NF-κB信号通路在大鼠肝再生中调节肝细胞增殖的机理研究

为了解大鼠肝再生中肝细胞NF-κB信号通路对肝细胞增殖的调节作用,用Rat Genome 230 2.0芯片检测大鼠肝再生中NF-κB信号通路相关基因表达变化发现,芯片含138个NF-κB信号通路基因,其中46个基因与大鼠肝再生相关.用Ingenuity Pathway Analysis 9.0(IPA)软件解析上述基因表达变化预示的该信号通路调节肝细胞增殖作用发现,该通路的白细胞介素-1(IL-1)途径在大鼠肝再生起始阶段促进肝细胞增殖,生长因子(GF)途径在进展阶段促进肝细胞增殖,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)途径在起始阶段促进肝细胞增殖,终止阶段抑制肝细胞增殖.     

大鼠肝肿瘤成模过程中肝组织结构变化

为了解大鼠肝肿瘤成模过程中肝组织结构变化,用二乙基亚硝胺（diethylnitrosamine,DENA）灌胃法构建大鼠肝肿瘤模型,按常规方法制备肝组织石蜡切片和镜检.建模第1周大鼠肝脏的肝小叶结构完整,肝细胞排列整齐.从第5周起肝窦扩张,肝细胞变性肿胀并有不同程度的脂肪变性,同时出现炎症细胞浸润.第8周时肝窦充血,肝细胞脂肪变性严重,并出现纤维组织增生和明显的肝细胞增生.第10周时肝小叶结构受到破坏,出现肝细胞增生性结节.第12周时门管区内有不同程度的卵圆细胞增生及结缔组织增生,伴随胆管增生.第16周时肝小叶结构消失,可见典型的假小叶结构,结节内肝细胞异常增生明显,出现“结中结”,病理性核分裂相亦较多.第17周时肝肿瘤形成,且主要是肝细胞癌,癌细胞排列为索状、腺状、实片状.根据上述结果得出如下结论：用二乙基亚硝胺灌胃法构建大鼠肝肿瘤模型方便有效,肝组织结构和病理变化有规律,易于观察分析,值得推广应用.     

肝干细胞及其在肝再生医学中的应用

成体干细胞具有多向分化的潜能,在适宜的环境中,它们可以跨系、甚至跨胚层分化,这种现象称为"可塑性"(plasticity).多种成体组织来源的干细胞可在受者(包括小鼠、大鼠和人)肝脏内分化为肝细胞和胆管上皮细胞,为成体干细胞移植治疗终末期肝病提供了新思路.文中就不同来源的肝干细胞是否可以向肝细胞分化、影响干细胞分化的因素和调控机制以及干细胞在肝再生医学中的应用等方面做一综述.     

建立基因协同作用算法解析大鼠肝再生中基因表达丰度预示的细胞增殖活动

随着生物高通量分析技术的发展,获得基因组／蛋白组数据已较易实现．然而解析这些数据的生物学意义尚有不少困难,亟待克服．从生理反应的多样性、多步骤性、可逆性、循环性、重复性、网络性、可控性、适应性等特点入手,以基因表达丰度为基础,根据时间序列分析原理,应用皮尔森相关系数建立了两种描述基因协同作用的谱函数E。（￡）和巨,用它们分析基因表达丰度、表达变化预示的大鼠肝再生中肝细胞的增殖活动．结果显示,大鼠肝再生的进展阶段,即PH后12～72h肝细胞的增殖活动显著强于对照．进一步分析相关文献资料发现,上述结果与文献报道一致,表明在解析生物高通量分析数据的生物学意义方面,基因协同作用算法有一定应用价值．     

大鼠骨髓来源的c-met+β2m-细胞向肝细胞样细胞诱导分化的实验研究

为了观察大鼠骨髓来源的c-met+β2m-细胞在体内外是否可定向诱导分化为肝细胞样细胞,将雄性F344大鼠的c-met+β2m-细胞通过肝门静脉移植入由丙烯醇诱导损伤的F344雌鼠体内,观察移植细胞在受鼠肝内整合、增殖、分化、成熟以及损伤后的修复作用;通过模拟丙烯醇肝损伤大鼠体内微环境,将c-met+β2m-细胞与损伤肝细胞共培养,观察了c-met+β2m-细胞的形态变化,并检测了肝细胞特异性蛋白的表达和肝细胞特异性功能的变化.结果表明,大鼠c-met+β2m-细胞在体内外均可以分化为成熟的有功能的肝细胞,提示微环境在成体干细胞定向诱导分化中起决定性作用,这为骨髓成体干细胞移植治疗各种原因引发的肝功能障碍提供了新的途径.     

