Purifications and Structure Elucidations of Cyciopenol and Cyciopenin

肿瘤坏死因子α(TNF-α)是激活的巨噬细胞分泌的一种多功能因子,其过量表达可以引起类风湿性关节炎和其他自身免疫性疾病.因此,寻找开发其小分子抑制剂具有重要意义.在对一株分离自厦门海沧红树林土壤青霉属(Peni-cillium sp.)真菌的次级代谢产物进行分离纯化以获得TNF-α抑制制的研究中,通过中压反相硅胶柱层析(RP-18)、常压凝胶柱层析(Sephadex LH-20)、硅胶柱层析(Si-Gel)等柱层析技术对两种产量较高的化合物进行了分离纯化.通过对两个化合物的一维(1D-)、二维(2D-)核磁共振(NMR)和质谱(MS)数据的深入解析,确定两个化合物为生物碱圆弧菌醇和圆弧菌素,两者的产率分别达7.0和3.9 mg/L,并通过X射线单晶衍射确定了圆弧菌醇手性碳的绝对构型.圆弧菌醇和圆弧菌素是生物合成TNF-α诱导的人类HIV病毒复制强抑制剂纯绿青霉素过程的中间产物,但是在拮抗过量TNF-α的实验中并没有表现出明显的活性.该研究为开发利用这两种生物碱及通过生物转化合成纯绿青霉素,及加速新的潜在免疫抑制剂的研究提供基础.     

清香木姜子中的异喹啉生物碱

首次对清香木姜子(Litsea euosma W.W.Smith)中的异喹啉生物碱进行了研究，采用硅胶柱层析、重结晶等分离手段从中分离纯化得5个化合物，通过现代波谱技术及与标准品对照等方法鉴定了它们的结构。包括3个异喹啉生物碱和β-谷甾醇及β-胡萝卜甙。     

石松生物碱和三萜成分的分离与鉴定

云南宣威产石松(Lycopodium japonicum)干燥全草用甲醇提取,利用硅胶柱层析和Sephadex LH-20柱层析进行化学成分分离纯化,从中分离得到12个生物碱和3个三萜化合物,根据现代波谱技术和理化性质对化合物结构进行鉴定,鉴定结构为:lycodoline(1),acetyllycoposerramine M(2),lycoposerramine-M(3),6α-hydroxylycopodine(4),12-epilycodoline(5),12β-hydroxy-acetylfawcettiine(6),lucidioline(7),α-obscurine(8),des-N-methyl-α-obscurine(9),lycopoclavamine-A(10),fawcettimine(11),lycoflexine N-oxide(12),α-onocerin(13),26-nor-8-oxo-α-onocerin(14)和diepiserratenediol(15).化合物4、5、12和15为首次从石松中分离得到.     

土官村乌头中的二萜生物碱

 首次对土官村乌头(Aconitum tuguancunense Q.E.Yang)中的二萜生物碱进行了研究.采用硅胶柱层析、重结晶等方法从中分离纯化得4个化合物,通过现代波谱技术和理化常数对照鉴定了其化学结构,包括3个二萜生物碱和β-谷甾醇.     

狗牙花生物碱成分的研究

狗牙花(Ervatamia divaricata(L.)Burk.'Gouyahua')枝叶用丙酮提取,利用硅胶柱层析、Sephadex LH-20柱层析和反相柱层析进行化学成分分离纯化,从中分离得到6个吲哚生物碱。根据波谱技术和理化性质对化合物结构进行鉴定,鉴定结构为:coronaridine(1)、19-epi-heyneanine(2)、isovoacangine(3)、ibogamine(4)、19(S)-hydroxyibogamine(5)和apparicine(6),其中化合物2、3和5为首次从该植物中分离得到。     

红皮木姜子的化学成分研究(Ⅱ)

对滇产红皮木姜子(Litsea pedunculata)乙酸乙酯和正丁醇萃取部分的化学成分进行研究.采用硅胶柱层析、重结晶等分离手段从中分离纯化得到10个化合物,通过现代波谱技术和理化常数测定鉴定了它们的结构,其中7个为异喹啉生物碱:actinodaphnine(1),cassythicine(2),litseglutine A(3),boldine(4),norboldine(5),juziphin(6),reticuline(7);同时还得到(+)-8,8′-epiaristo-ligone(8),山奈酚(kaempferol,9)及 5α,8α-epidioxyergosta-6,22-dien-3β-ol(10).以上化合物均为首次从该植物中分离得到.     

