Keap1-Nrf2-ARE通路及其参与肝脏疾病病理机制研究进展

核因子NF-E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2 related factor 2,Nrf2)是细胞抗氧化应激(oxidative stress,OS)反应中的中枢调节者,其与胞浆蛋白伴侣分子Keap1(Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1)及抗氧化反应元件(antioxidant response element,ARE)共同构成Keap1-Nrf2-ARE通路,诱导编码抗氧化蛋白和Ⅱ相解毒酶的表达,在细胞抗OS的主要防御机制中发挥关键作用,与肝脏疾病的发生发展联系密切。本文对Keap1-Nrf2-ARE通路作用机制、激动剂和参与肝脏疾病病理机制的最新研究进展综述如下。     

寒痉汤对寒凝型高血压大鼠血管平滑肌细胞表型转换及炎症、氧化应激的影响及机制

目的:观察寒痉汤对寒凝型高血压大鼠主动脉平滑肌细胞表型转换及炎症、氧化应激的影响并探讨其作用机制。方法:采用寒冷刺激与高盐饮食复合作用建立寒凝型高血压大鼠模型，造模时间6周，将造模成功大鼠随机分为模型组(MOD)、寒痉汤组(HJT)、坎地沙坦组(CCT),并设立空白组(CON),每组9只，给予药物干预2周。小动物无创血压分析系统测量大鼠血压；HE染色、Masson染色分析主动脉病理变化；免疫组化分析血管平滑肌细胞表型标志物α-SMA、OPN、calponin蛋白表达；采用WST-1法检测血清SOD,TBA法检测血清MDA;Elisa法检测血清炎症因子IL-1β、TNF-α、NLRP3;采用免疫印迹法检测大鼠主动脉Nrf2、NQO1、NF-κB、IκBα蛋白表达水平；采用实时荧光定量法检测大鼠主动脉NQO1、NF-κB基因表达水平。结果:与CON组比较，MOD组大鼠血压升高，血清SOD表达降低，MDA表达升高，血清IL-1β、TNF-α、NLRP3表达升高；主动脉Nrf2、NQO1蛋白表达降低，NF-κB、IκBα蛋白表达水平升高，NQO1基因表达水平降低，NF-κB基因表达水平升高；与...     

黄精丸对大鼠大脑局灶性脑缺血损伤保护作用研究

目的观察黄精丸对大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤的影响。方法大鼠提前30d灌胃黄精丸(相当生药量2~10g/kg)后,采用大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,观察大鼠行为学变化、脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、脂质过氧化物丙二醛(MDA)、白细胞介素(IL)-1β及肿瘤坏死因子(TNF)-α水平的变化。结果与缺血再灌注损伤组比较,黄精丸组脑功能受损程度明显改善,脑组织SOD与GSH-Px水平显著升高,MDA、IL-1β、TNF-α水平显著下降且呈剂量依赖关系。结论黄精丸对大鼠大脑缺血再灌注诱导的氧自由基、脂质过氧化、各种炎性因子损伤具有良好的保护作用。     

红景天苷抑制Hcy诱导的血管内皮细胞氧化应激损伤的实验研究

研究红景天苷(SAL)对同型半胱氨酸(Hcy)诱导体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化应激损伤的保护作用及可能机制.选择3-8代生长状态良好的HUVECs用于实验,采用SAL预孵育HUVECs 2h后,再加入Hcy(1 mmol/L)共孵育12 h诱导内皮细胞氧化应激损伤.采用MTT和LDH法分析细胞损伤,荧光探针法DCFH-DA分析细胞内活性氧(ROS)水平,酶联免疫吸附法分析细胞内丙二醛(MDA),超氧化物歧化酶(SOD)的含量,qRT-PCR技术检测Nrf2、HO-1、NQO1的基因表达.结果显示,Hcy显著引起血管内皮细胞损伤,而10、50μmol/L的红景天苷干预给药后,能够提高Hcy诱导的细胞存活率,明显降低LDH、MDA的水平,增加胞内SOD活性.与Hcy处理组相比,SAL干预给药能够降低Hcy所致细胞内ROS的增高,上调Nrf2、抗氧化酶基因HO-1、醌氧化还原酶NQO1的mRNA表达.本研究表明,红景天苷有效抑制Hcy诱导的HUVECs氧化应激损伤,其作用与红景天苷增强细胞清除自由基能力,调控Nrf2信号有关.     