枸杞对大鼠肝再生的影响

以肝/体重比和核仁组成区相关嗜银蛋白(AgNORs)颗粒数为指标,研究了枸杞水煎剂对大鼠2/3肝切除后肝再生的影响.结果表明:肝切除后第3 d实验组大鼠的肝/体重比大于对照组,但无显著性差异,第4 d实验组大鼠的肝/体重比显著大于对照组(P<0.05);第3 d和第4 d实验组大鼠的肝细胞AgNORs颗粒数显著大于对照组(P<0.05).初步证实枸杞水煎剂对肝切除后的大鼠肝细胞分裂增殖有促进作用.     

高压氧对运动性疲劳大鼠肝糖原及肝脏形态结构的影响

目的：通过研究高压氧对肝糖原和肝脏形态结构的影响,探讨高压氧消除运动性疲劳的作用机制.方法：4周龄健康雄性SD大鼠30只,随机分为3组：对照组、疲劳模型组、疲劳高压氧暴露组,每组10只.建立大鼠游泳致力竭疲劳模型并通过高压氧暴露进行恢复;8周实验后取每只大鼠两块肝脏组织,其中一块取每只大鼠的肝脏相同部位,光镜观察肝脏组织的病理变化;另一块取肝右叶5g,制备成10％的肝组织匀浆,采用蒽酮法检测肝糖原含量的变化.结果：（1）疲劳高压氧暴露组大鼠游泳时间明显长于疲劳模型组（P＜0.05）.（2）疲劳模型组与对照组比较,肝糖原含量显著降低（P＜0.01）;高压氧暴露组与疲劳模型组比较,肝糖原含量显著增高（P＜0.05）;疲劳高压氧暴露组与对照组比较,肝糖原含量显著降低（P＜0.05）.（3）光镜观察显示：对照组大鼠肝组织结构正常,疲劳模型组大鼠肝细胞肿胀,核变大,细胞间质模糊,中央静脉扩张淤血,汇管区少量淋巴细胞浸润,胞浆疏松,肝窦内枯否细胞增生肥大.疲劳高压氧暴露组大鼠肝细胞核肿胀有所改善,充血现象消失,肝细胞轮廓较为清晰,细胞间质纹理较疲劳组更清晰,汇管区炎症消退.结论：高压氧消除运动性疲劳的部分作用机制,可能是通过调节肝糖原含量、促进血糖的稳定,并改善肝脏的形态结构、缓解肝组织损伤而实现.     

肝再生中表皮生长因子（EGF）及其受体的作用

肝细胞在正常情况下很少分裂，但在肝损伤后会表现出强大的再生能力。肝细胞的生长和增殖受到众多因子的影响，其中表皮生长因子（Epidermal Growth Factor，EGF）是一种强有丝分裂原，它与受体EGFR结合后能诱导组织细胞的增殖、分化、成熟，是目前已知的能够促进肝脏再生的一个主生长因子。现就表皮生长因子对肝再生的作用做一综述。     

富硒螺旋藻对肝叶切除大鼠肝细胞的抗氧化作用

目的:探讨富硒螺旋藻(Se-SP)对大鼠肝叶切除术后肝细胞的抗氧化效应。方法:采用W istar大鼠复制67%肝切除模型,3个不同剂量组的大鼠于术前连续7 d按每天每公斤体质量灌胃150 mg(H)、50 mg(M)、15 mg(L)的Se-SP,另设生理盐水(P)和假手术(F)对照组。在手术前(0h)及术后12 h和48 h等不同时间点取大鼠肝细胞,检测肝细胞中硒(Se)、脂质过氧化产物丙二醛(MDA)浓度以及谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:与P、F组相比,H、M组肝细胞中Se、GPx和SOD水平均明显升高(P<0.05),MDA水平则明显降低(P<0.05);Se水平与GPx活性呈明显正相关(R2=0.75,P<0.05)而与MDA呈明显负相关(R2=0.70,P<0.05)。结论:Se-SP对肝切除大鼠肝细胞具有良好的抗氧化保护效应,对GPx活性具有明显上调作用。     

肝脏干细胞的来源与潜能

肝干细胞是肝脏内具有自我更新能力和多分化潜能的细胞,包括卵圆细胞、小型肝细胞和小肝细胞样前体细胞.其中,卵圆细胞可能来源于胚胎干细胞和/或骨髓干细胞.肝干细胞能分化为肝实质细胞和胆管上皮细胞,在一定条件下,还能分化为胰腺细胞、肠上皮细胞、肌细胞或转化为肝肿瘤细胞.     

