基于TRPM8通道研究薄荷醇对哮喘小鼠气道反应性及肺组织病理学的影响

研究TRPM8通道在支气管哮喘发病机制中的作用,以及薄荷醇(Menthol)对哮喘小鼠气道反应性及肺组织病理学的影响。观察Menthol对TRPM8野生型(+/+)和敲除型(-/-)小鼠气道反应性及肺组织病理学改变的影响。Menthol可缓解肺组织病理进程,而Menthol对TRPM8-/-型哮喘小鼠无改善作用。     

基于TRPM8通道薄荷醇对小鼠气道平滑肌影响的实验研究

目的：基于TRPM8通道研究薄荷醇(Menthol)对小鼠气道平滑肌的影响。方法：运用平滑肌张力测定技术检测Menthol对TRPM8野生型(TRPM8+/+)和敲除型(TRPM8-/-)小鼠离体气道平滑肌的张力改变。结果：1. Menthol呈浓度依赖性地引起TRPM8+/+小鼠气道平滑肌舒张,而在TRPM8-/-小鼠此作用不明显。结论：Menthol可通过TRPM8通道改变小鼠气道平滑肌张力     

维药神香草超临界CO_2流体萃取物的抗炎、止咳、祛痰作用及其对哮喘大鼠气道炎症的影响

观察维药神香草超临界CO_2流体萃取物的抗炎、止咳、祛痰作用及哮喘大鼠肺组织病理学改变,测定支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞总数、淋巴细胞(Ly)、嗜酸性粒细胞(Eos)、中性粒细胞(Neu)的百分比及肺组织和BALF中的转化生长因子-β1(TGF-β1)水平,探讨其抗炎、止咳、祛痰作用及其对哮喘大鼠气道炎症的影响,为维药神香草的开发利用奠定基础。通过小鼠右耳二甲苯致炎法、氨水喷雾致小鼠咳嗽法、小鼠气管酚红排泌法进行抗炎、止咳、祛痰实验。哮喘大鼠气道炎症的影响实验中,采用卵清白蛋白(OVA)致敏和激发法复制哮喘模型,进行药物干预,观察肺组织病理学改变,测定BALF中细胞总数、Ly、Eos、Neu的百分比;以酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测肺组织及BALF中TGF-β1水平。结果显示,不同剂量给药组可明显抑制二甲苯致小鼠的耳廓肿(P0.05)、减少氨水喷雾致小鼠咳嗽次数(P0.05)、促进小鼠气管酚红排泌(P0.05),且均呈明显的剂量依赖关系;与模型组比较,各给药组大鼠BALF中细胞总数,Ly、Eos、Neu的百分比,TGF-β1水平及肺组织中的TGF-β1水平均明显下降,差异有统计学意义(P0.05);由此推测,维药神香草超临界CO_2流体萃取物具有显著的抗炎、止咳及祛痰作用,其可能通过抑制Ly、Eos、Neu等炎症细胞及细胞因子TGF-β1的分泌,减轻或改善哮喘的气道炎症。     

趋化素对肥胖哮喘小鼠气道IL-17表达的影响

为了研究趋化素（chemerin）对肥胖哮喘小鼠气道中IL-17表达的影响。通过酶联免疫吸附测定（ELISA）、免疫组织化学染色等方法研究了小鼠体内chemerin和IL-17的表达,选取了36只雄性C57BL/C小鼠随机分至6组,每组6只,分别为正常对照组,肥胖对照组,哮喘模型组,肥胖哮喘组,二甲双胍哮喘组,二甲双胍肥胖哮喘组。造模完毕后,收集各组小鼠血清、支气管肺泡灌洗液（BALF）、肺组织,检测血清及BALF中chemerin及IL-17浓度,进行BALF细胞计数与分类以及肺组织免疫组化染色。结果表明：与正常对照组、肥胖对照组及哮喘模型组相比,肥胖哮喘组小鼠血清及BALF中chemerin、IL-17浓度明显升高,BALF中嗜酸性粒细胞及中性粒细胞计数增多;经二甲双胍干预后,二甲双胍肥胖哮喘组小鼠chemerin及IL-17浓度较肥胖哮喘组小鼠降低,且各分类细胞计数减少。可见随着chemerin表达的减少,肥胖哮喘小鼠气道IL-17水平降低,chemerin可能参与了肥胖哮喘小鼠气道IL-17的表达。     

