淡紫拟青霉培养过程中酶及可溶性蛋白的变化

对淡紫拟青霉培养过程POD同工酶进行跟踪测定,结果表明:在淡紫拟青霉的整个液体培养过程中,共出现了4条POD同工酶酶带,其迁移率(R f)分别为0.098、0.137、0.294和0.373,总体上,培养过程POD同工酶酶带的数量呈现减少的趋势,在第3-5 d时有3条POD同工酶酶带,培养至第6 d时,酶带减少了1条,只有2条酶带,从发酵的第7-10 d都只有1条POD同工酶酶带。淡紫拟青霉培养过程β-葡萄糖苷酶活性在培养的第1-6 d时变化比较平缓,酶活的变化为7.0 u/mL-9.438 u/mL,从培养的第7 d开始β-葡萄糖苷酶活性骤然升高,达到43.875 u/mL,培养8 d时,β-葡萄糖苷酶活性达到最高值55.0 u/mL,随后,β-葡萄糖苷酶活性动态平衡状态(9 d-11 d),12 d时开始呈现逐渐下降的稳定变化,从44.438 u/mL降至18.875u/mL。淡紫拟青霉培养过程的可溶性蛋白的电泳结果表明:培养各个阶段存在着共同的蛋白质电泳条带,在1-12 d的培养过程中,蛋白质条带呈现先增多,后减少,再增多的趋势,这反映了淡紫拟青霉发酵过程中基因表达的情况。     

D-海因酶基因重组子的构建和酶的表达活性

以中华根瘤菌(Sinorhizobium morelense)SS—ori总DNA为模板，用PCR法扩增D-海因酶基因，分别克隆到5种不同的载体，并转入5种不同的Escherichia coli菌株，获得25株工程菌，进行培养与诱导表达．细胞经超声处理后，通过SDS—PAGE和酶活性两种指标比较表达产物．结果表明，除3株工程菌具有D-海因酶活性外，其它均为无酶活性的不溶性包涵体，包涵体经变性、复性后，可部分获得有活性的D-海因酶，其比活为0．90U／mg，复性率约为20％．此外，对包涵体产生的原因及可能解决办法也进行了讨论．     

系列木聚糖降解酶基因同向串连表达的研究

采用分子克隆操作方法，通过设计多个SD序列的多克隆位点，首次成功构建了一个木聚糖降解酶系列基因同向串连表达载体，经筛选鉴定获得具有极耐热性的α-阿拉伯呋喃糖苷酶基因（XarB）、葡萄糖醛酸酶基冈（αguA）和木聚精酶基因（龄nB）同向串连的pHsh／XarB-aguA-XynB一株克隆菌，酶学分析表明重组菌株具有较好的阿拉伯糖苷酶、木糖苷酶、葡萄糖醛酸酶和木聚糖酶活性．酶活单位分别为：阿拉伯糖苷酶11．8U／mL，β-木糖苷酶6．87U／mL，α-葡萄糖醛酸酶1．53U／mL，木聚糖酶6．58U／mL．     

黑蛋巢菌属和红蛋巢菌属真菌的5种水解酶活性测定

通过测定黑蛋巢菌属9个菌株和红蛋巢菌属6个菌株的几丁质酶、β-1, 3葡聚糖酶、纤维素酶、木聚糖酶和木质素过氧化物酶共5种水解酶活性,为评价和合理利用鸟巢菌资源提供依据。结果表明,所有菌株均具有以上水解酶活性,同一种水解酶的活性在不同菌株之间以及同一菌株的不同水解酶活性差异显著。其中红蛋巢菌134表现出最大的几丁质酶活性,达到122.1 U/mL;黑蛋巢菌24的β-1, 3葡聚糖酶活性最强,达到143.7 U/mL;在25℃下培养,黑蛋巢菌185的纤维素酶活性最高,达到62.3 U/mL,35℃下培养,菌株185的纤维素酶活性也最高,达到了137.6 U/mL,所有菌株的纤维素酶活性在35℃培养4周比25℃培养2周要高;在25℃下培养时,菌株134的木聚糖酶活性最高,达到了464.8 U/mL,35℃培养4周时,菌株185具有最高的木聚糖酶活性,达到了745.6 U/mL,总体上木聚糖酶的活性在35℃培养4周高于25℃培养3周;黑蛋巢菌150表现出最高的木质素过氧化物酶活性,为0.297 U/mL。总体比较,菌株185的复合酶系较发达,有望利用该菌株完成植物秸杆的降解及利用。     

