环丙沙星人工完全抗原的制备与鉴定

分别采用碳二亚胺法和氯甲酸异丁酯法制备环丙沙星的牛血清白蛋白与卵清白蛋白载体的人工完全抗原CPFX-BSA和CPFX-OVA.人工完全抗原经SDS-PAGE凝胶电泳初步鉴定后,考马斯亮蓝染色法测定蛋白质含量分别为1.24和0.58 mg.mL-1,将偶联抗原稀释至一定浓度,紫外分光光度法测其波形,根据偶联前后波形及吸收峰的变化鉴定偶联物分子量大于载体蛋白,证实CPFX与BSA和OVA偶联成功,根据游离半抗原、载体蛋白和完全抗原偶联物各自的紫外吸光度、摩尔吸光系数,初步定量计算出偶联结合比分别为7.2∶1和6.4∶1.质谱法测定CPFX-BSA和CPFX-OVA分子量分别为6.895×104和4.586×104,推算偶联比分别为5.6∶1和4.2∶1,进一步证实了偶联比和人工抗原制备成功.制备的人工完全抗原CPFX-BSA和CPFX-OVA可分别作为免疫抗原和包被抗原,为环丙沙星单克隆抗体的制备以及环丙沙星快速检测试剂盒的研制奠定基础.     

吗啡人工抗原的合成及多克隆抗体的制备

利用化学法合成吗啡人工抗原,将此抗原免疫新西兰大白兔制备抗吗啡多克隆抗体.利用混合酸酐法将吗啡人工抗原分别与蛋白质载体BSA及OVA偶联,经蛋白质电泳以及紫外扫描检测,证明吗啡人工抗原合成成功.用间酶联免疫检测法检测,证明制备得到了高效价的吗啡多克隆抗体血清,且与吗啡人工抗原具有高特异性反应,可用于吗啡免疫学检测方法的研究.     

左氧氟沙星人工抗原的制备及其抗体鉴定

用N-羟基琥珀酰亚胺法把左氧氟沙星与载体蛋白牛血清白蛋白偶联制备免疫抗原,用氯甲酸异丁酯法将左氧氟沙星与鸡卵清蛋白偶联,制备包被检测抗原,采用紫外扫描法对合成的抗原进行鉴定.用免疫抗原免疫大白兔获得抗左氧氟沙星多克隆抗体血清,经间接ELISA试验检测特异性抗体效价,测得效价达1:212以上.通过紫外扫描及间接ELISA试验,结果表明,制备的抗原和抗体获得成功.     

氟苯尼考人工抗原的制备与鉴定

将氟苯尼考（FFC）进行化学修饰引入羧基活性基团,合成具有半抗原结构特征的氟苯尼考半琥珀酸醋（FFC—HS）．采用混合酸酐（MA）法将FFC—HS与牛血清白蛋白（BSA）偶联合成人工抗原BSA—FFC—HS．通过紫外（UV）、凝胶电泳（SDS—PAGE）进行鉴定,证明BSA—FFC—HS偶联成功,得到了结合比较好的人工抗原,为进一步制备抗FFC抗体提供了良好的免疫原．     

黄曲霉毒素B_1人工抗原的制备、鉴定与免疫特性研究

采用EDC法制备获得黄曲霉毒素B1人工抗原AFB1-BSA。对AFB1-BSA紫外扫描,结果表明其图谱与黄曲霉毒素B1和BSA的图谱有明显差异,其红外扫描结果与BSA的图谱也有明显差异,表明BSA与黄曲霉毒素B1偶联成功。以不同摩尔比的AFB1-BSA人工抗原免疫小鼠,制备了特异性的鼠抗AFB1多克隆抗血清。综合评价不同起始摩尔比反应所得人工抗原的免疫特性和AFB1转化率,当AFB1与BSA的起始摩尔比为40∶1时,AFB1与BSA的偶联产物摩尔比为4.93∶1,AFB1的转化率达12.33%;用间接ELISA法测其抗血清的效价,经过四次免疫之后,抗血清的效价最高,高达1∶1 056 000。     

四环素人工抗原的合成与鉴定

采用碳二亚胺法将四环素半抗原与载体蛋白BSA连接制备人工免疫抗原,并用同样方法将四环素与载体蛋白OVA连接制备人工包被抗原.经紫外扫描分析和动物免疫试验证实人工抗原合成成功,为检测试剂盒的研制奠定了基础.     