1,25(OH)_2VD_3在过敏原特异性免疫治疗花粉过敏哮喘中的应用

以1,25(OH)₂VD₃为佐剂制备软叶针葵花粉变应原疫苗,以小鼠致敏哮喘模型为研究对象进行特异性免疫治疗.通过检测小鼠气道高反应性、血清中特异性抗体、细胞因子以及肺组织病理学切片等指标对治疗模型的构建进行评价,探讨1,25(OH)₂VD₃在过敏原特异性免疫治疗花粉过敏哮喘免疫机制中的作用.结果表明:以1,25(OH)₂VD₃为变应原疫苗能有效抑制花粉特异性IgE的产生和Th2细胞因子IL-4分泌,促进封闭性抗体IgG2a产生和Th1细胞因子IFN-γ的分泌,增加耐受性细胞因子IL-10生产,使Th2反应向Th1反应转变.1,25(OH)₂VD₃在花粉过敏性哮喘治疗中能大幅提高过敏原特异性免疫治疗的疗效.     

五味子木脂素对哮喘模型小鼠Th2相关炎症因子的影响

目的观察五味子总木脂素对哮喘模型小鼠的干预作用,并分析其对Th2相关炎症因子的影响.方法将雄性BALB/c小鼠随机分为3组,分别为对照组、哮喘模型组和五味子木脂素组,其中,模型组和五味子木脂素组运用卵清蛋白(OVA)联合氢氧化铝建立小鼠的哮喘动物模型,五味子木脂素组灌胃给予五味子木脂素30 m g/kg,1次/d,连续8 d,其余组以蒸馏水作为对照,运用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清中卵清蛋白特异性抗体Ig E和肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-5(IL-5)的水平,并观察肺组织病理学变化.结果与模型组比较,五味子木脂素组小鼠的哮喘症状得到明显改善,肺组织的炎性损伤明显减轻,体内IL-4、IL-5和Ig E的水平也显著下降.结论五味子木脂素具有良好的治疗哮喘的生物活性.     

白细胞介素23基因沉默对支气管哮喘小鼠的影响

目的观察白细胞介素23(IL-23)基因沉默对肺组织IL-23蛋白表达、哮喘鼠气道炎症和支气管肺泡灌洗液(BALF)中干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-5(IL-5)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)水平的影响.方法构建siRNA IL-23表达载体并通过脂质体转染获得高浓度的含有siRNA IL-23的浓缩液,RT-PCR和WB法检测IL-23mRNA及IL-23蛋白表达水平,确定转染成功.通过滴鼻方式吸入到卵蛋白(OVA)致敏的小鼠体内,观察其对BALF中炎症细胞的影响;ELISA方法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞因子IFN-γ,IL-5,TNF-α,ICAM-1的变化;HE染色观察肺组织病理学改变;WB法检测肺组织中IL-23蛋白表达.结果与对照组相比,模型组及空质粒组BALF中IL-5,TNF-α,ICAM-1水平升高,IFN-γ水平下降,肺组织中IL-23蛋白表达量升高(P0.01),沉默组上述各项指标明显下降,IFN-γ水平升高(P0.01);病理学检测结果表明:与对照组相比,模型组和空质粒组气道内有大量炎性细胞浸润,沉默组炎症受到抑制(P0.01).结论 IL-23在哮喘发病中起重要作用,阻断其基因表达可以明显改变哮喘症状.     

