蛋白酶水解骨素的对比及其优化研究

选取木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、风味蛋白酶分别对骨素进行酶解,对比了几种酶解液的苦味和水解度.结果表明:风味蛋白酶最适合酶解骨蛋白,其水解产物鲜味明显,无明显苦味;木瓜蛋白酶水解骨蛋白效果最差,其水解产物苦味最为明显;中性蛋白酶水解效果介于风味蛋白酶和木瓜蛋白酶之间.风味蛋白酶水解骨蛋白的最佳酶解条件为:温度50℃,加酶量6 000 U/g底物蛋白,p H值为7.0,酶解时间2 h,料液比1∶5(g/m L),在此条件下其水解度可达34.80%.     

酶解鱿鱼蛋白的制备

探讨了中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、风味蛋白、酶菠萝蛋白酶以及复合蛋白酶对鱿鱼蛋白的酶解效果.实验结果表明,在相同水解条件下,复合酶对鱿鱼蛋白的水解效果优于单酶,确定了木瓜蛋白酶和中性蛋白酶为水解鱿鱼蛋白的适宜水解酶,两种酶量的比例为1:1,正交实验得出最佳水解条件为:温度50℃、pH7、时间8 h、加酶量6 000IU/g.     

双酶联用水解豆奶蛋白

以大豆为原料,利用木瓜蛋白酶、风味蛋白酶单独和联用对豆奶进行水解,通过测定氨基氮的含量确定酶反应的最佳条件。单因素试验和正交试验分析的结果表明:木瓜蛋白酶和风味蛋白酶联用水解豆奶蛋白比单独使用效果好,最佳水解条件为料液比1∶10,加入等比混合的6000 U/L木瓜蛋白酶和6000 U/L风味蛋白酶,酶解温度60℃,时间6 h,控制pH值7.0。在此条件下,豆奶中蛋白质的水解程度最高,水解液中氨基氮含量高,且水解物苦味减少。     

复合酶水解蚯蚓蛋白的研究

蚯蚓是一种富含蛋白质的功能性生物资源,为提高蚯蚓蛋白水解度,对水解蚯蚓复合酶配比进行优化,并建立复合酶配比优化回归方程模型;采用U30(3013)均匀设计试验对复合酶(木瓜蛋白酶、酸性蛋白酶、菠萝蛋白酶)配比进行设计,以蚯蚓蛋白水解度为指标,筛选出水解度最高的复合酶配比;结果表明,配比优化回归方程为:Y=58.975+8.270x_2+12.256x_1x_2x_3+7.677x_1x_3-5.243x_2~2,回归方程高度显著(P 0.05);分析预测最佳配比为:木瓜蛋白酶23.2%、酸性蛋白酶53.7%、菠萝蛋白酶23.1%,模型预测最大水解度为62.60%,实际验证水解度为(62.84±0.21)%,高于试验组与模型预测值说明配比优化后的复合酶可提高酶解效率并为蚯蚓蛋白酶解工艺提供参考。     

木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶水解制备绿豆多肽

用木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶顺序水解的方法制备绿豆多肽: 先对水解体系的pH值、 碱性蛋白酶与绿豆分离蛋白的质量比（E/S比）、 水解温度、 绿豆分离蛋白质量分数进行单因素实验; 再在单因素实验基础上, 采用4因素3水平正交实验设计优化碱性蛋白酶水解条件. 获得最佳水解条件为： 绿豆分离蛋白的质量分数为8%, 水解温度为55 ℃, E/S比为8%, pH=9.0. 在最佳顺序水解条件下, 绿豆分离蛋白的水解度达32.58%.     

无花果蛋白酶与木瓜蛋白酶酶学性质的比较

比较了无花果蛋白酶和木瓜蛋白酶的部分酶学性质, 二者均为巯基蛋白酶类, 且水解底物相似. 实验结果表明, 无花果蛋白酶比木瓜蛋白酶的适用性更广, 两者在反应温度范围上各有优点, 无花果蛋白酶的适宜pH值范围大于木瓜蛋白酶的适宜pH值范围; 在对底物的亲合性上, 无花果蛋白酶明显高于木瓜蛋白酶.     

