棉铃虫致病菌分离、鉴定及高活力苏云金杆菌的筛选

从山东省棉田自然死亡的棉铃虫上分离到常见致病菌至少有8种,经鉴定为:苏云金杆菌(Bacillusthuringiensis)、蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、球孢白僵菌(Beauveriabassiana)、卵孢白僵菌(B.tenella)、青霉菌属真菌(Penicilliumspp.)、拟青霉属真菌(Paecilimycesspp.)和蛾霉属真菌(Nomuraespp.);得到一株对棉铃虫高毒的苏云金杆菌菌株Hu,其毒力比普遍使用的Bt菌系7216高,二者的LC50分别为15.1μg/mL和26.28μg/mL。蛾霉属真菌对棉铃虫有明显的拒食作用和杀伤作用,但人工培养时生长十分缓慢。     

松材线虫病死木中真菌和细菌的分离

从来自江苏省和浙江省几个疫区的松材线虫(PWN)病病死木的木质部中分离出111个真菌菌株，经鉴定种类为木霉(Trichoderma spp．)、轮枝霉(Verticillium spp．)、青霉(Penicillium spp．)、镰孢霉(Fusarium spp．)、曲霉(Aspergillus spp.)、毛壳菌(Chaetomium spp．)、茎点菌(Phoma spp．)、短梗单孢霉(Dicoccum sp．)、头孢霉(Cephalosporium sp．)、交链孢霉(Alternaria sp．)，这些真菌约占分离真菌总数的60％；在43％的未鉴定菌中，除3个菌株为有孢菌外，其余均是无孢菌。可以分离出真菌的病死木占56．42％，从病死木中可分离出细菌的比例达86％，可同时分离到真菌和细菌的比例为43．6％。     

CP1抗菌蛋白对出芽短梗霉内容物泄露及呼吸作用的影响

通过对CP1抗菌蛋白作用下出芽短梗霉胞内蛋白质及离子的泄漏进行研究表明,CP1抗菌蛋白引起菌丝和孢子蛋白质的泄漏较明显,CP1抗菌蛋白可直接引起菌丝体和孢子的外壁穿孔、破裂,胞内物质泄漏;CP1抗菌蛋白还能引起菌丝和孢子内Ca2+的泄漏,说明该抗菌蛋白能作用于出芽短梗霉菌丝体和孢子外膜,形成离子通道,使Ca2+从菌体细胞中释放出来.CP1抗菌蛋白对出芽短梗霉菌丝体和孢子的氧呼吸有明显的抑制作用,随着CP1抗菌蛋白浓度的增加,其耗氧百分率减少,呼吸作用从起始到停止经历的时间缩短.表明CP1抗菌蛋白对出芽短梗霉菌丝体和孢子氧呼吸的抑制作用是其活性作用的一个重要原因.     

坛紫菜紫外吸收物质类菌孢素氨基酸的世代差异特征

经济海藻坛紫菜(Pyropia haitanensis)的生活史是异型世代交替的。坛紫菜不同世代所处的紫外辐射(UVR)环境差异很大,有必要研究不同世代在紫外辐射耐受机制方面的差异。以坛紫菜高产品系Z-61为材料,测定并分析了坛紫菜紫外吸收物质的世代差异,发现紫外吸收物质类菌孢素氨基酸(MAAs)在叶状体中的含量是丝状体的6倍。还克隆获得了两条MAAs合成关键基因的全长序列,分别命名为PharoB-1和PharoB-2。通过系统进化树分析显示,PharoB-1和PharoB-2的编码蛋白分别与微藻和高等植物亲缘关系较近。两条基因在叶状体世代的表达水平均要显著高于丝状体世代,与坛紫菜MAAs含量的世代差异一致,这种差异可能与坛紫菜不同世代的紫外辐射环境直接相关。     

竹叶提取物对微生物抑制作用研究

竹叶的乙醇醋酸提取物对大肠杆菌、枯草牙孢杆菌、金黄色葡萄球菌、苏云金芽孢杆菌具有广泛的抑制作用,抑制效果随作用时间延及使用提取物浓度的升高而增强,但是对根霉和黑曲霉的抑制作用较弱。     