mPEG5000修饰的VLA-4拮抗肽KILDVA对致敏性哮喘小鼠肺组织Eotaxin表达的影响

观察mPEG5000修饰的VLA-4拮抗肽KILDVA对小鼠哮喘性气道炎和肺组织CC型趋化因子Eotaxin表达的影响,探讨mPEG5000-KILDVA抗支气管哮喘的作用机制.采用卵清白蛋白(OVA)建立小鼠哮喘模型.观察小鼠的行为变化,制备小鼠血清,收集肺泡灌洗液进行白细胞总数和嗜酸性粒细胞计数;采用酶联免疫吸附法测定血清、支气管肺泡灌洗液中Eotaxin水平;免疫组化方法检测肺组织Eotaxin的表达.结果显示:模型组小鼠血清和支气管肺泡灌洗液中Eotaxin水平较正常组明显升高(p0.01);mPEG5000-KILDVA组比模型组明显减少(p0.05);mPEG5000-KILDVA组支气管与地塞米松组无显著差异(p0.05).模型组小鼠支气管肺泡灌洗液中白细胞总数及嗜酸性粒细胞计数较正常组明显增加(p0.01);mPEG5000-KILDVA组较模型组明显下降(p0.05);mPEG5000-KILDVA组支气管与地塞米松组无显著差异(p0.05).模型组肺组织Eotaxin蛋白表达量较正常组明显升高(p0.01),mPEG5000-KILDVA组小鼠较模型组明显下降(p0.05);mPEG5000-KILDVA组支气管与地塞米松组无显著差异(p0.05).研究提示mPEG5000-KILDVA减轻哮喘小鼠的气道炎症与抑制哮喘小鼠肺组织Eotaxin的过度表达有关.     

诱导痰中IL-8和中性粒细胞在支气管哮喘发病中作用的研究

目的探讨哮喘发病过程中嗜中性粒细胞和IL-8的作用及相互关系.方法以确诊哮喘的病人为研究对象,急性发作期10例、缓解期10例,同时选10例正常人作对照,进行诱导痰的细胞分类检查,IL-8,MAD检测.结果急性发作期哮喘病人诱导痰的嗜中性粒细胞数目、IL-8水平、MAD水平明显高于缓解期(P<0.05)和正常人(P<0.01).结论哮喘病人诱导痰IL-8明显增高,对嗜中性粒细胞有强大的趋化作用,促使其进入气道并参与嗜中性粒细胞脱颗粒、产生活性氧自由基及花生四烯酸代谢产物等物质损伤气道,引起气道炎症和气道高反应性,在哮喘发作或重度哮喘时能起到很重要的作用.     

维药神香草总黄酮对卵清白蛋白致大鼠哮喘模型气道炎症的影响

 通过观察哮喘大鼠肺组织病理学改变、测定支气管肺泡灌洗液（BALF）细胞总数、淋巴细胞（Ly）、嗜酸性粒细胞（Eos）、中性粒细胞（Neu）的百分比以及肺组织和BALF中的转化生长因子-β1（TGF-β1）,以探讨神香草总黄酮对哮喘大鼠气道炎症的影响,阐明维药神香草总黄酮抗哮喘的部分作用机制。试验中将大鼠随机分为正常对照组、哮喘模型组、氨茶碱阳性对照组、神香草总黄酮高、中、低剂量治疗组。采用卵清白蛋白（OVA）、氢氧化铝及百白破疫苗联合致敏和OVA生理盐水雾化激发的方法制备哮喘模型。测定BALF中细胞总数、Ly、Eos、Neu的百分比;采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测肺组织及BALF中TGF-β1水平。结果显示,与模型组相比,各治疗组中,大鼠BALF中细胞总数、Ly、Eos、Neu的百分比、TGF-β1水平及肺组织中的TGF-β1水平均明显下降,差异有统计学意义（P<0.05）;神香草总黄酮各剂量组之间相互比较,BALF及肺组织中的以上指标差异均有统计学意义（P<0.05）,呈剂量依赖性趋势。由此推测,维药神香草总黄酮可能通过抑制Ly、Eos、Neu等炎症细胞及细胞因子TGF-β1的分泌,减轻或改善哮喘的气道炎症。     