碳源对丝孢酵母(Trichosporon cutaneum ST_(851))生长和β-木聚糖酶诱导形成的影响

以单糖、双糖和多糖等８种有机化合物为碳源，培养丝孢酵母ＳＴ８５１，结果发现该菌株在上述各种碳源中均生长良好，但只有在木糖和木聚糖碳源中培养时，才呈现β－木聚糖酶活性；该菌株所产生的β－木聚糖酶是诱导酶，木糖和木聚糖是良好的诱导物；麸皮和半纤维素可大幅度提高酶活力．在液体或固态培养中，酶活力可分别达到１４．４ＩＵ／ｍｌ和７３．６ＩＵ／ｇ曲．５－氟尿嘧啶和放线菌酮均对该酵母所产的β－木聚糖酶有强列抑制作用     

一株产纤维素酶绿色木霉的筛选及发酵条件优化

从土壤中筛选到一株具有较高纤维素酶活性的绿色木霉，对其液态发酵条件进行了优化．以羧甲基纤维素钠为碳源，含量0．75％，(NH4)2SO4为氮源，含量0．4％，250mL三角瓶20％装量，5％接种量，培养基初始pH为4，28℃，180r／min培养96h，优化后发酵液中Cx酶活达到277.7U／mL发酵液．     

基于不同底物筛选内蒙古大青山低温纤维素降解细菌

分别以微晶纤维素、羧甲基纤维素(CMC)和D-水杨苷三种不同底物为唯一碳源在10℃下对内蒙古大青山土壤中的低温纤维素降解细菌进行筛选并测定纤维素酶活.结果共分离到13株具有低温降解纤维素能力的细菌.经16SrDNA序列分析显示分属于9个不同的属,其中,以微晶纤维素为底物分离到的有4株,降解能力较强的菌株为QW-C,外切葡聚糖酶活性可达28.22U/mL,属于不动杆菌属(Acinetobacter);以CMC为底物分离到的有5株,降解能力较强的菌株是QC-A和QC-B1,内切葡聚糖酶活性可达10.67U/mL,分别属于短杆菌属(Brevibacterium)和类芽孢杆菌属(Paenibacillus);以D-水杨苷为底物分离到的有4株,降解能力较强的菌株是QS-B,β-葡萄糖苷酶活性可达20.22U/mL,属于罗河杆菌属(Rhodanobacter).其中,菌株QC-B1与相近菌种的相似性小于97%,可能为新种.     

低温胁迫对拟南芥G蛋白突变体SOD、POD酶活性和丙二醛含量的影响

采用分光光度法测定了低温胁迫下两种拟南芥G蛋白突变体的超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）的活性及丙二醛（MDA）含量的变化。结果表明：在低温12h,野生型（Ws）和突变体gpal-1的SOD酶活性迅速升高,分别为15．501U／mgprotein和9．453U／mgpro—tein,突变体gpal-2则在低温24h升至最高点,酶活性为6．325U／mgprotein。低温胁迫下,三种材料的POD酶活性都呈现降低趋势,而MDA含量呈上升趋势。初步证明外界低温刺激与植物细胞内G蛋白有一定的关联。     

