肝细胞生长因子对体外缺血/再灌注星形胶质细胞氧化应激的影响

目的:探讨肝细胞生长因子(HGF)对体外缺血/再灌注导致的星形胶质细胞氧化应激的影响.方法:取体外培养的大鼠大脑皮层星形胶质细胞,建立缺血/再灌注损伤细胞模型.用HGF预处理星形胶质细胞后,进行缺血/再灌注.测定细胞活力、活性氧簇(ROS)水平、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性及谷胱甘肽(GSH)含量.RT-PCR检测细胞Nrf2 mRNA的表达,Western blotting检测胞浆和胞核Nrf2蛋白的表达.结果:星形胶质细胞缺血/再灌注后,细胞活力降低,ROS水平及MDA含量升高,SOD活性及GSH含量降低.Nrf2 mRNA及胞浆、胞核Nrf2蛋白水平均下调.HGF能明显升高细胞活力,降低ROS水平及MDA含量,升高SOD活性及GSH含量,上调Nrf2 mRNA及胞浆、胞核Nrf2蛋白的表达.结论:HGF能减轻体外缺血/再灌注导致的星形胶质细胞氧化应激损伤,可能与HGF调节Nrf2表达及核转位水平、调控氧化/抗氧化系统的平衡有关.     

化学防癌药物keap1-nrf2信号通路活化剂的研究进展

化学防癌是应用天然的或合成的化学物质来阻断、抑制或治疗癌症的过程,这一过程与肝内的Ⅱ相代谢酶的作用有关.研究表明,Keap1/Nrf2/ARE信号传导通路能有效地诱导Ⅱ相代谢酶基因的表达,而这一作用是作为碱性亮氨酸拉链蛋白家族的转录因子nrf2从胞质蛋白keap1上解离,然后转位至核内并与ARE结合后完成.这一传导通路机制加深了我们对于化学防癌机制的认识,并且为化学防癌药物的筛选提供了有效的靶点.就以Keap1/Nrf2/ARE传导通路为靶点的化学防癌药物的国内外研究进展进行了综述.     

Nrf2-ARE信号通路抑制剂OAD-85对肺癌A549细胞毒性作用机理研究

齐墩果酸(oleanolic acid,OA),是广泛存在于植物中的五环三萜类化合物,具有保肝、抗癌、抗突变、抗氧化、抗衰老等作用.临床上OA主要用于急慢性肝炎的辅助治疗,但由于其水溶性差、生物利用度低,限制了临床应用. OAD-85是齐墩果酸衍生物,通过研究发现其对多种肿瘤细胞具有较好细胞毒性,IC50值在7～16μmol/L之间.对肺癌A549细胞毒活性研究发现,OAD-85的细胞毒性与其抑制内源性抗氧化应激通路Nrf2 (转录因子)-ARE(抗氧化反应原件)密切相关.它能上调Nrf2胞浆锚定蛋白Keap1的表达,阻断Nrf2转位入核、增加核内转录阻抑蛋白Bach1的表达、阻断下游抗氧化信号的传递.在OAD-85作用下,细胞氧化应激产生大量活性氧(ROS),由于OAD-85对Nrf2-ARE通路的抑制作用,ROS不能及时被清除,大量累积于细胞中,最终导致A549细胞死亡.     

Keap1-Nrf2-ARE通路及其参与肝脏疾病病理机制研究进展

核因子NF-E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2 related factor 2,Nrf2)是细胞抗氧化应激(oxidative stress,OS)反应中的中枢调节者,其与胞浆蛋白伴侣分子Keap1(Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1)及抗氧化反应元件(antioxidant response element,ARE)共同构成Keap1-Nrf2-ARE通路,诱导编码抗氧化蛋白和Ⅱ相解毒酶的表达,在细胞抗OS的主要防御机制中发挥关键作用,与肝脏疾病的发生发展联系密切。本文对Keap1-Nrf2-ARE通路作用机制、激动剂和参与肝脏疾病病理机制的最新研究进展综述如下。     

