HCV RNA复制过程中5''UTR与3''UTR 作用的初步探讨

构建具有不同类型和长度的5'非编码区(UTR)及3'UTR的丙型肝炎病毒(HCV)全长cDNA克隆,体外转录制备RNA,转染肝癌细胞HepG2,研究不同RNA转录体在细胞内的复制情况。通过RT-PCR与Westernblot等方法证明:蛋白编码区来源于1a基因型并具有1b型5'UTR及3'UTR(全长或缺失98nt保守区)的2种嵌合型HCVRNA,都可以在病毒易感细胞中复制和表达;而以脑心肌炎病毒(EMCV)内核糖体进入位点(IRES)替代HCV5'UTR的嵌合型RNA转染细胞,检测不到病毒正、负链RNA与蛋白表达。以上结果说明HCV1b型5'UTR与3'UTR可以支持1a型病毒RNA的正常复制,3'UTR保守区的存在与否,对病毒复制影响不大。     

拟南芥全基因组范围的non-polyA lncRNA检测

长非编码RNA(lncRNA)是一类长度大于200nt不编码蛋白质的RNA,它们在生物体内发挥重要的调控作用。Non-polyA lncRNA是lncRNA的一个重要类型。为系统鉴定植物全基因组范围的non-polyA lncRNA,该文优化了拟南芥基因组范围鉴定新型non-polyA lncRNA的RNA样本纯化和测序方法,并且比较了3种不同的方法。结果表明:链特异性的non-polyA RNA长序列测序检测灵敏度更高,可以检测到更多低表达的lncRNA和更高比率的长序列lncRNA。因此,non-polyA RNA长序列测序适用于拟南芥全基因组范围的non-polyA lncRNA检测。该方法也可用于其它物种中non-polyA lncRNA的鉴定,为探究lncRNA功能提供帮助。     

非编码RNA与心肌重构

非编码RNA(non-coding RNAs, ncRNAs) 是一类不编码蛋白质的RNA 分子. 相关研究表明, ncRNAs 不仅参与细胞的增殖、凋亡、分化、代谢等生理过程, 还参与疾病的病理过程. 心肌重构(myocardial remodeling)是多种心血管疾病最主要的病理基础. 已有多项研究表明, 心肌重构的发生发展与ncRNAs 的调控息息相关, 近年来针对ncRNAs 在心脏疾病方面的研究也得到了迅猛发展. 对ncRNAs 包括微小RNA(microRNAs, miRNAs)、长链非编码RNA(long non-coding RNAs, lncRNAs)和环形RNA(circular RNAs, circRNAs) 与心肌重构的最新研究进展以及作用机制进行介绍, 旨在寻找新的心脏疾病治疗靶点.     

Advances of long non-coding RNA in cancer

长链非编码RNA(lncRNA)是一类转录本长度超过200 nt(核苷酸)的非编码RNA分子,可在遗传水平、转录水平和转录后水平调控基因的表达,广泛参与机体的生理和病理过程,在恶性肿瘤的发生和发展中起着重要作用.本文简单综述了几个与肿瘤密切相关的长链非编码RNA的研究进展.     

反义RNA

1981年美国NIH的Tomizawa在细茵中发现了一种新的RNA分子,即反义RNA。反义RNA是指其核苷酸序列可以与其靶RNA(主要是mRNA)互补杂交产生双链RNA,影响靶RNA的正常加工修饰、翻译等过程,从而调控基因的表达的一类RNA分子。后来的研究均证明在原核生物中普遍存在这种RNA。1984年,Izant和Weitraub将这种RNA定义为反义RNA。随后,1986年Williams发现,在真核生物细胞中也存在自然的反义RNA。不同的     

非编码RNA调控心脏重构与再生

近年来, 越来越多的证据表明, 大量的非编码RNA(non-coding RNAs, ncRNAs)在基因的表达调控、细胞和机体的生理功能维持与病理环境调节方面都有重要作用, 其中主要包括微小RNA(microRNAs, miRNAs) 和长链非编码RNA(long non-coding RNAs, lncRNAs).心脏重构与再生是心血管疾病领域的关键问题, 其调控过程非常复杂, 包括表观遗传、转录、转录后及翻译水平的调控. 大量研究发现在转录后水平, miRNAs 通过负性调节靶标的表达调控心脏发育、疾病及再生进程. 近期研究揭示, lncRNAs 在心脏发育和疾病中具有潜在的作用, 可通过表观遗传、转录及转录后水平发挥作用. lncRNAs 已成为继miRNAs 之后的又一重要的调节性非编码RNA. 就非编码RNA 在心脏重构及再生进程中的调控作用进行综述.     