糖皮质激素对雌性大鼠再生肝细胞核仁组织区的影响

以肝细胞核仁组织区相关噬银蛋白(AgNORs)颗粒数目为指标,研究了大鼠部分肝切除(PH)后皮质酮对再生肝细胞转录活性的影响.结果显示:①无论何种处理方式,在PH后不同时期,肝脏门管区的肝细胞Ag-NORs数目均高于中央静脉区,大多差异极显著;②PH后24 h,各处理组(假手术、去肾上腺、去肾上腺+皮质酮)肝细胞AgNORs颗粒数均下降.除了高剂量皮质酮(40 mg/kg体重)处理组在PH 24 h后肝细胞AgNORs数持续升高外,其余各组均在PH后36 h达到最高值,随后又下降;③在PH后24~48 h,给去肾上腺大鼠注射的皮质酮剂量越高,AgNORs数目越少.以上结果表明:在PH后不同时间,大鼠肝脏门管区肝细胞的转录活性始终高于中央静脉区肝细胞;皮质酮对肝细胞的转录活性具有抑制作用,但抑制时间主要表现在PH 24 h以后.     

自体骨髓干细胞移植与归元方联用治疗急慢性肝损伤实验研究

研究中药归元方与自体骨髓干细胞移植对急慢性肝损伤的治疗作用。研究方法：用肝脏局部注射乙醇的方法复制急性局限性肝损伤模型，复合因素（CCl4、乙醇、高脂、低蛋白）刺激复制大鼠肝纤维化模型，通过定量组织学、肝功能检查、免疫组化、肝组织羟脯氨酸含量、损伤或纤维区骨髓干细胞观察等综合评价中药、自体骨髓干细胞移植及两者合用的疗效。结果：归元方与自体骨髓干细胞移植可减小肝损伤区域，改善肝功能，使纤维肝组织表达μPA增强，降低血清ALT，AST，PCⅢ，HA和肝组织羟脯氨酸的含量，改善肝组织肝纤维化评分，骨髓干细胞能在肝损伤、肝纤维化形成环境中存活、增殖，并向肝细胞分化，表达肝脏特异的角蛋白CK18。结论：归元方与自体骨髓干细胞移植对急慢性肝损伤有明确的治疗作用，两者合用可优势互补，协同增效。临床上有良好的应用前景。     

肝剖面标本的制备和扫描电镜观察

本文提供一种制备肝剖面扫描电镜标本的改进方法并报告应用此法研究大鼠肝脏的结果。主要的实验改进是在制备肝剖面时引入一个新的步骤:先用含EDTA的细胞分离液短时间灌流肝脏后,再进行固定和其它处理。本文方法有如下的优点:1)在肝剖面上肝细胞基本无破损,2)能完好地原位暴露肝细胞的血窦面,3)胶原纤维结构保存比较好。它特别适合于观察肝组各种成分之间的相互位置关系。我们直接观察到成纤维细胞和胶原纤维在肝细胞表面的分布情况,这可能是文献中的首次报导。     

人脐带间充质干细胞在肝部分切除模型大鼠体内向肝样细胞的分化

目的:探讨人脐带间充质干细胞(MSCs)移植到肝部分切除模型大鼠体内能否存活并分化为肝样细胞.方法:用胶原酶消化法从人的脐带分离出MSCs,培养并检测人脐带来源的MSCs的细胞表面标志.取第5代人脐带MSCs用PKH26标记,制作大鼠肝部分切除模型,将标记的细胞经门静脉植入大鼠体内,观察移植后第1、2、3周细胞能否存活,以及移植细胞能否向肝样细胞分化,表达肝细胞的标记物白蛋白.结果:人脐带MSCs能在体外大量扩增,移植到肝部分切除模型大鼠肝脏后细胞能存活,并表达肝细胞标记物白蛋白,PKH26标记后细胞在荧光显微镜下发红色荧光,荧光显微镜下可见肝脏冰冻切片中散在分布的标记细胞,免疫荧光染色大多数标记细胞白蛋白染色阳性,并发绿色荧光.结论:人脐带间充质干细胞移植至大鼠体内能够存活并分化为肝样细胞,人脐带间充质干细胞可能作为肝细胞移植的重要来源.     