温肾醒脑方对血管性痴呆大鼠脑组织Nrf2-ARE信号通路的影响

为探讨温肾醒脑方(WXD)对血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠认知功能的改善作用及对Nrf2-ARE信号通路的影响,将70只雄性SD大鼠随机分成正常组、假手术组、模型组、脑复康组(0.15 g/kg)、温肾醒脑方给药组(高剂量组5 g/kg、中剂量组2.5 g/kg、低剂量组1.25 g/kg),每组10只动物,采用双侧颈总动脉永久性结扎法建立VD模型,给予温肾醒脑方灌胃治疗后,Morris水迷宫测试治疗后VD大鼠认知功能的改善情况,检测脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、一氧化氮合酶(NOS),RT-PCR检测大鼠脑组织醌NADH脱氢酶(NQO1)、血红素氧合酶1(HO-1)的mRNA水平,运用Western Blot检测Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、NQO1、HO-1蛋白水平的表达情况以及EMSA检测Nrf2与抗氧化反应元件(ARE)结合力。结果表明:与正常组比较,VD模型组大鼠逃避潜伏期明显较长,游泳总距离明显缩短,穿越站台总数明显减少(P0.01);大脑组织中MDA含量显著增加,SOD、GSH-Px和NOS的含量明显减少(P0.01);同时大脑组织中细胞核Nrf2蛋白表达降低、细胞质中Keap1蛋白表达增加,NQO1、HO-1 mRNA和蛋白表达降低(P0.01)。与VD模型组比较,脑复康和温肾醒脑方组大鼠的认知行为得到很大的提高,脑组织MDA、SOD、GSH-Px、NOS含量和脑组织病理结构得到很好的改善,Nrf2、Keap1、NQO1、HO-1在mRNA水平或蛋白水平上有一定程度改变,特别是温肾醒脑方组大鼠的改善非常显著。可见温肾醒脑方可以改善VD大鼠的认知行为,其机制可能与Nrf2-ARE抗氧化应激信号通路相关。     

黄芪多糖抗氧化作用的分子机制研究进展

通过大量的分子实验和体外实验研究,证明黄芪多糖(Astragaluspolysaccharides,APS)具有广泛的药理作用和生物学活性.文章将从黄芪多糖抗氧化药理作用的NRF1、NRF2/ARE、P13K/Akt/eNOS、NF-kb、AMPK/PKC以及Caspase-3等信号通路方面作一综述,为其抗氧化作用的分子机制提供理论及实验依据.     

苦参碱对MPTP诱导帕金森多巴胺能 神经元损伤的保护作用

目的观察苦参碱在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的帕金森(FD)小鼠中对多巴胺能神经元损伤的保护作用和机制.方法将25只C57BL雄性小鼠随机分为5组,由空白对照组(A组)、MPTP组(B组)和3种苦参碱(4,8和16 mg/kg)加MPTP治疗组(分别为C,D和E组)组成.记录攀岩测试和运动活动实验的结果.4 d后处死小鼠并进行解剖,检测超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)的水平,应用免疫荧光分析酪氨酸羟化酶(TH)的水平,通过蛋白质印记分析腹侧中脑核因子红细胞2相关因子2(Nrf2)的水平.结果苦参碱可以缓解PD相关联的典型行为,且随着增加苦参碱浓度,症状明显减轻.PD小鼠具有较低的SOD和GSH活性,且苦参碱部分扭转了SOD和GSH活性的变化.使用苦参碱的小鼠出现较高TH水平和TH阳性细胞的表达,Nrf2在PD小鼠中脑腹侧表达显著下降,而苦参碱能够扭转这种现象.结论通过促进在中脑腹侧抗氧化应激相关的Nrf2信号通路,苦参碱可以抑制PD多巴胺能神经元的氧化损伤.     

