细胞中心体的复制与调控

中心体复制异常与基因组不稳定存在相关性,并能引起某些肿瘤疾病发生.中心体复制与细胞周期事件相耦合,许多细胞周期调节蛋白和中心体蛋白调节着中心体的复制,中心体复制还受癌基因和抑癌基因及其表达产物的调节.研究中心体复制调控机制,对肿瘤的早期诊断和治疗有重要的作用.     

Control of Initiation of Chromosomal Replication in Escherichia coli

大肠杆菌染色体具唯一一个复制原点叫oriC.在oriC上染色体的复制起始是个严格控制的细胞过程.首先,复制起始蛋白DnaA与oriC上DnaA框相互作用,使DNA分子弯曲,并在IHF和HU等蛋白的帮助下,使oriC双链DNA在其富含AT区解链,便起始复制.DnaA蛋白有两种形式,即ATP-DnaA和ADP-DnaA,前者有复制起始活性,后者则没有.DnaA蛋白浓度的提高和由DRAS使ADP-DnaA激活为ATP-DnaA都会导致额外的复制起始,说明ATP-DnaA是个复制起始正调控因子.DiaA蛋白通过与ATP-DnaA的相互作用来促使ATPDnaA-oriC复合物的形成,从而激发复制起始.然而,在每个细胞周期中,DNA复制起始只发生一次.有不同的分子机制抑制在同一个细胞周期的同一复制原点上重复起始复制.1)复制原点的隔绝防止复制起始.由SeqA蛋白结合在oriC中半甲基化的多个GATC位点,使oriC失去复制起始活性;2)由RIDA使ATP-DnaA降解为ADP-DnaA,使DnaA失去复制起始活性;3)Dps蛋白抑制依赖DnaA蛋白的oriC解链;4)datA序列通过降低作用于oriC的DnaA可用量来延缓复制起始时间.显然,一个复杂的调控网络控制着复制起始.本文回顾、总结和分析了大肠杆菌复制起始调控机制.     

大肠杆菌染色体复制起始调控

大肠杆菌染色体具唯一一个复制原点叫oriC.在oriC上染色体的复制起始是个严格控制的细胞过程.首先,复制起始蛋白DnaA与oriC上DnaA框相互作用,使DNA分子弯曲,并在IHF和HU等蛋白的帮助下,使oriC双链DNA在其富含AT区解链,便起始复制.DnaA蛋白有两种形式,即ATP-DnaA和ADP-DnaA,前者有复制起始活性,后者则没有.DnaA蛋白浓度的提高和由DRAS使ADP-DnaA激活为ATP-DnaA都会导致额外的复制起始,说明ATP-DnaA是个复制起始正调控因子.DiaA蛋白通过与ATP-DnaA的相互作用来促使ATP-DnaA-oriC复合物的形成,从而激发复制起始.然而,在每个细胞周期中,DNA复制起始只发生一次.有不同的分子机制抑制在同一个细胞周期的同一复制原点上重复起始复制.1)复制原点的隔绝防止复制起始.由SeqA蛋白结合在oriC中半甲基化的多个GATC位点,使oriC失去复制起始活性;2)由RIDA使ATP-DnaA降解为ADP-DnaA,使DnaA失去复制起始活性;3)Dps蛋白抑制依赖DnaA蛋白的oriC解链;4)datA序列通过降低作用于oriC的DnaA可用量来延缓复制起始时间.显然,一个复杂的调控网络控制着复制起始.本文回顾、总结和分析了大肠杆菌复制起始调控机制.     

中心体复制和遗传的研究

中心体是动物细胞主要的微管组织中心,中心体异常会导致染色体分离紊乱,造成不育甚至引起癌症。近年来,随着人们对中心体的不断研究,发现了中心体一些新的性质。综述了中心体复制与染色体分离的关系、中心粒的装配以及中心体的遗传。通过介绍国内外关于中心体一些最新的研究状况,为了解中心体在细胞分裂和生物发育中的意义提供一些参考。     

增殖细胞核抗原（PCNA）的分子结构及其生物学功能研究进展

增殖细胞核抗原（PCNA）是真核生物复制复合体的核心成分，具有特殊的环状三级结构. 作为真核细胞DNA聚合酶δ的推动因子，与不同复制相关蛋白结合，协调DNA复制过程. 同时PCNA还作为功能转换因子，通过不同调控方式与多种细胞因子作用，参与了DNA损伤修复、细胞周期调控及凋亡等许多重要的细胞事件. 另外作为细胞增殖的指标，PCNA与肿瘤等细胞增殖性疾病的发生和发展存在相关性，因此在临床上对PCNA的深入研究有重要意义. 文中就PCNA的“功能性”结构及其在不同细胞事件中的功能转换（Function Switch）进行简要综述.     

p16与原发性肝细胞癌的研究进展

p16基因又称肿瘤抑制基因(MTS1),是近年来发现的一个重要的抑癌基因,在细胞周期中发挥重要的调节作用.现对p16基因的结构、p16蛋白的作用途径以及该基因突变与原发性肝细胞癌的关系进行综述.     

