神奇的酶

中国的古代文明,主要起源于黄河流域。那时,孩子们没有糖吃。三千年前的一个夏天,遇到了连阴雨,收获的大麦淋雨发了芽。人们舍不得丢弃,把它晒干,磨成粉,掺在米里煮稀饭吃。奇妙的事儿发生了。原来淡而无味的稀饭,没料到竟变成了甜甜蜜蜜的糖稀。中国人从此学会了制作“饴糖”。这是当时最受孩子们欢迎的一大发明。麦芽粉为什么能使淀粉变成糖呢?原来大麦在发芽时,产生了一种神奇的物质,叫做“糖化酶”。它们有独特的本领,专把淀粉变成糖。     

酶生物传感器的发展和酶的固定化

本文对酶生物传感器的结构、性能及三代酶生物传感器的发展作了评述。并详细介绍了制作酶生物传感器的关键技术,即酶固定化的一些方法,其中有物理包埋法、化学交联法、共价键合法、物理吸附法和电化学聚合法．并对今后的工作进行了展望。     

酶的分泌

本文介绍了酶分泌的几种模型,并讨论了与之相关的影响因素及其提高胞外酶产量的几种可能的途径。     

青霉素酰化酶研究——Ⅱ.酶的修饰和修饰酶的性质

本文介绍用β-硫酸酯乙砜基苯胺(SESA)活化右旋糖酐T2000以修饰大肠杆菌5852青霉素酰化酶。活化时500mg右旋糖酐需SESA 20mg。制备对氨基苯磺酰乙基葡聚糖(ABSE)-右旋糖酐的反应温度为80℃,与500mg活化右旋糖酐偶联的酰化酶酶量为100u,修饰率达88.3%。用琼脂糖(Sepharose 4B)或交联葡聚糖(Sephadex G150)柱层析分离得高分子量的修饰酶。修饰酶对热和pH的稳定性均优于自由酶,最适温度提高,但最适pH和高浓度青霉素G底物抑制现象没有改变。     

漆树漆酶的催化氧化作用Ⅺ原儿茶酸酯类的漆酶酶催氧化

用分光光度法对原儿茶酸甲酯、正丁酯、正辛酯底物在不同ｐＨ条件下的离解和漆酶催化氧化反应进行了考察，测定了它们在ｐＨ＝８．０时的反应速度常数．结果表明，不为漆酶所喜爱的亲水性底物（原儿茶酸），经过适当疏水化处理，可以有效地改善其反应性和提高漆酶的催化活性．ＥＳＲ结果证明，这些底物的漆酶催化反应都经历了半醌自由基阴离子阶段；酯基的存在不能保证底物顺利地氧化成相应邻醌，用二苯乙二胺只能捕获到少量羟基化的邻醌     

高纯度烟草过氧化物酶的酶学特性研究

从K326的烟叶中采用除植物褐色素新技术，经分离纯化，得到单一过氧化物酶I（TOP I），该酶是一种以血红素为辅基的含铁蛋白质。基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDITOF－MS）测得TOP I分子量为21888．5Da，等电点pI为3．5；酶反应的最适pH为6．0，最适温度为45℃，70℃保温15min残余活力为50％，具有良好的热稳定性，动力学分析表明：烟草中的过氧化物酶I与愈创木酚（一元酚）结合力最强，邻苯二酚（二元酚）次之，焦性没食子酸（三元酚）作用较小。TOP I和Km(愈创木酚）为0．132mmol/L;Km(H2O2)为0．598mmol/L.N3^-,CN^-1,Fe^3 ,Fe^2 和Sn^2对酶有较强烈的抑制作用，重金属离子Ag^ ,Pb^2 ,Cu^2 对该酶的活性有激活作用，而NO2^-、Hg^2 ,Cr^3 对酶活力无显著影响。     

不同来源重组漆酶的酶学特性

以来源于变色栓菌的同工酶LacA、LacB、LacC,杂色云芝的同工酶Lcc1、Lcc2,以及细菌ARA等6种重组漆酶为研究对象,比较了它们的最适反应温度、最适反应pH、温度稳定性、pH稳定性、动力学常数K_m,以及Cu²⁺对漆酶酶活的影响等酶学特性。结果表明:以邻联甲苯胺为底物时,LacA、LacB、LacC、Lcc1、Lcc2、ARA的最适反应温度分别为60、60、70、60、55和75 ℃; 以愈创木酚为底物时,6种漆酶的最适反应pH分别为5.0、5.0、4.5、5.0、4.5、7.0。LacA在催化ABTS、愈创木酚、邻联甲苯胺、丁香醛连氮以及2,6-二甲基苯酚时,其最适反应温度分别为55、70、60、20、65 ℃。此外,真菌漆酶在30～60 ℃,pH为2.5～7.0范围内都有较好的稳定性,细菌来源的漆酶在80 ℃下保持60 min,在pH=7.0时保持6 h仍具有较高的酶活力。Cu²⁺对细菌漆酶的激活作用要明显高于真菌漆酶。同时,以ABTS为底物时,K_m值最小,且不同来源漆酶的K_m值相差不大。因此,6种不同来源的重组漆酶在催化同一种底物时,酶学特性存在着差异性,同一种重组漆酶在催化不同底物时,其酶学特性也有较大差异。     