当归水提物化学成分的研究

目的:研究当归 (Angelica sinensis(Oliv) Diels)的化学成分.方法:采用大孔树脂和硅胶柱层析进行分离纯化,通过理化和波谱分析鉴定其化学结构.结果:从当归水提物的大孔树脂20～40%乙醇洗脱部分分离得到3个化合物,经理化和波谱分析鉴定为6,7-二羟基藁本内酯1 (Z-6,7-cis-dihydroxyligustilide)、邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯2 (bis(2-ethylhexyl)phthalate)和布雷菲德菌素A 3 (brefeldin A).结论:化合物3为青霉菌属典型的代谢产物,有可能是当归根际真菌的代谢产物.     

百脉根化学成分的研究

百脉根(Lotus corniculatus Linn)地上部分用甲醇提取,利用硅胶柱层析、反相柱层析和Sephadex LH-20柱层析进行化学成分分离纯化,从中分离得到6个化合物.根据波谱解析和理化性质对化合物的结构进行鉴定,鉴定结构为:kaempherol(1)、quercetin(2)、quercetin-3-O-α-L-arabinofuranose(3)、2',4',3,4-α-pentahydroxychalcone(4)、trimerhylester dehydrochebulic acid(5)和syringic acid(6).其中化合物1-5为首次从该种植物中分离得到.     

棒柄花的化学成分研究

 对产于云南西双版纳的棒柄花(Cleidion brevipetiolatum)化学成分进行了研究,利用反复硅胶柱层析进行分离和纯化,从中得到8个化合物,并通过波谱学技术确定其结构,分别为2个三萜类化合物,2个维生素,2个芳香族化合物以及β-谷甾醇和β-胡萝卜甙.     

玉柏石松化学成分的研究

采用正相、反相硅胶柱色谱法对玉柏石松的非生物碱成分进行了分离和纯化,从中分离得到了2个化合物,通过NMR技术鉴定其结构分别为3α-乙酰氧基豆甾烷-21-羧酸(1)和二萜柳杉酚(2),且化合物2为新的甾体化合物,化合物2为首次从该植物中分离获得的二萜化合物.     

2型糖尿病患者性别、肥胖对血中RBP4和TNF-α的影响

目的:检测不同性别2型糖尿病患者正常体重组和肥胖组的血清视黄醇结合蛋白4(RBP4)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,探讨两者与体脂,糖类、脂类代谢,胰岛素敏感性等的相关性.方法:采用HOMA-IR评价各组胰岛素敏感性,测定受试者的体重指数(BMI),腰臀比(WHR),检测空腹状态下血清RBP4、TNF-α、血糖、HbA1c、血脂和胰岛素水平.结果:超重或肥胖者,RBP4及TNF-α浓度均比体重正常者高;男性RBP4浓度均比女性高,TNF-α浓度无性别差异.RBP4与TNF-α显著正相关.Pearson相关分析:不论性别,血清RBP4和BMI、WHR、TG及HOMA-IR均有显著正相关(P<0.05).而TNF-均与腹内型肥胖、脂代谢有关,TNF-α     

茶叶糖蛋白对RAW264.7细胞分泌作用的影响

本文研究利用小鼠巨噬细胞建立体外实验模型,对茶叶糖蛋白(TGP)的免疫活性进行研究。采用倒置显微镜观察细胞形态变化。Griess法和ELISA法检测不同剂量茶叶糖蛋白对RAW264.7细胞一氧化氮(NO)和细胞因子TNF-α、IL-1β分泌量的影响。结果表明:50μg/mL茶叶糖蛋白可显著促进细胞分泌一氧化氮和细胞因子TNF-α、IL-1β(p<0.01),说明茶叶糖蛋白可通过促进细胞分泌一氧化氮和细胞因子,起到活化RAW264.7细胞和调节机体免疫的功效。     

山香圆总黄酮对慢性咽炎模型大鼠 NF-κB、IκBα表达的影响

以2.5%氨水喷咽部建立大鼠慢性咽炎模型,用HE染色法观察咽部病理形态学改变,用ELISA法检测血清炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6,用RT-qPCR测定咽部组织NF-κBp65mRNA的表达,用Western blot检测咽部组织NF-κBp65和IκBα蛋白的表达,探讨山香圆总黄酮对慢性咽炎模型大鼠 NF-κB、IκBα表达的影响.结果显示:山香圆总黄酮能明显改善模型大鼠咽部病理形态学; 与模型组比较,山香圆总黄酮各组能不同程度地下调TNF-α、IL-1β、IL-6和NF-κBp65的表达并上调IκBα的表达,其中高剂量组最显著.这表明山香圆总黄酮能通过抑制NF-κB的表达和IκBα的解离下调炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表达,从而减轻炎症,发挥抗慢性咽炎作用.     

