基特性的影响.在以去离子水为溶剂,卡拉胶为固定物的培养基中添加不同量的碳酸钾,培养菊花试管苗,研究结果表明,不同处理对培养基的特性都有影响,适于植物组织培养应用的适宜碳酸钾浓度为0.05g/L.     

发酵木糖高产乙醇树干毕赤酵母菌株的Co60诱变选育

【目的】选育能够利用木糖高产乙醇的酵母菌株。【方法】采用Co60诱变树干毕赤酵母(Pichia stipitis),筛选乙醇产量高的突变菌株,并对原始菌株、突变菌株的生长发酵特性和两个菌株对高浓度木糖、乙醇的耐受性进行比较。【结果】在YPX培养基上筛选获得1株能够高效发酵木糖的突变菌株1K-9。该菌株在50mL 15%FM发酵84h,发酵液乙醇含量最高达(51.034±0.112)g/L,比原始菌株提高10.05%;在500mL 15%FM发酵96h,乙醇含量最高达(51.390±0.119)g/L;在500mL 20%FM发酵156h,乙醇含量最高达(52.496±0.513)g/L。菌株1K-9在HSM培养基或含4%~5%乙醇的YPX培养基中生长良好,在含6%~7%乙醇的YPX培养基中生长缓慢。【结论】Co60诱变对于树干毕赤酵母(Pichia stipitis)菌株是有效的,能选育出木糖高产乙醇酵母菌株1K-9。     

生产L-精氨酸的脯氨酸营养缺陷型菌株的选育

以谷氨酸棒杆菌（Corynebacterium glutamicum）BC001为出发菌株,经紫外单因子诱变、紫外与硫酸二乙酯复合诱变处理,获得一株脯氨酸营养缺陷型菌株BC3071584（D- Arg^r; Pro^-）,菌株的结构类似物抗性为6 g/L,在含葡萄糖质量浓度为40 g/L的培养基中摇瓶发酵96 h,L-精氨酸产量为5.76 g/L,相比出发菌株提高了10倍。     

Mutant acetolactate synthase （ALS） gene as a selectable marker for Agrobacterium-mediated transformation of soybean

Soybean is one of the crops most difficult to be manipulated in vitro. Although several soybean marker genes, all the selectable markers used were from bacteria origin. To find suitable selectable marker gene from plant origin for soybean transformation, a mutant acetolactate synthase （ALS） gene from Arabidopsis thaliana was tested for Agrobacterium-mediated soybean embryo axis transformation with the herbicide Arsenal as the selective agent. Transgenic soybean plants were obtained after the herbicide se- lection and the To transgenic lines showed resistance to the herbicide at a concentration of 100 g/ha. ALS enzyme assay of To transgenic line also showed higher activity compared to the wild type control plant. PCR analysis of the T1 transgenic lines confirmed the integration and segregation of the transgene. Taken together, our results showed that the mutant ALS gene is a suitable selectable marker for soybean transformation.     

抗蛋氨酸结构类似物突变株的筛选

以北京棒杆菌AS1.299经诱变后获得的高产蛋氨酸突变株N3-10作为出发菌株, 依次采用蛋氨酸结构类似物亮氨酸、 原亮氨酸和乙硫氨酸平板对
诱变后的突变株进行筛选, 得到蛋氨酸高产菌株依次为L3,LN7和E31. 结果表明, 亮氨酸对突变株N3-10的抑制质量浓度为8 g/L, 原亮氨酸对突变株L3的抑制质量浓度为3 g/L, 乙硫氨酸对LN7突变株的抑制质量浓度为3 g/L, 经紫外诱变和3种蛋氨酸结构类似物的筛选, 最终获得蛋氨酸产量最高突变株E31, 产量为1.479 g/L, 比出发菌株N3 10蛋氨酸产量高0.379 g/L. 经5次传代, 产量稳定.     

紫外线诱变康宁木霉提高酶活力的研究

通过对康宁木霉菌种的诱变、筛选和固体发酵培养,研究了培养基、培养时间、诱变时间及pH值对诱变菌所产酶的活力的影响．结果表明,康宁木霉经诱变5min,在pH为6．0的玉米秸PDA培养基上培养72h,产生的C1酶和Cx酶的酶活力较高,C1酶的酶活力由73u／g提高到176u／g,增加了2．41倍,Cx酶的酶活力由798u／g提高到2069u／g,增加了2．59倍．     

菌落PCR方法筛选低能离子束辐射引起的IS插入突变

建立一种基于单拷贝基因的菌落PCR方法,筛选低能离子束辐射下IS因子插入引起的大肠杆菌lacI基因突变.PCR的优化结果显示,DMSO是一种合适的添加剂,而细胞的裂解方法和过程在菌落PCR中有比较关键的作用.经过测定,该方法的菌落PCR最低菌浓度约为1×105个菌.0.8%琼脂糖凝胶电泳结果显示,96个突变子的菌落PCR的成功率为95%以上.测序结果表明:两个由IS因子插入引起的突变被成功筛选.     

石油烷烃发酵生产长链二羧酸

热带假丝酵母ＬＨ１０和ＬＨ１２，在以正十四烷、正十六烷为唯一碳源的培养基中生长，可产生相应的长链二羧酸．ＬＨ１２经ＨＮＯ２诱变选育，得到１株利用正十四烷的突变株ＬＨ．在正交设计法试验获得的适宜培基配方中，发酵产生的ＤＣ１４产量为２８．７０ｇ·Ｌ－１．     

白地霉产漆酶条件优化及对偶氮染料脱色研究

对白地霉M3发酵产漆酶进行了研究。在培养的第四天,漆酶的活力达到最高。通过单因素和正交试验对产漆酶培养基优化进行了研究,结果表明葡萄糖、氯化铵为产漆酶最佳碳源和氮源,优化培养基成分为葡萄糖2g/L,硝酸铵1.5g/L,愈创木酚0.015mmol/L,硫酸铜0.06 mmol/L。5L机械搅拌发酵罐和7L气升发酵罐试验中,酶活力分别达到1428U/L、2216U/L,相比机械搅拌发酵罐气升发酵罐更适合白地霉M3产漆酶。粗酶液处理偶氮染料,反应1.5小时后,脱色率达到90.2%,脱色过程进行可见-紫外光谱扫描研究,表明粗酶能降解偶氮染料。     

Preparation of a gene-engineering mutant of bacteriorhodopsin BR-D96V and corresponding poly(vinyl alcohol)-based functional composite films

Bacteriorhodopsin (BR) exhibits, as a membrane protein in Halobacterium salinarum, unique photoresponsive behaviors, and shows promise as a functional information material. A new mutant of BR with the 96th aspartic acid replaced by valine (BR-D96V) was obtained and then a composite film of BR-D96V in a synthetic polymer matrix was prepared in this research. The mutant BR-D96V was expressed in a bacterio-opsin deficient halobacterial strain (L33) by gene engineering. Although valine is very hydrophobic, this point mutant keeps the basic biological activities, namely, photoelectric and photochromic responses. Nevertheless, the lifetime of M intermediate in the BR mutant is nearly two orders of magnitude longer than that of wild-type BR in neutral aqueous solution, which benefits its potential application as an information material. The M lifetime is further significantly prolonged after embedding BR-D96V into poly(vinyl alcohol) (PVA). It was also found that BR-D96V is very sensitive to water content in comparison with wild-type BR and another BR mutant.