补肾醒脑方对血管性痴呆大鼠脑组织中信号传导转接蛋白MyD88的影响

观察补肾醒脑方对缺血再灌注造成损伤的血管性痴呆大鼠脑组织中My D88信号传导通路影响,探讨该方对缺血性脑损伤大鼠靶向性防治机理。成年雄性Wistar大鼠造模成功后随即等分为假手术组(A组)、模型组(B组)、吡拉西坦组(C组)、补肾醒脑方组(D组),每组12只灌胃给药。第3 d、7 d检查大鼠神经功能缺损情况,1周后检测大鼠脑组织中My D88的含量。D组神经功能缺损改善较B组改善明显(P0.05);D组脑组织中My D88表达减少程度虽与C组比较差异不显著(P0.05),但与B组比较差异显著(P0.05)。补肾醒脑方能有效改善缺血再灌注造成损伤的血管性痴呆大鼠的神经损伤的症状,降低大鼠模型脑组织中信号传导转接蛋白My D88,抑制炎性反应保护大脑组织。     

运动经PKC-Nrf2途径调节肝HO-1表达及抗氧化能力的研究

为探讨规律耐力运动通过PKC-Nrf2途径提高大鼠肝血红素加氧酶-1(HO-1)表达及抗氧化能力(T-AOC)的效应,将24只成年雄性SD大鼠随机分为安静对照组(A)、运动组(B)与白屈菜赤碱运动组(C)。B、C组进行8周较大强度的持续耐力跑,但C组在每次运动前进行PKC抑制剂即白屈菜赤碱(CHE)处理。实验中观察各组肝细胞膜PKC及肝细胞总PKC的活性水平,Western Blotting观察肝细胞核Nrf2及肝细胞HO-1的蛋白表达水平,以及观察肝细胞HO-1活性和T-AOC水平,结果发现:与A组相比,B组肝细胞膜PKC及肝细胞总PKC的活性显著升高、细胞膜PKC活性/肝细胞总PKC活性的值显著升高(P0.05),细胞核中的Nrf2蛋白含量(核转位)显著增加(P0.05),肝细胞HO-1的蛋白表达水平、活性水平及肝细胞T-AOC等均显著升高(P0.05);耐力运动引起B组中的上述变化在C组中被明显遏制。综上可见,较大强度的规律耐力运动可经过PKC-Nrf2途径,诱导肝细胞HO-1蛋白表达而提高肝脏抗氧化能力。     

补肾醒脑方对血管性痴呆大鼠脑组织中粘附分子的影响

目的：观察补肾醒脑方对血管性痴呆大鼠脑组织中粘附分子的影响,探讨该方对血管性痴呆大鼠脑的保护作用。方法：成年Wistar大鼠经筛选、造模后随即等分为假手术组(A组)、模型组(B组)、喜得镇组(C组)、补肾醒脑方组(D组),每组10只均灌胃给药。A组和B组采用蒸馏水,C组给予喜得镇,D组给予补肾醒脑方。术后第2d、4d、6d测试大鼠学习记忆能力,术后1W采用ELISA法检测大鼠脑组织中粘附分子ICAM-1、VCAM-1 、P-selectin、E-selectin的含量。结果：D组AAR习得率较B组各个时间点均明显提高;与B组相比较,ICAM-1、P-selectin含量差异极其显著(P＜0.01)。结论：补肾醒脑方可有效改善血管性痴呆大鼠的学习记忆能力,控制下调粘附分子的含量,降低血管的炎性反应,从而保护大脑组织。     