桔梗皂苷对慢性支气管炎小鼠气道重塑的干预作用研究

探讨桔梗皂苷(kikyosaponin,简称KS)对慢支小鼠气道重塑的干预作用机制.将50只健康小鼠分成正常对照组,模型组和桔梗皂苷低、中、高剂量组,除正常组外,其余4组动物均采用烟熏加浓氨水吸入法建立慢支模型,然后分别用药物进行治疗.实验结束后,取各组小鼠肺组织进行石蜡制片,苏木精-伊红(HE)染色分析气管管壁厚度变化,Masson染色分析肺组织胶原沉积,采用Image-Pro Plus 6.0图像分析软件测量总管壁厚度(WAt/Pbm)、内壁厚度(WAi/Pbm)、平滑肌厚度(WAm/Pbm)以代表气道重塑指标;生化法检测肺组织中羟脯氨酸(Hyp)含量;免疫组织化学染色法观察MMP-9在肺组织中的表达;蛋白印迹术分析MMP-9和TIMP-1在肺组织中的表达水平.HE染色显示,模型组肺组织中支气管明显狭窄,管腔及肺泡中含有大量炎性分泌物,且气道重塑的三项指标均异常增高;免疫组化和三色法显示,模型组小鼠支气管和肺泡细胞中有大量的MMP-9表达,且有胶原蛋白增加明显,生化检测发现模型组小鼠肺组织中Hyp含量亦异常升高,且MMP-9和TIMP-1表达水平升高显著,与正常对照组相比,差异十分显著(P0.01).在连续用药30 d后,与模型组相比,桔梗皂苷各剂量组能明显抑制慢支小鼠支气管胶原纤维增生,改善气道重塑各项指标;减少MMP-9和TIMP-1表达水平,使气管重塑得到显著的减轻(P0.05,P0.01,P0.01).结果显示,桔梗皂苷可明显减轻慢支小鼠气道重塑的病理改变,其干预机制可能是通过清除慢支小鼠肺组织中的炎性因子和自由基的含量,同时又能抑制MMP-9和TIMP-1的表达,从而达到减少胶原蛋白的沉积以减轻气管狭窄而达到逆转气道重塑之目的.     

糖皮质激素对高氧诱导的新生小鼠肺功能损伤、炎症反应和JAK2/STAT5通路的影响

目的探究糖皮质激素(Glucocorticoid,Gluc)对高氧诱导的新生小鼠肺功能损伤、炎症反应和JAK2/STAT5通路的影响,为治疗肺功能损伤提供理论依据。方法构建肺损伤小鼠模型,将小鼠随机分为:对照组、Hyperoxia组、低剂量Gluc组、中剂量Gluc组、高剂量Gluc组。通过动物肺功能分析系统检测静息通气量、气道阻力、气道压力、肺容积、最大吸气流量。HE染色和TUNEL染色观察小鼠肺脏组织形态和细胞凋亡情况; RT-PCR、Western Blot检测α-SMA、TGF-β表达量; Elisa检测IL-6、MCP-1、iNOS含量; Western Blot检测JAK2、STAT5的磷酸化情况。结果与对照组相比,Hyperoxia组小鼠静息通气量、气道阻力、气道压力、肺容积、最大吸气流量显著降低(P <0. 05),细胞凋亡数、α-SMA与TGF-β表达量、EOS比值、IL-6、MCP-1、iNOS含量均显著增加(P <0. 05),且JAK2、STAT5磷酸化水平显著升高(P <0. 05)。而中、高剂量Gluc可显著逆转高氧对小鼠以上指标的影响。此外,Hyperoxia组小鼠出现肺实质结构紊乱、肺泡间隔增宽等组织形态的改变,在低、中、高剂量Gluc组中组织形态改变程度逐渐降低。结论糖皮质激素可缓解肺组织损伤并下调模型小鼠肺脏组织中炎症因子含量,同时抑制JAK2/STAT5通路活性,对高氧诱导的肺组织损伤具有较好的治疗作用。     