酸法提取斑点叉尾鮰鱼皮胶原工艺的条件优化

采用酸法从人工养殖的鮰鱼皮中提取胶原,并研究了酸的种类、酸的浓度、料液比、提取时间和提取温度对胶原提取率的影响.正交实验研究结果表明,最适提取工艺条件为：乙酸浓度1.0 mol/L,固液比1∶30,提取时间72 h,在5℃下提取得率为33.79%,提取胶原的最大紫外吸收波长为236 nm,和标准品紫外吸收波长基本一致.     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫磁性铁蛋白复合物的制备与表征

采用蛋白分子模板法合成磁性铁蛋白,通过磁性分析、扫描电镜、电子自旋共振波谱、能量色散X射线光谱和铁原子的载入量进行表征;采用羧基二咪唑法制备出人工抗原脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫磁性铁蛋白复合物,通过紫外吸收光谱和酶联免疫吸附分析法对该人工抗原进行表征.结果表明,合成的磁性铁蛋白粒径大小约为20 nm,且具有明显的磁性,蛋白腔内部含有铁元素和氧元素,铁原子载入量为791;脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫磁性铁蛋白复合物具有免疫原活性,可用于磁酶联免疫吸附分析中.     

松香人工抗原的合成及多克隆抗体的制备

利用脱氢松香胺(DHAM)为半抗原合成了松香的完全抗原、并通过免疫新西兰大白兔制备了多克隆抗体。首先DHAM与琥珀酸酐(SUC)反应合成琥珀酸单酰脱氢松香胺(DHAM-SUC),然后再与牛血清蛋白(BSA)和钥孔血蓝蛋白(KLH)进行偶联,合成了松香的完全抗原DHAM-SUC-BSA和DHAM-SUC-KLH,偶联比分别为12和35。以DHAM-SUC-KLH为免疫原对新西兰大白兔进行免疫,制备了抗血清,效价达1.28×10⁵,脱氢松香酸(DHA)和松香酸(AA)的50%抑制浓度(IC₅₀)分别为25.1μg/L和36.4μg/L。研究合成的松香人工抗原具有理想的免疫原性,获得的多克隆抗体具有较好的灵敏度,可为建立畜禽肉制品中松香残留的酶联免疫吸附分析(ELISA)方法打下基础。     

含咪唑类聚合物的电化学合成及电致变色

本实验通过电化学方法研究合成了一种不同的新型共轭聚合物PM1,相应的单体通过Still偶联反应合成了聚合物单体M1,合成得到的聚合物,具有多色电致变色现象,合成得到的电致变色材料亦被详细的表征.循环伏安法和紫外-可见光谱法被用来揭示聚合物膜的光电性能.     

抗盐酸克伦特罗单克隆抗体的制备和鉴定

 以重氮反应将盐酸克伦特罗与牛血清白蛋白、鸡卵清蛋白偶联制备免疫原和检测原,通过杂交瘤技术获得了3株能分泌特异结合CL小分子的抗体杂交瘤细胞株.经竞争法ELISA分析,9E3抗体的IC50质量浓度为19.85μg/L,14C5抗体为1.65μg/L,16F4抗体为0.84μg/L.在与类似物的交叉性反应中,16F4抗体与沙丁胺醇的交叉反应性为0.26%,特布他林为0.04%,与非诺特罗、肾上腺素、去甲肾上腺素的交叉反应性都小于0.02%.因此,所制备的抗盐酸克伦特罗的抗体的特异性高,可用于与其相关的免疫检测研究和应用.     

犬腺病毒2型抗原的制备及间接ELISA的建立

用MDCK细胞增殖犬腺病毒2型弱毒疫苗株,病毒培养上清液经差速离心和酒石酸钾密度梯度离心浓缩、纯化后作为诊断抗原,建立了犬腺病毒2型抗体检测的间接ELISA。确定最佳抗原包被量为0.168μg/孔,待检血清最佳稀释倍数为1:100,作用时间为60 min,羊抗犬酶标抗体稀释倍数为1:2000,作用时间为60 min,底物作用时间为37℃,10 min。判定标准为S/P值≥0.351者判为阳性,S/P值≤0.318者判为阴性。该抗原不与犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬波特氏杆菌等3种犬常见传染病的阳性血清反应,具有良好的特异性;批内、批间重复试验,变异系数小于15%,显示具有较好的重复性;检测血清样品56份,与病毒中和试验结果比对的符合率为93.75%。本研究结果为实现犬腺病毒感染监测,进行犬腺病毒流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法。     