Bt和球孢白僵菌混配对酒曲害虫黑菌虫的毒杀效果研究

利用苏云金芽孢杆菌与球孢白僵菌混配杀灭酒曲害虫黑菌虫．研究结果表明：在温度40℃、相对湿度73％～75％条件下,苏云金芽孢杆菌杀虫剂与球孢白僵菌杀虫剂以5：4混配时能有效杀死酒曲害虫黑菌虫,杀虫至第15天可以使黑菌虫的校正死亡率达93．33％．     

关于优良生防菌株筛选的探讨

目的:测定7种生防微生物菌种室内毒力和比较室外小区防治同翅目昆虫温室白粉虱和桃蚜.方法:首先制备各种菌株发酵液,以温室白粉虱和桃蚜为研究对象,测定各种菌株发酵液对温室白粉虱和桃蚜这两种害虫的杀毒能力.结论:蜡蚧轮枝菌L-31、L-05和粉虱座壳孢F-85在离体条件下对温室白粉虱和桃蚜均表现出很强的杀灭毒力,校正累计死亡率(％)均在90％左右,与其它菌种间存在显著性差异;粉虱座壳孢对两种害虫的毒力较高,但室外防效不理想;苏云金茅孢杆菌Bt1、Bt2和球孢白僵菌Q-55、Q-27对温室白粉虱和桃蚜的毒力较弱.     

一株产伴孢晶体的霉状芽孢杆菌的研究

自济南郊区菜园土中,分离到一株产伴孢晶体的霉状芽孢杆菌。对其进行了形态、培养特征、生理生化反应、血清学反应以及 DNA 的 G+C 含量和 DNA-DNA 杂交率的试验测定。该菌有芽孢,其 DNA 中 G+C 含量为33. 9摩尔%(Tm)。由于该菌产典型的伴孢晶体,初步分析可将其归于苏芸金杆菌类(Baci-llus thuringiensis),并作为一种新亚种,命名为苏芸金杆菌霉状亚种(Baci-llus thuringiensis subsp.mycoides)。     

拮抗菌HT-6引起致病疫霉菌体的生理变化

为了解核桃内生细菌HT-6对致病疫霉的抑制作用机理,采用对峙培养和传统培养相结合的方法检测了受拮抗菌HT-6抑制不同阶段后致病疫霉菌丝体内部分活性物质、抗性相关酶活、电导率以及溶氧量的变化.结果显示,随对峙培养时间延长,受抑制组与对照组中致病疫霉菌丝体内可溶性糖和淀粉含量虽然均呈增加趋势,蛋白质含量均呈下降趋势,但受抑制组可溶性糖、淀粉及蛋白质含量均远低于对照组,且均在对峙培养第15天时差异最大(P<0.01);受抑制组和对照组菌丝体内苯丙氨酸解氨酶、多酚氧化酶和过氧化物酶3种酶活的变化趋势与上述3种物质的变化趋势相似,但均在培养的第12天达到最高,且受抑制组菌体内3种酶活均远高于对照组,与对照达到极显著差异(P<0.01).此外,受拮抗菌HT-6抑制后致病疫霉菌丝体内的电导率(162.77 μS/cm)显著高于对照组(60.03 μS/cm),而溶氧量(47.13%)显著低于对照组(56.1%).这些结果表明:HT-6菌株可通过抑制或大量消耗致病疫霉菌丝体内部分活性物质,同时增加细胞膜透性、降低呼吸作用实现对致病疫霉菌丝体生长的抑制作用.     