重组毕赤酵母生产β-葡萄糖苷酶发酵条件优化及固定化研究

为了实现绿色木霉菌Trichoderma viride来源的β-葡萄糖苷酶在重组毕赤酵母中的高效表达,对重组菌P.pastoris KM71/pPIC9K-bgl1/pPICZ A-pdi进行3.6L罐发酵培养条件优化。结果表明,当诱导温度28℃,初始诱导菌体浓度50g/L,诱导阶段甲醇体积分数1.0%时,酶活力最高,能达到1452U/mL。同时以壳聚糖为载体、戊二醛为交联剂,采用吸附交联法对β-葡萄糖苷酶进行固定化。结果表明,当壳聚糖质量浓度0.03g/mL,戊二醛质量浓度0.008g/mL,游离酶添加量400U/g(1g壳聚糖微球加酶量为400U),固定化吸附时间20h时,固定化酶酶活回收率最高,达到65.4%。以800g/L葡萄糖为底物,优化的转化条件下连续转化6次,低聚龙胆糖产率仍达到15.2%,显示出该固定化酶具有较好的持续利用性及较高的低聚龙胆糖生产能力。     

黄瓜离体雌核发育的过程及其早期生化变化研究

本首次研究了黄瓜离体雌核发育的形态及细胞学过程，以及培养早期生理、生化的变化．结果表明：雌核发育在培养的前6d即已开始，24d时形成胚状体，40d时形成成熟的胚状体．雌核发育的前6d，外植体POD酶活性急剧上升，SOD先上升后下降，Q酶活性明显上升但低于非雌核发育，Ca^2 -ATP酶和Mg^2--ATP酶活性变化较小且均低于非雌核发育．雌核发育的外植体IAA和ABA含量明显下降，iPA，Zr，CA3和CA4含量均有所下降并明显低于非雌核发育外植体．     

间歇出酶对里氏木霉产纤维素酶的影响

在分批补料的基础上,采用间歇出酶的方法,对里氏木霉产纤维素酶进行了研究。结果表明:分批补料过程中最佳的补料速度为5.5 g/(L·d),在此条件下产酶第8天滤纸酶活力和β-葡萄糖苷酶活力达到14.40 U/mL和1.59 U/mL。在分批补料的基础上进行间歇出酶,与对照相比,第4、6、8天出酶模式(模式1)时,总滤纸酶活力提高18.14%; 第4、7天出酶模式(模式2)时,总滤纸酶活力提高17.75%; 第5、8天出酶模式(模式3)时,总滤纸酶活力提高27.35%。研究表明,通过间歇出酶可以有效提高纤维素酶总滤纸酶的活力。     

大肠杆菌的培养及L-天冬酰胺酶活力的测定

讨论了大肠杆菌L-天冬酰胺酶发酵液酶活力的影响因素，筛选了大肠杆菌产酶的优化条件。发现了发酵液酶活力的最适pH随缓冲介质的变化而变化；甘氨酸介质中，pH6．50～9．50均适于酶活测定，且pH8．00时酶活最高；硼酸、Tris、磷酸介质中，在pH8．50时，酶活力依次下降；酶反应的适宜温度40～50℃．对菌株培养的研究表明，葡萄糖对产酶有抑制作用，适当提高摇床转速可使发酵液酶活力由原来的136U／mL增至145U／mL，在确定的最优培养条件37℃，pH7．00，250r／min下，产酶稳定期可持续12h。     

一株具木聚糖酶活链霉菌的鉴定及其木聚糖降解酶系分析

分离得到一株具木聚糖酶活性的放线菌菌株pp2，该菌株具有典型链霉菌属的形态学特征．通过对其进行形态学、生理生化特性以及16S rRNA基因序列等方面的分类学研究。菌株pp2初步鉴定为链霉菌属的一个潜在新种，通过对菌株pp2的酶系研究发现该菌株胞外发酵液具木聚糖酶活性，细胞破碎液中具α-L-阿拉伯糖苷酶活性和β-D-本糖苷酶活性．其中木聚糖酶酶活力为30．3U／mg，酶反应最适温度为65℃，最适pH为5．4；37℃下稳定性很好，60℃下酶活性衰减很快、α-L-阿拉伯糖苷酶酶活力为1．81U／mg。酶反应最适温度为55℃，最适pH为6．0，55℃下稳定性能很好．β-D-木糖苷酶酶活力为0．04U／mg．     