用体外转录法制备小干扰RNA抑制Hela细胞CUEDC2基因表达

CUEDC2是一个广泛表达于各种真核生物、功能尚不明确的基因.利用一种改进的体外转录方法获得包含CUEDC2基因靶序列的长链RNA,进而通过RNA酶H切割引导序列形成成熟siRNA.转染Hela细胞并进行免疫印迹检测.结果显示,运用此方法得到的siRNA能够有效地抑制细胞中内源CUEDC2的表达,此项方法为CUEDC2的深入功能分析奠定了基础.     

丹参酚酸B盐对人肝星状细胞内肌细胞增强因子2的影响

以分离和培养的人肝星状细胞（H—HSC）为研究对象,观察H—HSC是否表达肌细胞增强因子2（MEF2）且与转化生长因子B1（TGF—β1）之间的关系,进一步探讨丹参酚酸B盐（SA—B）抗肝纤维化的作用机制,分离H—HSC后,用TGF—β1刺激培养的H—HSC,通过免疫印迹分析及分别转染含有MEF2启动子和Ⅰ型胶原启动子的luciferase报道基因质粒入H—HSC,检测荧光素酶活性,观察经SA—B干预后MEF2,α-平滑肌肌动蛋白（α—SMA）及Ⅰ型胶原表达的变化．结果显示H—HSC能够表达MEF2,且随H—HSC的活化而增加;经TGF—β1刺激的H—HSC内α—SMA的表达、Ⅰ型胶原启动子的活性和Ⅰ型胶原蛋白的生成均明显增强,同时MEF2启动子的活性和MEF2A和MEF2C的蛋白表达也明显增强;SA—B对以上这些物质的表达均有明显的抑制作用．上述结果说明MEF2参与了肝纤维化的形成,SA—B抑制H—HSC活化的作用与其抑制TGF-B1在H—HSC内的信号传导与抑制转录因子MEF2A和MEF2C的表达有关．     

人PSF蛋白结合长非编码RNA的筛选及鉴定

通过RNA亲和层析（RNA affinity chromatograph）,4种可能与人PSF（human polypyrimidine tractbinding proteinassociated splicing factor,hPSF）蛋白结合的长非编码RNA（long noncoding RNA,lncRNA）片段在人黑色素瘤细胞yusac细胞核RNA文库中被筛选得到. 它们分别定位于人内源性逆转座子L1PA16、MER11C、非编码基因MALAT1以及一个未知基因(unknown g     

HCV全长cDNA细胞培养适应性突变体的构建及其体外转录制备感染性RNA的研究

运用重叠延伸PCR方法对HCV全长基因组cDNANS3和NS5A上的E1202G、T1280I和S2197P进行细胞培养适应性突变，构建含有细胞培养适应性突变的HCV全长基因组cDNA，体外转录制备RNA，脂质体法转染人肝癌细胞Huh-7，以RT-PCR检测HCV正、负链RNA，间接免疫荧光法和Western blot检测细胞内HCVNS3蛋白的表达。结果证明，转染后细胞内可间断检测到HCV正、负链RNA及HCVNS3蛋白的表达，且突变体RNA与未突变的HCVRNA相比，明显具有更高的复制效率和蛋白表达。该研究为后续HCV体外培养体系的研究提供了可在细胞内高效自主复制的HCV病毒模板。     

Effects of CIITA antisense RNA on the expression of HLA class II molecules

To study the effect of the major histocompatibility complex class II (MHC II) transactivator (CIITA) antisense RNA on the expression of the human leukemia (HLA) class II molecules, 5′ end cDNA sequence of CIITA gene was cloned, and antisense RNA expression vector pcDNA-II was constructed. HeLa cells transfected with pcDNA-II and pcDNA3 were induced by IFN-γ for 3 d. The expression of HLA class II molecules on HeLa/pcDNA-II cells was significantly decreased, while it has no effect on the expression of HLA class I molecules. This result suggests that the CIITA antisense RNA can inhibit the expression of HLA class II molecules in HeLa cells. It also implies a promising approach to generate immune tolerance in graft transplantation.     