过表达Pseudomonas mendocina复制起始相关蛋白提高菌体繁殖速度

复制起始蛋白DnaA通过识别复制起始位点oriC上的特殊序列,并招募复制复合体起始复制,它通过绑定ATP或ADP来对复制起始的开始进行调节.DNA聚合酶III的β亚基DnaN蛋白,负责将DNA聚合酶III连接到已经解旋的DNA上,以开始复制过程.通过过表达复制起始相关蛋白DnaA和DnaN,促进了菌体的繁殖能力,优化了菌体的生长状态,缩短了菌体倍增时间,为构建Pseudomonas mendocina工程菌株提供了参考.     

细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)抑制剂的分子对接和定量构效关系研究

细胞周期蛋白依赖性激酶(Cyclin-dependent Kinase,CDK)在细胞周期的调控中起着重要的作用.其中CDK2调节细胞周期S期染色体DNA的复制,因此CDK2的抑制剂是一些细胞异常增殖的疾病,如癌症,阿耳茨海默氏病的潜在药物.     

AcMNPV p95基因一段339 bp序列在病毒复制中的作用

杆状病毒苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)的p95基因编码的P95蛋白是病毒核衣壳的组成部分,也是虫体经口感染相关因子PIF(Per os Infectivity Factor)复合体的组成部分.前期研究表明,完整的P95蛋白对病毒的复制是非必需的,其中一段450bp的序列可以部分弥补p95基因的作用.本研究将p95基因一段339bp的片段(Core339,AcMNPV基因组位置:69 576~69 914bp)以正反两个方向分别插入到p95基因敲除的AcMNPV基因组中多角体位点的polyA之后,构建了两株重组病毒vP95K/EGFP/339+和vP95K/EGFP/339-.该两株病毒能在Sf9细胞中正常复制,复制水平与p95基因正常的AcEGFP相当,但复制速度较慢.重组病毒感染细胞的Western blot分析未检测到P95蛋白的表达.这一结果表明P95蛋白的缺失对病毒在细胞中的复制没有显著影响,但核心片段Core339对于病毒复制具有关键作用.     

芽殖酵母细胞周期过程不同时期的定量观测

在芽殖酵母中构建CDC10-mCherry和SPC42-mCherry荧光蛋白, 作为酵母细胞周期不同时期的报告系统。根据酵母细胞中芽环(CDC10-mCherry)的产生和消失以及纺锤体极体(SPC42-mCherry)的复制和分离,可以测量细胞周期中 G1期、S期、Early M期和Late M期的时间长度。在此报告系统的基础上, 分别构建S期细胞周期蛋白CLB5-GFP和M 期细胞周期蛋白CLB2-GFP菌株, 实现单细胞观测, 检验报告系统工作的稳定性和准确性。该报告系统可作为研究酵母细胞周期不同时期时间长度等定量生物学问题的背景菌株。     

Identification of a novel resident centrosomal protein

One human autoimmune serum was identified to react with centrosomes by immunofluorescence. We applied the affinity purification of membrane-bound antibody technique and demonstrated that the antibodies present in this antiserum reacted with a 31/29 ku centrosomal antigen. Immunofluorescence showed that this antigen is located at centrosome in a cell-cycle independent manner, and thereby it belongs to the family of centrosomal residents. We then uti- lized this autoimmune serum and antibodies against centrin and gamma-tubulin to investigate changes of centrosome cycle kinetics during premature chromosome condensation (PCC) artificially induced in V79-8 cells. We show here that centrosomal proteins continue to express when cells are synchronized at G1/S boundary and S phase by Hydroxyurea (HU). During this time, the addition of caffeine causes cells with unreplicated genome to go into mitosis, and induces the separation of the replicated centrosomes. These results suggest that the coordination of DNA synthesis and centrosome replication in the normal cell cycle can be uncoupled. Cells ensure that centrosome duplicates once, and only once during each DNA synthesis cycle through the tight and subtle coordination of cell cycle engine molecules, and thereby the assembly of bipolar spindle and the accurate transmission of genetic information.     