补肾醒脑方对血管性痴呆大鼠脑组织中黏附分子的影响

观察补肾醒脑方对血管性痴呆大鼠脑组织中黏附分子的影响,探讨该方对血管性痴呆大鼠脑的保护作用。经成年Wistar大鼠筛选、造模后随即等分为假手术组(A组)、模型组(B组)、喜得镇组(C组)、补肾醒脑方组(D组),每组10只均灌胃给药。A组和B组采用蒸馏水,C组给予喜得镇,D组给予补肾醒脑方。术后第2 d、4 d、6 d测试大鼠学习记忆能力;术后1W采用ELISA法检测大鼠脑组织中黏附分子ICAM-1、VCAM-1、P-selectin、E-selectin的含量。D组AAR习得率较B组各个时间点均明显提高;与B组相比较,ICAM-1、P-selectin含量差异极其显著(P0.01)。补肾醒脑方可有效改善血管性痴呆大鼠的学习记忆能力,控制下调黏附分子的含量,降低血管的炎性反应,从而保护大脑组织。     

乌头赤石脂丸汤方对心肌细胞氧化应激损伤的保护作用及其可能的分子机制

为了观察乌头赤石脂丸汤方含药血清对H9C2细胞氧化应激损伤的保护作用与可能的分子机制,采用过氧化氢处理H9C2细胞构建氧化应激损伤模型:以乌头赤石脂丸汤、参附汤连续灌胃SD大鼠1周,制备含药血清.将H9C2细胞随机分成空白对照组、模型组、阳性对照组、实验组、空白抑制剂组、模型抑制剂组、阳性抑制剂组、实验抑制剂组。过氧化氢造模浓度为400μmol/L,GDC-0994浓度为1μmol/L,分组给药后培养4h。用CCK-8法检测各组细胞活力,用Western blot法检测细胞中Erk1/2、p-Erk1/2、Nrf2、HO-1蛋白表达水平。实验结果显示:(1)与空白对照组比,模型组的细胞活力显著降低(P0.01),Erk1/2磷酸化的水平降低,Nrf2、HO-1蛋白的表达降低(P0.01);(2)与模型组相比,实验组、阳性对照组细胞活力显著升高(P0.01),Erk1/2磷酸化水平降低,Nrf2、HO-1蛋白的表达降低(P0.01);(3)与阳性对照组相比,实验组细胞活力显著升高(P0.01),Erk1/2磷酸化水平,Nrf2、HO-1蛋白的表达升高(P0.01);各组之间Erk1/2总蛋白表达无差异。(4)GDC-0994能够抑制乌头赤石脂丸汤方对细胞活力的保护作用(P0.01),抑制乌头赤石脂丸汤方对p-Erk1/2,Nrf2,HO-1表达的上调作用(P0.01)。研究表明乌头赤石脂丸汤方可以通过抑制氧化应激途径发挥对H9C2心肌细胞的保护作用,对抗再灌注引起的心肌细胞损伤。该作用是通过促进Erk1/2磷酸化,增强Nrf2、HO-1蛋白的表达,活化Erk1/2/Nrf2/HO-1信号通路进行的。本研究为阐明乌头赤石脂丸的心血管保护作用及治疗急性心肌梗死的作用提供了实验依据。     