悬浮培养型 BHK -21 细胞的生长规律和不同接种密度培养效果的研究

为探索悬浮培养型BHK-21细胞的生长规律和最佳接种密度,以3．0×10^5个／mL、4．0×10^5个／mL、5．0×10^5个／mL、6．0×10^5个/mL和7．0×10^5个／mL等5个接种密度培养了悬浮培养型BHK-21细胞,绘制了细胞生长曲线和活力变化曲线．结果显示,悬浮培养型BHK-21细胞生长曲线呈“S”型,接种培养前24h细胞处于适应期,生长曲线上密度增长不大,期后细胞进入对数增长期,生长密度呈指数增长．以3．0×10^5个／mL和4．0×10^5个／mL接种培养的在120h达到最大增殖密度,分别为4．65×100个／mL和5．59×10^6个／mL,倍增时间分别为26．9h和26．7h;以5．0×10^6个／mL、6．0×10^6个/mL和7．0×10^6个／mL接种培养的在96h就达到最大增殖密度,分别为5．14×10^6个／mL、5．36×10^6个／mL和5．1×10^6个／mL,倍增时间分别为22．4h、24．1h和25．2h．各组在培养的96h以前细胞活力均在90％以上且变化较小,120h和144h时细胞活力开始下降,且接种密度越高活力下降越快．该细胞以4．0×10^5个／mL、5．0×10^5个／mL、6．0×10^5个／mL接种培养能达到较高培养密度,细胞生长快,且细胞峰值持续时间长．     

盐度、温度和pH对2株海南地衣芽孢杆菌相对蛋白酶活性的影响

采用脱脂牛奶平板法,测定了不同盐度、温度和pH对2株分离白海南热带海水养殖系统的地衣芽孢杆菌（Bacillus lichen@rmis）Pb．WC09001和Pb—WC09002的相对蛋白酶活性的影响．结果表明：随着盐度的增加,2个菌株的相对蛋白酶活性都趋于减弱,当盐度增加到50时,仅Pb-WC09001还存在一定的酶活性,其相对蛋白酶活性为1．56U·mL-1,说明Pb—WC09001对高盐度环境的适应性更强．此外,还测定了在18～38℃（以4℃为梯度差）范围内菌株的相对蛋白酶活性,当在与菌体培养相同的温度下测定培养液的酶活时,Pb-WC09001与Pb—WC09002酶活性最高的温度均为34℃;当在30℃测定2个菌株在不同温度下的培养液酶活时,酶活性最高的培养液所对应的培养温度分别为22℃和30℃,说明这2个菌株在相同温度下可产生不同的蛋白酶,同时,Pb-WC09001在低温环境下的相对酶活性强于Pb-WC09002．在30℃、盐度30、菌体终浓度为2×10^3／mL时,Pb-WC09001在pH8．0、Pb—WC09002在pH7．5时的酶活性最高,相对酶活均为2．74U·mL-1,因此,Pb-WC09001对海水环境（pH8．0—8．4）的适应性更强．     

响应面法优化黑曲霉产β-葡萄糖苷酶培养基的研究

为获得黑曲霉Aspergillus niger M85菌株较高的β-葡萄糖苷酶酶活,本文采用响应面法对该菌株产β-葡萄糖苷酶关键发酵过程参数进行优化。Plackett - Burman试验结果表明,麸皮和MgSO4?7H2O的浓度对产酶结果影响显著。采用最陡爬坡实验逼近最大响应区域,得到麸皮浓度为17 g/L,MgSO4?7H2O浓度为8 g/L,结合中心组合实验及响应面法分析建立了以β-葡萄糖苷酶酶活力为响应值的二次回归方程模型：Y=-19.1057+0.4526X2+ 3.8260X5-0.02775X2X5- 6.3569×10-3X22-0.2085X52 。对方程求极值点得到优化的发酵过程参数：麸皮浓度为18.345 g/L,MgSO4?7H2O浓度为7.963 g/L。在优化后的发酵条件下培养4天,菌株产β-葡萄糖苷酶活力可达0.2640 U/mL,比优化前提高了61.97%。预测模型可靠性高,可应用于β-葡萄糖苷酶发酵条件的优化。产酶进程结果表明：发酵5天后β-葡萄糖苷酶活力可达到最高值0.3334 U/mL,还原糖浓度仅为0.49g/L。     