大鼠胆管阻塞性肝纤维化模型的建立

目的　建立大鼠胆管阻塞性肝纤维化模型 ,为肝纤维化机制和治疗研究提供基础。方法　雌性Wistar大鼠进行胆管内逆行性注入N 丁基 2 氰基丙烯酸盐加胆管结扎导致胆管阻塞 ,建立胆管阻塞性肝纤维化模型。观察手术后第 2 8d和 5 6d不同时间相关指标的改变。结果　胆管阻塞性肝纤维化模型ALT、AST、HA、LN均明显升高 ;病理组织学可见弥漫增生的胆小管 ,大量的胶原沉积在胆小管周围 ,肝细胞与增生的胆小管相比明显减少。结论　胆管阻塞性肝纤维化模型造模周期短 ,自发逆转率低 ,肝纤维化形成稳定 ,是研究肝纤维化的理想模型     

大鼠再生肝中糖元及双核细胞变化的研究

正常大鼠肝细胞中存有大量糖元.肝大部分切除12小时后,肝糖元下降至零或仅少量。手术后24小时,肝糖元开始上升,至2l天呈现正常水平. 再生肝的双核肝细胞减少,由正常的10.6％降至5.6％.大部分肝切除21天后,双核肝细胞的百分率回升到正常水平,同时再生作用也完成.     

大鼠再生肝8种细胞的嘌呤核苷酸代谢基因转录谱预示的代谢活动

为了解大鼠肝再生中肝细胞、胆管上皮细胞、卵圆细胞、星形细胞、窦内皮细胞、库普弗细胞、陷窝细胞、树突状细胞等8种肝脏细胞的嘌呤核苷酸代谢基因转录谱及预示的代谢活动,按张丽君[1]等方法分离大鼠部分肝切除后10个恢复时间点大鼠再生肝的上述8种细胞,用RatGenome2302.0芯片等检测嘌呤核苷酸代谢基因在上述细胞中表达变化,用Excel等软件及生物信息学和系统生物学等方法分析它们的表达模式、预示的生理活动等.结果表明,85个嘌呤核苷酸代谢基因在大鼠肝再生中发生了有意义表达变化,8种细胞的相应基因数为40,43,30,42,22,26,36和48.上调、下调、上/下调的基因个数为49、11、31,相应细胞的基因数为27、20和1,31、4和1,15、7和3,12、10和0,23、15和3,19、7和2,39、3和1,33、6和0.其中,催化DNA合成的DNA聚合酶基因和催化RNA合成的RNA聚合酶基因在肝再生的多个时间点和多种细胞中表达增强,胆管上皮细胞和星形细胞的腺苷酸合成相关基因表达增强.肝细胞、卵圆细胞和星形细胞的核苷酸分解相关基因、肝细胞、星形细胞和树突状细胞的嘌呤核苷分解相关基因表达减弱.预示大鼠肝再生与嘌呤核苷酸代谢密切相关.     

肝脏干细胞研究进展

肝干细胞是一类具有自我更新能力和多项分化潜能的细胞 .在一定病理条件下可向肝细胞和胆管上皮细胞、胰腺外分泌上皮等有限的几种组织分化 ,具有多项分化增殖潜力 ,本文将就肝干细胞分类、表面标志、来源及人类肝干细胞的研究做一综述 .     

姬菇多糖对急性酒精性肝损伤小鼠的肝组织超微结构的影响

目的:研究以热水浸提法从姬菇中提取的姬菇多糖(PCNP)对酒精所致的急性损伤小鼠肝组织超微结构的影响.方法:84只小鼠被随机分为空白对照组、模型组、阳性对照组(150 mg/kg.bw)、多糖各剂量组((100、200、400)mg/kg.bw).连续灌胃30 d后,给予浓度为50%的乙醇溶液,建立动物急性肝损伤模型.12 h后,小鼠脱臼处死,取肝脏制成超薄切片,电镜观察肝组织超微结构的变化.结果:模型组细胞核的核膜不规则、呈锯齿状,线粒体畸形、嵴不清楚、糖原增多、出现空泡,内质网扩张、其膜上附着的核糖体脱失,细胞核周围脂滴数明显增多、胆管微绒毛脱失;姬菇多糖组肝细胞核膜凹凸不平,线粒体肿胀、线粒体内糖原沉积较少,内质网扩张不明显,细胞内脂滴减少.结论:姬菇多糖对酒精性肝损伤小鼠的肝细胞具有保护作用.     

虎金丸抗大鼠肝纤维化的免疫组化和超微结构观察

目的：观察虎金丸的抗肝纤维化作用及对肝纤维化的免疫组化和超微结构的影响。方法：采用ＣＣｌ４ 后腿皮下注射致大鼠肝纤维化模型。结果：模型组大鼠病理片呈肝纤维化变,ＦＳＣ增生活跃,有较大量的ＩＶ型胶原沉积。超微结构可见大量的胶原纤维生成和成纤维细胞。结论：虎金丸能明显改善上述组织形态学的变化,抑制肝纤维化的形成,改善肝细胞的超微结构。