扁担杆正丁醇提取物抗炎作用及机制研究

采用化学方法制备扁担杆正丁醇提取物．采用二甲苯致小鼠耳郭肿胀法及角叉菜胶致小鼠足肿胀法观察抗炎作用,采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清IL-1β和TNF-α含量,分析抗炎机制．与对照组比较,高浓度扁担杆正丁醇提取物对二甲苯致小鼠耳郭肿胀及角叉菜胶致小鼠足肿胀均具有显著的抑制作用（P＜0．05）,并可不同程度降低角叉菜胶致炎小鼠血清IL-1β和TNF-α的含量（P＜0．05）．扁担杆正丁醇提取物具有一定的抗炎作用,其抗炎作用机制可能与降低TNF-α和IL-1β的表达有关．     

无菌大鼠深二度烫伤感染金黄色葡萄球菌机体炎性反应的研究

目的 为探究无菌大鼠深二度烫伤创面感染金黄色葡萄球菌后机体的炎性反应,试验应用无菌大鼠及SPF级大鼠分别建立深二度烫伤模型和烫伤后金黄色葡萄球菌感染模型,分析愈合过程、炎性反应及病理变化。方法20只6周龄雌性Wistar无菌大鼠,在超净工作台内采用恒温恒压烫伤仪94℃作用8 s造成大鼠深二度烫伤,随机分为两组,一组伤口感染浓度为1×1~08CFU/m L金黄色葡萄球菌0. 5 m L,一组不做处理,创面保持无菌状态; 20只6周龄雌性SPF级Wistar大鼠,在相同条件下烫伤,随机分为两组,一组伤口感染浓度为1×10~8CFU/m L金黄色葡萄球菌0. 5 m L,一组不做处理。分别观察4组大鼠的伤口结痂时间、脱痂时间和愈合时间,并在烫伤前(0 h),烫伤后24 h、48 h、3d、5 d、7d、10 d、14 d时取血清,检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1α(IL-1α)和表皮生长因子受体(EGFR)的变化;烫伤后24 h、3d、7 d、10 d伤口处皮肤HE染色,观察病理变化。结果 感染金黄色葡萄球菌无菌大鼠伤口脱痂及愈合时间显著短于其他3组(P<0. 05);感染金黄色葡萄球菌SPF级大鼠,结痂、脱痂及愈合时间显著长于其他3组(P<0. 05);感染金黄色葡萄球菌SPF级烫伤大鼠组由于双重损伤使血清炎性因子TNF-α、IL-1α水平升高,且在烫伤后72 h显著高于其他3组(P<0. 05);无菌大鼠由于对烫伤及金黄色葡萄球菌刺激反应激烈,烫伤后血清TNF-α、IL-1α和EGFR水平迅速升高,且在烫伤24 h时显著高于2组SPF大鼠(P<0. 05),在烫伤48 h时血清EGFR水平显高于两组SPF大鼠(P<0. 05)。病理显示,感染金黄色葡萄球菌SPF烫伤大鼠伤口处新生血管及肉芽组织生成时间均长于其他3组;感染金黄色葡萄球菌无菌烫伤大鼠伤口处新生血管及肉芽组织生成时间均短于其他3组。结论 无菌大鼠由于其免疫系统处于休眠状态,受到烫伤和金黄色葡萄球菌的双重刺激,迅速激活其全身免疫系统,加快了伤口愈合; SPF烫伤大鼠感染金黄色葡萄球菌后产生的多种免疫逃避分子加重了机体的炎性反应,延缓了伤口愈合。     