乌头赤石脂丸汤方对心肌细胞氧化应激损伤的保护作用及其可能的分子机制

为了观察乌头赤石脂丸汤方含药血清对H9C2细胞氧化应激损伤的保护作用与可能的分子机制,采用过氧化氢处理H9C2细胞构建氧化应激损伤模型:以乌头赤石脂丸汤、参附汤连续灌胃SD大鼠1周,制备含药血清.将H9C2细胞随机分成空白对照组、模型组、阳性对照组、实验组、空白抑制剂组、模型抑制剂组、阳性抑制剂组、实验抑制剂组。过氧化氢造模浓度为400μmol/L,GDC-0994浓度为1μmol/L,分组给药后培养4h。用CCK-8法检测各组细胞活力,用Western blot法检测细胞中Erk1/2、p-Erk1/2、Nrf2、HO-1蛋白表达水平。实验结果显示:(1)与空白对照组比,模型组的细胞活力显著降低(P0.01),Erk1/2磷酸化的水平降低,Nrf2、HO-1蛋白的表达降低(P0.01);(2)与模型组相比,实验组、阳性对照组细胞活力显著升高(P0.01),Erk1/2磷酸化水平降低,Nrf2、HO-1蛋白的表达降低(P0.01);(3)与阳性对照组相比,实验组细胞活力显著升高(P0.01),Erk1/2磷酸化水平,Nrf2、HO-1蛋白的表达升高(P0.01);各组之间Erk1/2总蛋白表达无差异。(4)GDC-0994能够抑制乌头赤石脂丸汤方对细胞活力的保护作用(P0.01),抑制乌头赤石脂丸汤方对p-Erk1/2,Nrf2,HO-1表达的上调作用(P0.01)。研究表明乌头赤石脂丸汤方可以通过抑制氧化应激途径发挥对H9C2心肌细胞的保护作用,对抗再灌注引起的心肌细胞损伤。该作用是通过促进Erk1/2磷酸化,增强Nrf2、HO-1蛋白的表达,活化Erk1/2/Nrf2/HO-1信号通路进行的。本研究为阐明乌头赤石脂丸的心血管保护作用及治疗急性心肌梗死的作用提供了实验依据。     

迷迭香提取物对高脂膳食雌性果蝇致氧化应激的调控作用及机制

以雌性果蝇为动物模型研究迷迭香提取物(ROE)对高脂膳食致氧化应激的调控作用及机制.收集2,d龄雌性果蝇,随机分为空白组、高脂组及分别饲喂高脂饲料添加迷迭香提取物0.2、0.5、1.5,mg/m L的剂量组,每3,d更换新鲜培养基,记录果蝇死亡数目,并计算其平均寿命和最高寿命;45,d后测定超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)等抗氧化酶活力和丙二醛(MDA)含量;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法测定相关基因m RNA表达水平.结果表明:饲喂迷迭香提取物的果蝇平均寿命与最高寿命明显延长;0.2,mg/m L ROE显著升高Mn-SOD活力(P0.05),1.5,mg/m L ROE显著升高Cu-Zn-SOD、CAT活力(P0.05),极显著升高Mn-SOD活力,降低MDA含量(P0.01);0.5,mg/m L ROE显著上调Cu-Zn-SOD、Mn-SOD、CAT m RNA表达水平(P0.05),极显著上调Nrf2,m RNA表达水平,1.5,mg/m L ROE极显著上调Mn-SOD及Nrf2,m RNA表达水平(P0.01).因此,ROE能有效延缓高脂导致的氧化损伤,这可能与上调抗氧化基因表达水平有关.     

牛磺酸抗心肌成纤维细胞增殖作用的实验研究

目的研究牛磺酸(Taurine,Tau)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导新生大乳鼠心肌成纤维细胞(myofibroblasts,myo Fbs)增殖的抑制作用,并探讨其作用机制.方法用AngⅡ诱导新生大乳鼠myo Fbs增殖,建立心肌纤维化(myofibrosis,MF)模型.采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖;羟脯氨酸试剂盒检测胶原含量;免疫细胞化学染色检测p-PKCα的膜转位及表达;Western blot检测p-PKCα和p-ERK1/2蛋白表达及含量.结果 Tau(30,60,120)mmol/L可明显抑制AngⅡ诱导的Myo Fbs增殖及胶原合成,同AngⅡ组比较差异具有统计学意义(P0.05或P0.01),并且呈现出剂量依赖性.应用免疫细胞染色Western blot并且结合图像分析,结果表明:Tau可抑制p-PKCα膜转位和表达,与AngⅡ组相比差异具有统计学意义(P0.01).结论 Tau可能通过减少p-PKCα的表达及膜转位,从而抑制MyoFbs增殖和胶原含量的增加,抑制MF,逆转心肌重塑.     