多壁碳纳米管修饰碳糊电极测定盐酸克伦特罗

研究了盐酸克伦特罗（CLB）在多壁碳纳米管修饰碳糊电极上的电化学行为。结果发现,与裸碳糊电极相比,CLB在修饰电极上的电流响应明显增大,同时峰、峰电位差减小,测定灵敏度大为提高。在最佳实验条件下,该修饰电极测定CLB的线性范围为2.0×10-9-1.0×10-5mol.L-1,线性相关系数为0.9987（n=18）,检出限为7.0×10-10mol.L-1（3Sb）。对5.0×10-7mol.L-1的CLB平行测定10次的相对标准偏差为3.6%。此方法已用于模拟尿样及模拟兔血清中CLB含量的测定,加标回收率分别为100.8%与98.6%。     

羧基磁流体制备和牛血清白蛋白表面修饰

 磁性纳米粒已被用作肿瘤磁感应热疗的介质，目前常用纳米Fe3O4，其经典制备方法是化学共沉淀法，得到具有超顺磁性的纳米Fe3O4粒径约为10～15nm。本文采用改进的化学共沉淀法制备聚丙烯酸（PAA）修饰的羧基纳米Fe3O4，通过EDC、NHS活化法偶联模型蛋白牛血清白蛋白（BSA），用BCA定量分析磁粒对BSA的偶联效率，并进一步偶联荧光标记的抗体，观察偶联效果。结果表明，改进的化学共沉淀法制备的羧基纳米粒粒径约10nm，水相分散性良好；定量分析和光学观察结果均显示，采用EDC、NHS活化法能使蛋白质与羧基化磁性颗粒稳定结合。本研究为靶向磁性纳米粒的制备提供一种新方法。     

7-AVCA的合成

设计并成功建立了以7-苯乙酰氨基-3-氯甲基-4-头孢烷酸对甲氧基苄酯(GCLE)为原料合成7-氨基-3-乙烯基头孢烷酸(7-AVCA)的路线,并对其工艺条件进行了优化,确定了7-AVCA的最佳合成条件.当n(GCLE)∶n(PPh3)∶n(NaI)∶n(HCHO)∶n(NaOH)为1.0∶1.1∶1.0∶10.6∶0.976时,3-乙烯基头孢菌素中间体5的收率为90.7%;当n(中间体5)∶n(苯酚)为1.0∶10.0,反应温度为60℃,反应时间为4 h时,7-AVCA的收率为77.0%.     

流动注射化学发光测定洗衣粉中的磷含量

在碱性介质中,Cu2+对鲁米诺-盐酸羟胺的化学发光有明显的增敏作用,而PO3-4能与Cu2+反应生成Cu3(PO4)2沉淀,对Cu2+增敏的鲁米诺-盐酸羟胺的化学发光有抑制作用,据此建立测定洗衣粉中PO3-4的流动注射化学发光分析方法.在1.0×10-10～1.0×10-7 mol·L-1范围内,洗衣粉中PO3-4的浓度与相对发光强度有良好的线性关系,线性方程为△I=214.6 +214.6c,线性相关系数为0.999 3,检出限为1.0×10-12mol·L-1.对1.0×10-7mol·L-1的PO3-4进行11次平行测定,其相对标准偏差为1.3;.此方法用于测定洗衣粉中磷的含量,结果令人满意.     

应用流式微球检测黄曲霉毒素B1方法的建立

采用活性酯法,将AFB1-BSA人工抗原交联于含有羧基表面的荧光微球,通过与游离AFB1竞争抗AFB1单克隆抗体后,再与异硫氰酸荧光素标记二抗的反应,建立基于微球的间接竞争免疫检测方法.检测结果表明,流式细胞仪检测AFB1的检测限为0.03 ng·mL-1,检测范围为0.05～1.0 ng·mL-1.与黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2、黄曲霉毒素M1和黄曲霉毒素M2的交叉反应率均低于1.0%.在玉米样品中的加标回收率为87%～103%,变异系数为6.1%～8.4%.     

荧光光谱法研究香豆素-3-羧酸与牛血清白蛋白的相互作用

利用荧光光谱、紫外吸收光谱法研究了香豆素-3-羧酸与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用.结果表明:香豆素-3-羧酸对BSA的荧光猝灭为静态猝灭,香豆素-3-羧酸与BSA 1∶1结合形成复合物,结合常数与结合位点分别为3.21×104L·mo L-1,0.974 6(298 K)和2.00×104L·mo L-1,0.949 5(310 K),两者之间的作用力以氢键和范德华力为主.同步荧光光谱表明,香豆素-3-羧酸与色氨酸残基发生了作用,从而使其所处的微环境发生了改变.