GMA-NVP-MBAA三元聚合物载体固定化青霉素酰化酶性能的研究

利用反相悬浮聚合技术合成了珠状甲基丙烯酸缩水甘油酯—N—乙烯砒咯烷酮—N，N’—亚甲基双丙烯酰(GMA—NVP—MBAA)三元GNM共聚物．研究表明，GMA与NVP质量比为1：10，MBAA为单体总量50％合成的GNM(50)固定青霉素酰化酶，固定化酶水解青霉素G钾盐活性达491U／g．固定化酶经4次使用后活性达到稳定值为444U／g，再经14次使用，活性几乎不变．同时，考察了水解反应温度、pH值对固定化酶活性的影响．     

利用曲霉sp.HX-1发酵稻草秸秆制备纤维素酶

以稻草秸秆原料,利用曲霉sp.HX-1固态发酵生产纤维素酶,研究了不同发酵时间、不同氮源和氮源浓度对曲霉sp.HX-1纤维素酶系的影响,并最终用硫酸铵分级沉淀和低温冷冻干燥的方法得到混合纤维素酶干品.结果表明,发酵6 d后稻草秸秆产生的纤维素酶活力单位最大,分别为CMC酶307 U/mL,C1酶841 U/mL、β-葡萄糖苷酶205 U/mL.以不同氮源优化发酵条件时发现,NH4NO3质量浓度为1 g/L时CMC酶活力达到1 652 U/mL,且失重率也到达最大值17.42%;NH4Cl质量浓度为0.5 g/L时,C1酶活力达到1 807 U/mL;尿素（UREA）质量浓度为2.0 g/L时,β-葡萄糖苷酶活力为2 033 U/mL,这表明氮源对曲霉sp.HX-1纤维素酶系的影响很大.最后在NH4NO3质量浓度为1.0 g/L的条件下,将120 g稻草秸秆发酵6 d,从发酵液中提取得到8.851 7 g混合纤维素酶的干品.此实验为以后探讨碳源或者其他因素的影响提供方法借鉴,也可以为获得纤维素酶混合酶干品的获得提供参考方法.     

固化液对α-磷酸钙-磷酸四钙骨水泥强度的影响

用磷酸氢二钠（SPDD）和／或柠檬酸配制了不同pH值的固化液，在1300℃煅烧β-磷酸三钙制备了α-磷酸三钙（α—TCP），在1420℃煅烧等摩尔混合的二水磷酸氢钙和碳酸钙制备了磷酸四钙（TeCP）．制备骨水泥样品时固化液与固相的比（L／P）为0．25～0．45mL／g．测量了骨水泥的抗压强度和孔隙率，考察了L／P和固化液组成对水泥抗压强度的影响．结果表明：抗压强度随固化液pH值降低而增大，抗压强度达到最大值有一个最优的L／P．在L／P=0．30mL／g and pH=5的条件下，抗压强度达到21．69MP．     

金银花的化学成分研究

从微波处理后中药金银花中通过溶剂提取，硅胶柱层析，SephadexLH-20拄层析和制备薄层层析等方法分离得到三个化舍物，波谱分析（核磁共振氢谱、碳谱和质谱）确定它们的结构分别为槲皮素-3-O—β—D-葡萄糖苷（quercetin-3-O—β—D—glucoside），绿原酸（chlorogcnic acid），β-谷甾醇（β-sitosterol）。