甘草苷对感染后咳嗽(肺阴虚证)小鼠的止咳作用机制及抗氧化作用的研究

为探讨甘草苷对感染后咳嗽(肺阴虚证)小鼠的止咳疗效及抗氧化的作用机制.采用烟熏＋内毒素(LPS)滴鼻＋甲状腺素灌胃＋辣椒素雾化诱咳来构建感染后咳嗽(肺阴虚证)小鼠模型；造模成功后随机分为空白组(生理盐水)、模型组(生理盐水)、阳性组(孟鲁司特钠)和甘草苷低、中、高剂量组；观察造模前后各组小鼠的行为学及体质量变化，采用辣椒素雾化诱咳来测定各组小鼠的咳嗽敏感性及咳嗽次数，通过酶联免疫吸附法(ELISA)测定小鼠血清中炎症与肺组织中抗氧化损伤相关蛋白水平变化并经由苏木精-伊红(HE)染色法来观察各组小鼠的肺组织病变.结果表明，甘草苷止咳的作用机制可能为有效减少小鼠血清中TNF-α、IL-6、IL-13、TLR2、TGF-β1、IgE等细胞因子及炎性介质的释放，进而减轻气道感染性及变态性炎性反应环境来降低咳嗽高敏感性，减少对咳嗽中枢的刺激来达到止咳的目的；抗氧化的作用机制可能为有效提高小鼠肺组织中SOD的含量，减少小鼠肺组织中MDA的含量，来改善体内抗氧化平衡系统的紊乱，有效清除机体中的过量自由基，提高机体内抗氧化酶的含量，以减轻氧化损伤来达到抗氧化的目的.     

天灸对哮喘模型大鼠气道重构的影响

目的:观察天灸防治支气管哮喘中对气道重构的影响.方法:采用卵蛋白等致敏建立大鼠哮喘模型,肺组织行HE染色,镜下观察支气管平滑肌、胶原的病理改变,气道腔直径和面积.结果:天灸组胶原含量、气道平滑肌厚度明显低于模型组(P<0.05或P<0.01),气道内腔直径、面积明显大于模型组.结论:天灸可防止气道增厚,具有抑制气道重建的作用.     

黄芪注射液对急性肺损伤大鼠肺组织中存活素表达的影响

目的探讨黄芪注射液对急性肺损伤大鼠肺组织中存活素表达的影响。方法将36只sD大鼠按随机数字表分为3组,各组注药均从尾静脉注入。对照组注入生理盐水1ml;模型组应用脂多糖5mg／ks溶解于1ml生理盐水注入;干预组在模型组基础上应用黄芪注射液治疗。24h后处死,收集右上肺组织固定包埋,常规HE染色,观察肺组织病理变化。用免疫组化和图像分析系统定量检测肺组织中存活素表达。用TUNEL原位凋亡法检测肺组织细胞凋亡,并计算凋亡指数。结果干预组肺组织炎症改变明显轻于模型组。急性肺损伤大鼠肺组织存活素表达为对照组最高,其次为干预组,模型组最低;而肺组织细胞凋亡指数为模型组最高,其次为干预组,最低为对照组,差异均有统计学意义。存活素与凋亡指数呈负相关性。结论黄芪注射液可能通过调控ALI大鼠肺组织中存活素表达,从而抑制肺组织细胞凋亡,而且黄芪注射液可能有改善ALI肺组织的病理改变。     

The menthol receptor TRPM8 is the principal detector of environmental cold

Sensory nerve fibres can detect changes in temperature over a remarkably wide range, a process that has been proposed to involve direct activation of thermosensitive excitatory transient receptor potential (TRP) ion channels. One such channel--TRP melastatin 8 (TRPM8) or cold and menthol receptor 1 (CMR1)--is activated by chemical cooling agents (such as menthol) or when ambient temperatures drop below approximately 26 degrees C, suggesting that it mediates the detection of cold thermal stimuli by primary afferent sensory neurons. However, some studies have questioned the contribution of TRPM8 to cold detection or proposed that other excitatory or inhibitory channels are more critical to this sensory modality in vivo. Here we show that cultured sensory neurons and intact sensory nerve fibres from TRPM8-deficient mice exhibit profoundly diminished responses to cold. These animals also show clear behavioural deficits in their ability to discriminate between cold and warm surfaces, or to respond to evaporative cooling. At the same time, TRPM8 mutant mice are not completely insensitive to cold as they avoid contact with surfaces below 10 degrees C, albeit with reduced efficiency. Thus, our findings demonstrate an essential and predominant role for TRPM8 in thermosensation over a wide range of cold temperatures, validating the hypothesis that TRP channels are the principal sensors of thermal stimuli in the peripheral nervous system.