固定化β-葡萄糖苷酶的酶学性质

以壳聚糖微球为载体构建了固定化β-葡萄糖苷酶,研究了固定化和游离β-葡萄糖苷酶的酶学性质.结果表明:固定化和游离β-葡萄糖苷酶的最适pH均为4.5;固定化β-葡萄糖苷酶的最适温度为60℃,比游离酶低5℃;固定化β-葡萄糖苷酶的pH稳定性和贮存稳定性明显高于游离酶,但热稳定性略低于游离酶;固定化和游离β-葡萄糖苷酶的表观米氏常数和米氏常数分别为0.52 mmol/L和2.4 mmol/L;固定化β-葡萄糖苷酶重复分批酶解10 g/L的纤维二糖,其操作半衰期为31 d左右.     

苹果无性系品种的过氧化物酶同工酶酶谱分析

本试验将同工酶技术应用到果树品种间,尤其是无性系品种间差异分析中,证明在苹果无性系中,富士系与元帅系之间存在着较大的差别,而富士系与国光更为接近。另外,在富士系各品种间也存在着显著的差异。     

家蚕非编码RNA Bm-152功能初探

Bm-152是前期研究中发现的一个在家蚕丝腺中高表达的非编码RNA.采用实时荧光定量PCR技术对Bm-152在家蚕5龄到预蛹期不同发育天数丝腺中的表达谱进行检测.同时,在个体中过表达Bm-152,检测Bm-152可能参与的信号通路.结果显示,Bm-152在家蚕5龄幼虫丝腺发育过程中无明显的变化规律,但在吐丝第1天表达量较高,随后表达量又下降.通过在血淋巴中注射2μg piggyBac[A3-EGFP-A3-Bm-152]过表达载体,48h后发现Bm-152在丝腺组织中无明显过表达,但在非丝腺组织中可实现明显过表达,且表达量上调1.66倍;蜕皮激素信号通路基因Usp在非丝腺组织中上调1.95倍,E75A在非丝腺组织中上调2.26倍,保幼激素信号通路基因Met在非丝腺组织中上调1.79倍.表明非编码RNA Bm-152可能通过蜕皮激素和保幼激素信号通路参与家蚕发育,该结果为进一步探索Bm-152的功能提供了方向.     

保幼激素和蜕皮激素对家蚕翅原基生长分化的影响

翅原基（Wing disc）是昆虫幼虫体内成虫原基的一种,经生长分化后最终形成成虫翅。翅原基是研究昆虫变态发育过程的一个理想系统。为探究发育过程中翅原基的生长变化,本文以家蚕翅原基为材料,通过离体和石蜡切片的方法观察了翅原基从5龄第3天至蛹期0天的形态变化,并通过注射外源蜕皮激素活性物质20E和保幼激素类似物Methoprene探究了昆虫激素对家蚕翅原基生长分化的影响。结果显示,翅原基在幼虫阶段发育缓慢,从5龄第6天起生长分化逐渐加快,且翅原基的形态发生了显著变化,原本附着于翅原基腔口处且呈团状的造血器官逐渐分散至消失,而由气管组成的翅脉逐渐形成。外源激素处理的结果显示,2μg剂量的20E可促进翅原基的生长分化,而2μg 的Methoprene抑制了翅原基的生长分化。上述结果暗示了,蜕皮激素和保幼激素共同调控了翅原基的生长分化,并最终实现了翅原基的变态发育。     