食用菌污染真菌的调查研究

报道了食用菌制种及栽培中的污染真菌5科7属12种:毛霉科(Mucoraceae)1属2种,根霉属(Rhizopus),黑根霉(R.nigricans Ehrenb.),杭州根霉(R.hangchow Yamazaki.),点头根霉(R.reflexus Ehrenb.);长喙壳菌科(Ceratostomataceae)1属1种,毛壳菌属(Chaetomium Kunze et Schmidt),卷顶毛壳菌(C.murorumCda.);丛梗孢科(Moniliaceae)2属5种,青霉属(Penicillium)3种,皮落青霉(P.crustosumThom),葡酒色青霉(P.vinaleumGilman et Abhott.),类阿达青霉(P.adametzioides Abeex Smith.Br.),曲霉属(Aspergillus)2种,黄曲霉(A.flavusLink.),青霉状曲霉(A.penicilloidesSpegazzini);暗梗孢科(Dematiaceae)2属2种,链格孢属(Al-ternariaNees ex Wallr.)1种,细交孢链孢霉(A.tenuis Nees.),枝孢霉属(Cladosporium)1种,禾黑芽枝霉[C.herbarum(Pers.)Link];黑盘孢科(Melanconiaceae)1属1种,拟盘多毛孢菌属(Pestalotiopsis),拟盘多毛孢菌(Pestalotiopsissp.).其中,杭州根霉(R.hangchow),点头根霉(R.reflexus),卷顶毛壳菌(C.murorum),皮落青霉(P.crustosum),葡酒色青霉(P.vinaleum),类阿达青霉(P.adametzioides),青霉状曲霉(A.penicilloides),禾黑芽枝霉(C.herbarum)8种真菌为河南省食用菌污染真菌新记录.     

理化因素对苏云金芽孢杆菌噬菌体活性影响的研究

测定了ｐＨ和温度变化以及紫外线照射下苏云金芽孢杆菌噬菌体的存活率．结果表明，这些理化因素对噬菌体都有程度不同的灭活作用．应引以注意的是噬菌体结构愈复杂，愈容易被这些理化因素所破坏，相反结构简单的噬菌体（如具有短尾的噬菌体）则具有较强的耐受性．提出了几种适用于工厂生产的消灭噬菌体的方法．     

一株苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)的分离与鉴定

利用醋酸盐对苏云金芽孢杆菌芽孢萌发的选择性抑制特性，采用选择性培养基从土壤中分离苏云金芽孢杆菌，对分离菌株的个体形态，生理生化特点进行了分类研究，确定该菌株即为苏云金杆菌，采用改进的培养基培养伴胞晶体，证明该培养基可在48h内产生大量的伴胞晶体。     

田基黄提取物抑菌作用的研究

该实验以金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、青黄链霉菌、酿酒酵母菌、苏云金芽孢杆菌和变形杆菌为供试菌种,采用采用滤纸片扩散法对田基黄水提取液进行抑菌实验研究,并测定其最低抑菌浓度（MIC）,其结果表明：田基黄水提取物对供试菌种普遍有抑制作用,黑曲霉除外;MIC也因菌种不同而不同,金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌和青黄链霉菌为0.25g/mL,酿酒酵母菌为0.5g/mL,苏云金芽孢杆菌和变形杆菌均为0.125g/mL.实验还采用不同有机溶剂的提取物对选取的五种供试菌种进行抑菌作用研究,其结果表明：田基黄有机溶剂提取物对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、青黄链霉菌、苏云金芽孢杆菌均有抑制作用,且抑菌效果均比水提取物的抑菌效果明显.     

苏云金芽孢杆菌cyt1Aa基因在拟步甲亚种菌株中的表达及重组菌株杀虫活性研究

将含苏云金芽孢杆菌以色列亚种(Bacillus thuringiensis subsp.israelensis,简称Bti)cyt1Aa基因的质粒电激转化至对鞘翅目害虫有专一活性的Bt拟步甲亚种(Bacillus thuringiensis subsp.tenebrionis,简称Btt)菌株中进行表达,获得重组菌株Btt-WF45。对表达产物进行SDS-PAGE分析,显示Cyt1Aa蛋白获得了大量表达。生物测定结果表明,Btt-WF45对鞘翅目小圆叶甲(Plagiodera Redtenbacher)幼虫没有毒力,对致倦库蚊(Culex quinquefasciatus)的毒力比对照菌株4Q7-WF45高0.33倍,对白纹伊蚊(Aedes albopictus)的毒力比4Q7-WF45高0.63倍。由于在重组菌株Btt-WF45中Cry3A蛋白的表达量太低,所以在该结果中未能显示Cyt1Aa蛋白与Cry3A蛋白是否存在协同增效作用。     