AFM观察小白鼠心肌和肝核DNA片段的基因移位

用原子力显微镜(简称AFM)直接观察、体外表达和体外转录等实验技术组合,观察到了心肌和肝的核DNA片段的基因;用磷酸缓冲液稀释,并用开关蛋白质等活性因子使其部分解离,促使核基因在核DNA片段内或核DNA片段间静态或动态移位,得到了对应核DNA片段中的相关基因,如LDH/DNA体外表达活性变化的LDH同功酶酶谱图。基因静态或动态移位均表达活性降低,且基因移位程度与其对应基因活性降低程度呈正相关性。展示了未来运用AFM和体外表达等实验技术组合研究核DNA片段的基因移位和对应基因突变机制的前景。     

NO and H2O2 induced by Verticillium dahliae toxins and its influence on the expression of GST gene in cotton suspension cells

Nitric oxide （NO） and hydrogen peroxide （H2O2） have been shown to be important signaling molecules that participate in the regulation of several physiological processes. In particular, they have significant role in plant resistance to pathogens by contributing to induction defense genes. Here, whether NO and H2O2 participate in the resistance responses against Verticillium dahliae toxins （VD-toxins） and their effects on the expression of GSTgene are studied. The results reveal that NO and H2O2 are produced as part of a complex network of signals that respond to VD-toxins and may converge to function both synergistically and independently by inducing resistant responses. GSTgene is potentially involved in the resistance mechanism in the cotton suspension cells. NO induces the expression of GSTgene independently of H2O2. H2O2 may be a more potent signal in the resistance responses against VD-toxins.     

An analytical solution to contaminant advection and dispersion through a GCL/AL liner system

An one-dimensional model for contaminant advection and dispersion through a GCL/AL liner system was developed to analyze the equivalence between a GCL(geosynthetic clay liner) and a CCL(compacted clay liner).The continuity of contaminant concentration and flux at the interface between the GCL and the underlying attenuation liner(AL) are obeyed in the model,and background concentrations in the soil liner are also considered.Based on the assumption that contaminant transport through a GCL was a steady state process,an analytical solution was obtained.Increasing the leachate head from 0.3 m to 10 m results in a reduction of the breakthrough time of benzene by a factor of 2.7.The breakthrough time of benzene increases by a factor of 7.0 when the hydraulic conductivity of GCL decreases by one order of magnitude.The breakthrough curves are more sensitive to the hydraulic conductivities of the GCL and AL(attenuation layer) than to the thickness of the AL.The standard 75 cm CCL can be replaced by a combination of a GCL and a 1.0-4.0 m thickness of AL.The proposed method can be used for preliminary design of GCL composite liners,assessing the equivalence between GCL and CCL,preliminary design of a remediation method for contaminated soils,and evaluating experimental results.     

高浓度c—Myc羧基端的体外自身二聚体化活性

将编码人c-myc羧基端bHLH／LZ结构域的92个氨基酸的cDNA片段（c-myc-c92）对框插入pGEX－2T原核表达载体中,使之与谷胱甘肽转移酶（GST）编码基因融合,并将重质粒导入大肠杆菌BL21（DE3）中,由IPTG诱导融合基因高效表达,并用Glutathione Sepharose4B亲和柱纯化融合蛋白GST－c-Myc-c92,凝胶阻滞（EMSA）分析显示该纯化蛋白能与CACGTG序列特异结合,并且只有高浓度的GST－c-Myc-c92才能与探针结合,结果表明在体上情况下高浓度c-Myc羟基端能自身二聚体化,此发现丰富了Myc-Max-Mad的调控网络,并为进一步研究c-myc的功能和调控提供了一定的线索。     

水生植物根系对膨润土防水毯渗透性能影响

土工复合膨润土防水毯(GCL)是常用于湖底防渗的新型材料,但湖泊水生植物根系的生长可能对GCL的防渗效果产生影响。为探究植物根系穿透下GCL的渗透性能,选取再力花、芦苇、香蒲等植物开展室外模型试验,并采用GDS全自动渗透仪对水生植物根系穿透后GCL的渗透系数进行测量,分析渗透系数随根系穿透率、根系状态和根系种类的变化规律。研究表明：在相同围压条件下,植物根系贯穿下GCL渗透系数随根系穿透率的增加而增大,最大增至10^-7m/s;当根系穿透率大于1%时,GCL渗透系数在根系枯萎状态下约为正常状态下的1.26-3.13倍,根系枯萎状态对 GCL 渗透性影响更显著;香蒲、芦苇根系对GCL渗透性能影响程度相当,再力花根系对GCL渗透性影响较小。