家蚕BmMet2基因的组织定位与激素诱导表达分析

Met作为保幼激素(JH)的受体, 能编码bHLH-PAS结构域结合DNA并调控下游基因的表达。为了探究BmMet2是否作为JH的受体参与调控家蚕的生长发育,以家蚕为材料,用生物信息学方法分析了BmMet2蛋白结构,利用实时定量PCR检测其在翅原基不同时期和激素诱导下的表达情况;原核表达了BmMet2中能与DNA结合的蛋白区域BmMet2DBD,并制备了抗体;利用蛋白质印迹法(Western blotting)和免疫组化检测了BmMet2在家蚕多个时期和各组织中的定位表达情况。结果显示:在翅原基中,BmMet2在5龄第3天和5龄第6天有较高水平的表达,蛹期的表达量较低,这与家蚕体内JH的滴度一致;BmMet2在5龄第6天、吐丝期和预蛹期的胸节表皮、脂肪体及翅原基等组织中都有较高的表达;JH和20E均对BmMet2有不同程度的诱导,说明其可能同时参与了JH和20E的调控, 进而参与调控家蚕变态发育过程。     

长角血蜱蜕皮激素分泌部位的研究

饱血后第1，3，5天的长角血蜱，其卵巢和合神经节的蜕皮激素含量在组织培养前后均没有明显变化；体壁在组织培养后，蜕皮酮（E）含量比组织培养前分别增加了1．4，3和5．2倍；脂肪体单独进行组织培养时，E含量均略有下降，20－羟基蜕皮酮（20－E）均略有上升；脂肪体连同体壁一起培养时，20－E比组织培养前分别增加了1．7，2．3和4．7倍．显示了体壁是E的合成分泌部位，脂肪体是E转化为20－E的部位．     

不同食料对野生蚕蛹营养成份的影响

随机选取采食七种树叶的野生蚕蛹,分别测定粗蛋白,脂肪和氨基酸,结果发现:蚕蛹的粗蛋白、脂肪,十七种氨基酸随采食的树叶不同其含量也有差异,这一结果提示我们:不同食料对野生蚕蛹的蛋白质,脂肪和氨基酸的含量有明显的影响,通过不同的食料,可以改变野生蚕蛹中主要营养成份的含量。     

咪唑类化合物对天蚕幼虫生长发育的影响

本文报告了咪唑类化合物——金鹿三眠素对天蚕幼虫生长发育的影响。三龄0～48小时喂饲浸渍过500～2000ppm三眠素溶液的白栎鲜叶后,三眠蚕诱导率最高可达94.56％;诱导所得三眠蚕三、四龄历期明显延长,四龄起蚕体重和四龄末丝腺鲜重重于正常四眠蚕(对照),而三龄至结茧的总历期和熟蚕体重、丝腺鲜重则反之;仍为四眠蚕的三、五龄历期和三龄至结茧的总历期多长于对照、四龄起蚕和熟蚕体重大多重于对照。四龄0～48小时喂饲浸渍过500～2000ppm三眠素溶液白栎鲜叶后,极大多数仍为四眠蚕,三眠蚕诱导率最高仅为9.88％;其中四眠蚕四、五龄历期和四龄至结茧的总历期大多长于对照;诱导所得三眠蚕的四龄历期明显长于对照,但总历期反之。三眠蚕四龄期丝腺鲜重增长明显快于正常四眠蚕,但最终鲜重不及正常四眠蚕。     

蜂花粉对原生动物细胞分裂和蓖麻蚕生长发育的影响

本试验结果证明,蜂花粉对原生动物尾草履虫细胞分裂、个体增殖有一定的促进作用,对多细胞的蓖麻蚕有促进个体生长,缩短五龄日期,提前做茧,提高产丝量等作用。     

顽拗性种子黄皮胚轴细胞膜ATP酶活性电镜分析

选用顽拗性种子黄皮为实验材料,运用ＡＴＰ酶电镜组织化学方法,对种子胚轴细胞在贮存、脱水和萌动过程中ＡＴＰ酶活性进行了分析。发现与正常性种子不同,黄皮种子在贮存中就有较高的ＡＴＰ酶活性,种子脱水造成细胞原生质收缩是是细胞膜破裂和脱水伤害的主要原因。     

羊柴根瘤中ATP酶活性的超微结构定位

作者用透射电镜,观察了羊柴根瘤中宿主的细胞和细菌在发育中ＡＴＰ水解酶的分布及变化。结果表明,ＡＴＰ水解酶活性反应的磷酸铅沉淀粒,分布于宿主细胞壁外表面,质膜,胞间隙,细胞质,细菌周膜和拟菌体等部位,尤其在胞间隙中有大量的ＡＴＰ水解酶并有泡状分泌物。     

N，N－双脂肪酰胺乙基甘氨酸的合成及其抗菌活性研究

合成了三种新型表面活性杀菌剂，并研究了其对细菌、霉菌等几种蚕的主要病原体的抗菌活性，讨论了结构和抗菌活性之间的关系。