基于Oracle复制和分区技术的分布式网通销售系统的研究与设计

四川网通数据库具有数据量庞大、分布式管理的特点。为了实现双层管理,构建分布式数据库系统具有重要意义。复制技术能解决数据之间数据同步问题,orac le分区表技术能够区分数据源,保证数据安全的同时,提高数据处理效率。本文基于orac le9 i的复制和分区管理技术对分布式销售系统数据库做了改造,并用实例论证了其效率和可性行。     

无线网络中的动态数据复制算法研究

数据复制是实现容错的一种重要方法。介绍了有线网络中的静态与动态数据复制算法。提出了无线网络中的动态数据复制算法。该算法能根据用户信息，动态调整数据复制的数目及放置位置。实验结果表明，新的算法在读取成功率与平均响应时间方面有明显的提高.     

一个数据库双向复制的解决方案

描述了几种常用的数据库双向复制模式，并提出了一种更为灵活的复制方案。该方案支持双向复制，能够选择被复制的数据，并且数据可以位于不同类型的数据库服务器上。它易于扩展，具有较高效率和高可用性。     

容忍入侵系统中复制技术的研究

针对传统的被动复制技术不能容忍拜占庭错误的缺点,提出了一种改进的被动复制技术,使其可以初步容忍拜占庭错误,并给出了模型。该模型通过增加硬件检测机制,克服了被动复制的缺点,充分利用了被动复制开销小、容易实现的优点。组通信系统的可靠性一直是容忍入侵系统设计的重点和难点。群组通信系统通信量大,基于传统的组通信模型,设计了一种可靠组通信模型,其优点是通信量小,而且保证了各个复制品之间的最终一致性。     

Centrosomes direct cell polarity independently of microtubule assembly in C. elegans embryos

Polarity establishment requires a symmetry-breaking event, resulting in an axis along which determinants are segregated. In Caenorhabditis elegans, oocytes are apolar and are triggered to polarize rapidly along one axis after fertilization. The establishment of this first polarity axis is revealed by the asymmetric distribution of PAR proteins and cortical activity in the one-celled embryo. Current evidence suggests that the centrosome-pronucleus complex contributed by the sperm is involved in defining the polarization axis. Here we directly assess the contribution of the centrosome to polarity establishment by laser ablating the centrosome before and during polarization. We find that the centrosome is required to initiate polarity but not to maintain it. Initiation of polarity coincides with the proximity of the centrosome to the cortex and the assembly of pericentriolar material on the immature sperm centrosome. Depletion of microtubules or the microtubule nucleator gamma-tubulin did not affect polarity establishment. These results demonstrate that the centrosome provides an initiating signal that polarizes C. elegans embryos and indicate that this signalling event might be independent of the role of the centrosome as a microtubule nucleator.     

一种新型的数据网格动态副本策略

许多科学实验和工程应用会产生TB或PB级的数据.这样庞大的数据体需要分布在世界不同地点的众多计算资源协同处理,高性能网格为使这些数据高效传送到地理上不同的位置提供了理想的手段.当用户频繁的访问大量远程数据时,动态副本可以有效地减少网格中的带宽消耗和访问延迟.在多层数据网格架构基础上提出了一种新型的动态副本策略:快速瀑布模型算法.Op-torSi m仿真器也被修改用以适应这种新型的策略.仿真结果表明,在随机访问模式下,对比FastSpread,LRU和Economy-Zipf ,快速瀑布策略能有效地减少平均数据访问时间,并且其优势随着用户提交作业数量的增加而增大.     

Potential existence of two independent centrosometargeting domains in PP4

Protein phosphatase 4 (PP4) is an important member in the PPP family of protein Ser/Thr phosphatases. It has been proven to regulate a variety of cellular processes such as centrosome maturation, micro- tubule nucleation, splicesome assembly, and JNK pathway activation. Compared to the crystallized and structurally well defined phosphatase PP1 and PP2B, little is known about the structure of PP4. Besides the conserved motifs characteristic of the PPP family, no information is available on the other domains of PP4. PP4 is reported to localize to the centrosome in many species such as Drosophila, Caenor- habditis elegans and mammalian cells, which suggests a conserved role of PP4 in the regulation of centrosome function. Unlike several other centrosomal proteins, no sequence has been identified for PP4 that can target it to specific centrosomal localization. In this study, we used a combination of PCR mutagenesis and transient expression of GFP-tagged proteins in mammalian cells, and identified two PP4 centrosome-targeting domains of 68―136 and 134―220 aa. These two domains may be associated for appropriate localization to the centrosome. The findings are useful for further elucidating the func- tion of the domains and other structural characteristics of PP4.