苏芸金杆菌中试规模发酵的工艺控制初探

采用密闭通风发酵设备对苏芸金杆菌ＢＴ—３７进行了中试规模液体深层发酵的实验和生产，就不同黄豆饼粉含量培养基和不同种子罐培养菌龄对最终发酵液活菌含量的影响作了初步探讨，为进一步优化工艺控制打下了基础。     

苏云金芽孢杆菌与平沙绿僵菌混配对卷叶虫的防治研究

利用苏云金芽孢杆菌杀虫剂与平沙绿僵菌混配防治园林害虫卷叶虫.结果表明:在温度32℃、相对湿度70%～73%条件下,苏云金芽孢杆菌杀虫剂与平沙绿僵菌液体制剂采用1:1的比例混合,混合液体制剂使用量为0.12ml/g时,试验用虫在第20天死亡率可达86.3%,校正死亡率可达82%.     

分子筛在苏云金芽孢杆菌发酵液浓缩中的应用研究

本文观察了不同孔径分子筛对 B.t.发酵液的浓缩效果 ,结果表明 6 0 0 - 5 0万 Da这 9种规格孔径的分子筛膜的滤出液都检测不到晶体和细胞的存在 ,晶体和芽胞的回收率为 10 0 %。但超滤液通量随着膜孔径增大而增大。发酵液固形物含量越低 ,分离时间越短 ,浓缩比越高 ,当固形物含量在 1.5 %时 ,分离时间为2 0 min,浓缩比为 8.6 6 7;而固形物含量为 15 %时 ,分离时间延长到 6 9min,浓缩比降为 1.348。浓缩效果还受待浓缩液通过分子筛速度的影响。     

几丁质酶在苏云金芽孢杆菌中的分布及抑小麦赤霉菌菌株的筛选

利用几丁质平板法和几丁质酶基因特异引物PCR两种方法,对本室保藏的995株苏云金芽孢杆菌的几丁质酶及其基因进行了检测.结果显示所有被检测的菌株都可以在几丁质为唯一碳源的平板上生长.其中93.0%的菌株PCR检测阳性,54.1%的菌株可产生明显的水解圈.证明苏云金芽孢杆菌中几丁质酶普遍存在.通过研究发现Bt几丁质酶活力高低与其血清型及杀虫晶体蛋白基因的类型无相关性.同时对286个菌株进行了抑小麦赤霉菌实验,筛选出19株抑真菌效果较好的苏云金芽孢杆菌.     

Genome sequence of Bacillus cereus and comparative analysis with Bacillus anthracis

Bacillus cereus is an opportunistic pathogen causing food poisoning manifested by diarrhoeal or emetic syndromes. It is closely related to the animal and human pathogen Bacillus anthracis and the insect pathogen Bacillus thuringiensis, the former being used as a biological weapon and the latter as a pesticide. B. anthracis and B. thuringiensis are readily distinguished from B. cereus by the presence of plasmid-borne specific toxins (B. anthracis and B. thuringiensis) and capsule (B. anthracis). But phylogenetic studies based on the analysis of chromosomal genes bring controversial results, and it is unclear whether B. cereus, B. anthracis and B. thuringiensis are varieties of the same species or different species. Here we report the sequencing and analysis of the type strain B. cereus ATCC 14579. The complete genome sequence of B. cereus ATCC 14579 together with the gapped genome of B. anthracis A2012 enables us to perform comparative analysis, and hence to identify the genes that are conserved between B. cereus and B. anthracis, and the genes that are unique for each species. We use the former to clarify the phylogeny of the cereus group, and the latter to determine plasmid-independent species-specific markers.