脑胶质瘤患者血清IL-6、IL-8、IL-10和TNF-α的表达及临床意义

[目的]探讨血清中白介素6（IL-6）、IL-8、IL-10和肿瘤坏死因子（TNF-α）对于脑胶质瘤的诊断价值。[材料与方法]分别检测健康对照组、低级别脑胶质瘤组和高级别脑胶质瘤组中IL-6、IL-8、IL-10和TNF-α的含量。[结果]与健康对照组比较,低级别脑胶质瘤组的IL-6、IL-8和TNF-α有统计学差异,高级别脑胶质瘤组的IL-6、IL-8、IL-10和TNF-α均具有统计学差异。与低级别脑胶质瘤组相比较,高级别脑胶质瘤组的IL-6、IL-10和TNF-α有统计学差异。其中区分低级别脑胶质瘤和高级别脑胶质瘤的诊断价值最好的指标为IL-10,其诊断灵敏性和特异性分别为74.90%和65.80%。IL-6、IL-10和TNF-α联合检测时其灵敏性和特异性分别为92.30%和93.10%。[结论]证实IL-6、IL-10和TNF-α联合诊断价值优于单项指标,为脑胶质瘤的临床诊断提供辅助方法。     

三峡区域特色药材宜昌润楠正丁醇提取物体外抗炎活性研究

目的：探讨宜昌润楠正丁醇提取物（MCB）的体外抗炎活性．方法：利用细菌脂多糖（LPS）刺激经佛波酯（PMA）诱导的人单核细胞THP-1建立体外炎症模型,MTT法检测样品的细胞毒性,ELISA方法检测药物干预前后细胞上清液中IL-1β、IL-6、TNF—α和NO的分泌量,综合评价MCB对炎性细胞因子和介质的抑制作用．结果：MCB显著性地抑制了IL-6和TNF—a以及NO的产生,并且其抑制作用具有时间和剂量依耐性,但对IL-1β没有明显的抑制效果．结论：本研究初步验证了宜昌润楠的体外抗炎作用,为其民间应用提供了理论依据,也为进-步分离生物活性物质提供了方向．     

肿瘤坏死因子α基因-238G＞A及-857C＞T多态性与河南汉族群体原发性高血压

目的:探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因-238G＞A及-857C＞T多态性与河南汉族原发性高血压(EH)的相关性.方法:ELISA法检测260例高血压患者和394例健康对照者血浆TNF-α水平,采用限制性扩增片段长度多态性(PCR-RFLP)的方法检测TNF-α基因-238G＞A及-857C＞T多态性.结果:与正常...     

使用VSD治疗的开放外伤患者血清中炎症因子水平变化及相关性研究

为探讨开放外伤患者在使用VSD治疗后,血清中炎症因子:肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)、白介素-10(IL-10)的变化及影响。采用随机选取2013年1月~2013年10月在我院骨科住院的开放外伤患者,60例使用VSD治疗的患者为研究组,50例常规换药治疗的患者作为对照组。分别于第一次治疗后第0.5、1、2、3、5、7天采集外周静脉血,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清中TNF-α、IL-6、IL-8、IL-10的含量并对照研究。结果显示,治疗前研究组和对照组静脉血TNF-α、IL-6、IL-8、IL-10含量无显著性差异(P0.05);治疗后两组TNF-α、IL-6、IL-8、IL-10含量均开始升高。治疗后12h开始,研究组的外周静脉血TNF-α含量较对照组明显降低,且具有统计学差异(P0.05);治疗后1 d开始,研究组患者的外周静脉血IL-6、IL-8、IL-10含量较对照组均明显降低,具有统计学差异(P0.05)。由此可知,开放外伤患者使用VSD技术治疗后,可以在很大程度上早期清除创面局部的炎症因子,从而降低激发的炎症放大效应,避免了炎症反应失控和病情恶化,有利于创面的恢复。     

核桃楸树皮提取物抗肿瘤及免疫调节作用的研究

研究核桃楸树皮提取物(HT)的抗肿瘤及免疫调节作用.建立荷瘤小鼠模型,检测HT抑瘤率及对免疫器官、腹腔巨噬细胞吞噬功能、T淋巴细胞增殖、血清IL-2、TNF-α水平以及机体免疫功能的影响;建立小鼠免疫功能低下模型,检测HT对外周血细胞的影响.实验表明HT具有明显的抑瘤作用,高剂量组抑瘤率达54.6%,可显著提高荷瘤小鼠胸腺及脾脏系数、巨噬细胞吞噬功能、T淋巴细胞增殖I、L-2及TNF-α的表达以及延长游泳及耐缺氧时间,并能升高免疫抑制小鼠的白细胞(p<0.050~0.001).HT可有效抑制肿瘤增殖并调节机体的免疫功能.