反义RNA技术及其在农业领域的应用

介绍了反义RNA的概念及作用机理，对反义RNA技术及其在农业领域的应用进行了概述．反义RNA技术是借助基因重组技术，根据碱基互补原理，用人工合成或生物体合成的特定RNA片段（或其化学修饰物）抑制或封闭基因表达的技术。在农业领域反义RNA技术主要应用于果实性状及品质的调控，对观赏植物性状的调控，植物抗病，控制油料种子中脂肪酸的合成，控制雄性不育，降低或去除食物中有害化学成分等方面其功能获得可靠的成效．     

Identification and functional analysis of a novel box C／D snoRNA from Schizosaccharomyces pombe

By constructing and screening the Schizosaccharomyces pombe nuclear cDNA library, a novel small nucleolar RNAs (snoRNA) was identified. The novel snoRNA displays structural features typical of C/D box snoRNA family and possesses a 10-nt-long rRNA antisense element which is predicted to guide the 2‘-O-methylation of the fission yeast 25S rRNA at G940. As expected, the rRNA ribose-methyla- tion site predicted by the novel snoRNA was precisely mapped by a deoxynucleoside triphosphate concentration-dependent primer extension assay. The comparison of functional element of guide snoRNAs among eukaryotes reveals that the novel snoRNA is a partial counterpart of the budding yeast snR60 and was termed snR60-11, snR60-Ⅱ gene nested in the intron of a non-coding RNA gene with an unknown function, which is the first example of a yeast snoRNA encoded in an intron of a non-coding RNA gene. Furthermore, a number of yeast snR60 homologues were also identified from other fungi and fly. Our results reveal that snR60 exhibits diverse genomic organization in eukaryotes, implying the high mobility of snR60 gene in the course of evolution.     

siRNA对肺癌细胞株NCI-H460 bcl-2基因表达的影响

目的:研究siRNA (smallinterferenceRNA)对大细胞肺癌细胞株NCI -H4 6 0bcl- 2基因表达的影响。方法:利用Ambion公司提供的设计软件和试剂盒,设计合成以bcl - 2基因为靶标的siRNA ,通过脂质体将合成的siRNA转入NCI-H4 6 0细胞株,设置转染bcl- 2反义药物G3139和空白两对照组。用MTT法检测siRNA对细胞生长的作用;流式细胞仪检测细胞周期的改变和Bcl- 2蛋白表达;RT -PCR检测bcl- 2mRNA水平。结果:siRNA组与对照组细胞存活率均有显著性差异(P <0 0 5 ) ;siRNA组bcl- 2的mRNA明显低于对照组和反义组(P <0 0 5 ) ;siRNA组Bcl- 2蛋白阳性率明显低于对照组和反义组,siRNA组以及反义组细胞阻滞于S期。结论:体外转录合成的siRNA可抑制NCI-H4 6 0细胞bcl- 2基因的表达,抑制率可达5 0 %以上。     

RNA干涉研究进展

RNA干涉(RNAi)是生物体内的一种通过双链RNA(dsRNA)来抵抗病毒入侵和抑制转座 子活动的自然机制.快速发展的RNAi技术为抑制特异性基因的表达提供了有利的工具.到目前为 止,在真菌、拟南芥、线虫、锥虫、水螅、涡虫、果蝇、斑马鱼、小鼠等真核生物中都发现存在基因沉默 机制.RNAi作为基因沉默的工具,为基因功能研究、基因治疗、药物研究与开发等许多领域开辟了 一条新路.     

cdk2反义RNA对乳腺癌细胞增殖及致瘤性的抑制作用

为了研究cdk2对乳腺癌细胞生长及cyclinA,cyclinB1和ckdl（cdc2)mRNA表达水平的影响,利用直接表达载体p XJ41-neo构建了表达cdk2反义RNA的重组载体,并用此载体转染了人乳腺癌细胞系Bcap37,获得了ckd2受到抑制的细胞模型Bcap37-CDK2AS,然后将Bcap37-CDK2AS细胞的生长能力及cyclinA,cyclinB1和cdk1 mRNA折水平与转入空载体的对照细胞进行了对比分析,结果显示,cdk2表达受到抑制时,细胞生长速率下降,根据测定出的细胞生长曲线,细胞培养至第7天时,细胞生长抑制率为64％,在流式细胞术的分析结果中,G1期细胞中的百分比从39％增加到47％,S期细胞由51％下降到39％,裸鼠接种的实验表明,Bcap37－CDK2AS的致瘤性明显减弱,在对cyclinA,cyclinB1和cdk1mRNA折分析中发现,Bcap37－CDK2AS中这3种基因的mRAN水平均有不同程度的下降,依据这些结果可以推测,ckd2反义RNA可使乳腺癌细胞生长及致瘤性受到抑制,并且cdk2表达的抑制将cyclinA,cyclinB和cdk14的表达水平。