HO-1介导耐力运动抗NAFLD形成作用的研究

为探讨中等强度耐力运动对大鼠肝脏血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白表达的调节作用,及其与抗高脂饲料大鼠非酒精性脂肪肝(NAFLD)形成作用的关系,将48只雄性SD大鼠,随机分为普通饲料对照组(NC)、运动普通饲料组(EN)、抑制剂+运动普通饲料组(DEN)及高脂饲料对照组(HC)、运动高脂饲料组(EH)、抑制剂+运动高脂饲料组(DEH)。观察血清TC、TG、FFC浓度及肝脏HO-1蛋白表达与活性、肝脏抗氧化能力与MDA含量的变化,以及血转氨酶ALT、AST水平及肝脏形态学变化,结果发现:NC、EN、DEN这3组中,EN组肝脏HO-1蛋白表达、活性及肝脏总抗氧化能力最高(P0.05)。与NC组相比,HC、EH、DEH组血清TC、TG、FFC浓度均显著升高,肝脏HO-1蛋白表达均显著升高,肝脏HO-1活性、抗氧化能力均显著下降,MDA含量均显著升高,血清ALT、AST水平均显著升高及肝脏呈典型脂肪样病变;其中EH组的肝脏HO-1蛋白表达最高,但上述异常变化程度最轻(P0.05)。此外,EH组肝脏HO-1蛋白表达也要显著高于EN组(P0.05)。可见高脂膳食引发大鼠血脂异常,肝脏HO-1活性及肝脏抗氧化能力下降、活性氧水平升高,形成脂肪肝。中等强度耐力运动可通过诱导肝脏HO-1的蛋白表达,提高高脂饲料大鼠肝脏HO-1活性及抗氧化能力,清除活性氧,发挥抗脂肪肝形成的作用。     

Interaction between endogenous nitric oxide and carbon monoxide in the pathogenesis of hypoxic pulmonary hypertension

Hypoxic pulmonary hypertension, an important pathophysiological process in the development of a vari-ety of clinical cardiac and pulmonary diseases, has critical influence on the proceeding and prognosis of the dis- eases[1]. It is important to clarify the pathogenesis of the diseases. The discoveries of endogenous gas signal mole-cules, nitric oxide (NO) and carbon monoxide (CO), have been moving the research of hypoxic pulmonary hyper-tension to a very new phase. Our foregoing experiments …     

苯甲酰芍药苷通过Nrf2/HO-1通路对心肌梗死大鼠心功能的影响作用机制研究

目的 探究苯甲酰芍药苷(benzoylpaeoniflorin,BA)通过核因子E2相关因子2/血红素加氧酶1(Nrf2/HO-1)通路对急性心肌梗死(AMI)大鼠心功能的影响作用机制.方法 36只SD大鼠随机分为3组(n=12):Sham组、AMI组和AMI+BA组.AMI组和AMI+BA组大鼠建立AMI模型,建模后...     

补充白藜芦醇对大强度运动大鼠心肌损伤的保护作用

目的:探讨RES对大强度运动心肌过氧化损伤的保护作用.方法:在活动跑台上建立大强度运动模型,测试心肌各项过氧化损伤指标.结果:大强度运动可造成大鼠心肌MDA,TNOS,iNOS,NO显著升高,TSOD,CuZn-SOD,GSH-Px,cNOS,Na+,K+-ATPase,Ca2+-ATPase显著下降.补充RES可使大鼠运动后心肌MDA,TNOS,iNOS,NO下降,TSOD,CuZn-SOD,Mn-SOD,GSH-Px,cNOS,Na+,K+-ATPase,Ca2+-ATPase升高.结论:RES可增强心肌的抗氧化能力,保持心肌酶活性.提示RES对大强度运动后心肌过氧化损伤具有保护作用.     

川芎嗪对烫伤大鼠消化系统的保护作用

观察烫伤大鼠胃、小肠、肝组织ATP酶(ATPase)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)的变化及川芎嗪的防治效果。以健康Wistar大鼠作为模型，分别取胃、小肠、肝组织测定观察值。结果发现，川芎嗪可提高烫伤大鼠胃、小肠和肝组织中ATPase和GSH-Px的活性，降低组织中MDA的含量。这说明，川芎嗪可对烫伤后大鼠的胃、小肠、肝组织起到一定的保护作用，其机制可能与减少自由基的产生及直接抗氧化作用有关。     

Protectin DX 对老年大鼠肺损伤相关炎性因子 和氧化损伤的保护作用

目的 初步探讨 Protectin DX (保护素 DX,PDX)对老年大鼠肺叶切除术后肺损伤相关炎性介质及氧化因子 的调控及保护作用。 方法 将 30 只 SPF 级健康的老年雄性 SD 大鼠(10 月龄)随机分为假手术组( n = 10) 、手术组 ( n = 10) 、PDX 处理组( n = 10) 。 假手术组和手术组在造模 1 h 后腹腔注射 300 μL 生理盐水,PDX 处理组于造模 1 h 后腹腔注射 300 μL PDX(500 ng) 。 将所有大鼠于造模 24 h 后采用过度麻醉的方法处死,收集标本。 采用 HE 染色观察各组肺标本病理形态变化,评价各组大鼠肺标本的干湿质量比( W / D) ;检测肺泡灌洗液中蛋白浓度及相 关炎症因子的含量;检测肺组织中 MDA、ROS、SOD 的含量以及 HO-1、核因子 NF-κB 的蛋白表达量。 结果 假手术 组肺组织结构清晰,未见炎症细胞浸润;手术组老年大鼠肺组织结构紊乱,伴有大量炎症细胞浸润;PDX 处理组大 鼠肺组织结构不清晰,存在少量的炎症细胞浸润。 与假手术组相比较,手术组老年大鼠肺损伤评分及肺组织 W / D 显著增高( P<0. 01) ,肺泡灌洗液中蛋白浓度及 IL-1β、IL-6 和 TNF-α 含量明显增加( P< 0. 01) ,肺组织中 MDA、ROS 含量及 NF-κB 蛋白表达显著升高,SOD 活性及 HO-1 蛋白表达明显降低( P< 0. 05) 。 与手术组相比较,PDX 处理组 老年大鼠肺损伤评分及肺组织 W / D 显著降低( P<0. 01) ,肺泡灌洗液中蛋白浓度及 IL-1β、IL-6 和 TNF-α 含量明显 下降( P<0. 01) ,肺组织中 MDA、ROS 含量及 NF-κB 蛋白表达显著降低,SOD 活性及 HO-1 蛋白表达明显升高( P < 0. 05) 。 结论 PDX 能够明显减低老年大鼠肺叶切除术后的肺损伤程度,这种作用可能与其调节肺组织中 HO-1、 NF-κB 蛋白的表达从而抑制肺部的氧化应激反应和炎症反应相关。     

黄精多糖对急性心肌梗死模型大鼠炎症及氧化应激反应的影响

摘要: 目的探讨黄精多糖( PSP) 对急性心肌梗死模型( AMI) 大鼠损伤的保护作用及可能机制。方法采用结扎冠状动脉左前降支的方法制备心肌梗死动物模型,假手术组只穿线不结扎,将造模成功的大鼠随机分为模型组、黄精多糖高、中、低剂量组( 900 mg /kg、450 mg /kg、225 mg /kg) 及阳性组( 麝香保心丸, 12. 2 mg /kg·d) ,每组10 只,每日灌胃1 次,连续4 周。分别记录造模前、造模即刻及给药1、3、7、10、14、21、28 d 心电图S-T 段变化,采用酶联免疫吸附法( ELISA) 测定各组大鼠血清中肿瘤坏死因子α( TNF-α) 、白介素6( IL-6) 、谷胱甘肽过氧化物酶( GSH-Px) 及丙二醛( MDA) 含量; 显微镜下观察受损心肌病理学的改变。结果与模型组相比,黄精多糖能明显抑制心肌梗死模型大鼠S-T 段的升高; 各给药组大鼠血清IL-6、TNF-α 水平均显著降低( P ＜ 0. 05 或0. 01) ,GSH-Px 活性升高( P ＜ 0. 05或0. 01) ,并降低MDA 含量( P ＜ 0. 05 或0. 01) ,心肌损伤程度明显改善。结论PSP 对急性心肌梗死模型大鼠心肌损伤有保护作用,其作用机制可能与减轻炎症反应,提高氧自由基清除能力,减少脂质过氧化损伤有关。     

黄芪甲苷对糖尿病性白内障 SD 大鼠晶状体组织的MDA、SOD 及 GSH-Px 水平的影响研究

目的 探讨黄芪甲苷对糖尿病性白内障大鼠晶状体组织氧化应激损伤的保护作用。 方法 将 120 只 SD 大鼠随机选取 30 只作为对照组,剩余 90 只大鼠腹腔注射 55 mg / kg 链脲佐菌素( STZ)溶液建立糖尿病模型。 建模成功后,随机分为模型 组、低 剂 量 干 预 组 及 高 剂 量 干 预 组,每 组 30 只。 低 剂 量 干 预 组 和 高 剂 量 干 预 组 分 别 给 予120 mg / kg 和 240 mg / kg 黄芪甲苷,连续灌胃 12 周。 分别于第 18 周和第 24 周对大鼠进行晶状体透明度检测,并于第 24 周结束 后,取 大 鼠 的 晶 状 体 组 织,检 测 晶 状 体 组 织 中 丙 二 醛 ( malondialdehyde, MDA ) 、 超 氧 化 物 歧 化 酶( superoxide dismutase, SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶( glutathione peroxidase, GSH-Px) 的水平。 结果 第 18 周和第24 周,检测发现糖尿病模型组较对照组晶状体混浊程度明显加重( P<0. 05) ,干预组大鼠晶状体混浊程度明显低于糖尿病性白内障模型组大鼠( P<0. 05) ,高剂量干预组大鼠晶状体混浊程度明显低于低剂量干预组大鼠( P< 0. 05) 。第 24 周结束后,检测发现已经形成白内障的模型组大鼠晶状体 MDA 含量较正常对照组大鼠明显升高( P< 0. 05) ,晶状体 SOD 及 GSH-Px 含量较对照组明显降低( P<0. 05) ;两干预组较模型组大鼠晶状体 MDA 含量显著降低( P<0. 05) ,SOD 及 GSH-Px 含量显著增加( P < 0. 05) ;高剂量干预组较低剂量干预组大鼠晶状体 MDA 含量显著降低(P<0. 05) ,SOD 及 GSH-Px 含量显著增加( P<0. 05) 。 结论 黄芪甲苷能增强糖尿病性白内障大鼠晶状体组织中SOD 及 GSH-Px 活性,清除晶状体组织中的氧自由基,抑制脂质过氧化反应,降低 MDA 水平,并且对于预防糖尿病性白内障大鼠晶状体混浊也具有一定的作用,且高剂量的黄芪甲苷较低剂量的黄芪甲苷作用更加明显。     

杏花雨对血管性痴呆大鼠行为及其海马Bcl-2,Bax蛋白表达的影响

为研究杏花雨对血管性痴呆大鼠行为学及大鼠海马Bcl-2,Bax蛋白表达的影响,采用反复缺血再灌注+硝普钠方法复制出血管性痴呆(VD)动物模型,并观察银杏黄酮注射制剂杏花雨对VD大鼠的保护作用,采用Morris水迷宫检测其行为学,免疫组织化学法检测并观察其海马Bcl-2,Bax蛋白表达.研究结果显示:与假手术组相比,模型组大鼠Bcl-2,Bax蛋白表达增加(P<0.01),Bcl-2/Bax(阳性细胞数比值)显著降低,经杏花雨a,b及金纳多治疗后,与模型组相比,VD大鼠认知能力显著改善(P<0.01),海马CA1区Bcl-2阳性细胞数均有提高(P<0.05),杏花雨b组有明显提高(P<0.01);大鼠海马CA1区Bax阳性细胞数降低,尤其以杏花雨b组降低明显(P<0.01),Bax/Bcl-2也较假手术组与模型组明显提高(P<0.05).结果表明杏花雨可以改善血管性痴呆大鼠的认知能力,推测与Bcl-2,Bax蛋白表达有关.