鸡肉蛋白水解液的研究

用酶水解鸡肉 ,通过单因素实验确定胰蛋白酶 1、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、酸性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰酶 2、胃蛋白酶水解鸡肉的最适条件 ,并确定在它们的最适条件下 ,胰蛋白酶和木瓜蛋白酶是单酶水解较好的酶。在双酶水解中 ,发现胰蛋白酶 1与酸性蛋白酶在各自最适条件下组合水解鸡肉水解率最高 ,进一步确定双酶水解的条件为胰蛋白酶先在 5 0℃ ,p H8.5 ,加酶量 40 0 0 U/ g蛋白质 ,固液比 1∶ 4,水解 3h,后酸性蛋白酶在 45℃ ,p H2 .5 ,加酶量 40 0 0 U/ g蛋白质水解 2 h。在这种组合下酶解 ,水解产物的水解度为 40 .5 % ,蛋白回收率为 81.0 %     

紫贻贝多糖酶法制备工艺研究

用木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶分别提取紫贻贝粗多糖,以及木瓜蛋白酶和中性蛋白酶复合酶提紫贻贝粗多糖,木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶复合酶提紫贻贝粗多糖。并分析研究加酶量、料液比、pH和温度对紫贻贝提取率的影响。结果显示:木瓜蛋白酶最佳加酶量1%,料液比1:15 g/m L,pH为7,温度为60℃。提取率为6.65%。中性蛋白酶最佳为加酶量2%,料液比1:15 g/m L,pH为7,温度为50℃,提取率为5.52%。碱性蛋白酶最佳加酶量为2%,料液比1:15 g/m L,pH为10,温度为50℃,提取率为6.89%。木瓜蛋白酶与中性蛋白酶两步联合酶提取最佳提取条件为加酶量1%,料液比1:20 g/m L,pH为7,温度为50℃,此条件下提取率为6.86%。木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶两步联合酶提最佳提取条件为加酶量1%,料液比1:20 g/m L,木瓜蛋白酶缓冲液pH为7,碱性蛋白酶缓冲液pH为10,温度为50℃,此条件下提取率为7.27%。     

尖吻蝮蛇毒不同蛋白酶水解物的制备及抗氧化活性研究

【目的】研究尖吻蝮(Deinagkistrodon acutus)蛇毒的不同蛋白酶水解产物的制备及抗氧化活性。【方法】分别用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶水解尖吻蝮蛇毒,以水解物的水解度、清除自由基活性、金属离子螯合能力和总还原力作为抗氧化活性比较指标来选出最佳水解蛋白酶,并比较该蛋白酶水解物在超滤后得到的不同分子量组分的抗氧化活性大小。【结果】碱性蛋白酶水解物的清除DPPH自由基活性、亚铁离子螯合能力和总还原力均为最佳;该酶解物经超滤得到的3个组分中,分子量为3～10kDa的组分对DPPH自由基和羟基自由基清除能力最强,分子量大于10kDa的组分的亚铁离子螯合能力和总还原力最强。【结论】尖吻蝮蛇毒的不同蛋白酶水解物均具有抗氧化活性,其中用碱性蛋白酶水解物抗氧化活性较强。     

酶法水解乳清蛋白过程的优化

以浓缩乳清蛋白为原料，选择碱性蛋白酶（Alcalase）水解乳清蛋白。分析了pH、温度、酶和底物比（E／S）和反应时间等因素对乳清蛋白水解的影响。通过响应面法分析，确定了碱性蛋白酶（Alcalase）酶解乳清蛋白的最佳水解条件为：pH8．5、反应温度55℃、酶和底物比0．05。水解3．0h，水解度为19．34％。     

高产胞外蛋白酶毛霉的筛选及酶学性质研究

通过平板初筛和发酵复筛从保藏的16种毛霉菌株中筛选出了四株高产胞外蛋白酶毛霉菌株,分别为3.4906、3.4909、3.4943和3.5009。筛选过程中发现平板筛选法用于毛霉筛选不易观察,需改进方法,发酵法仍是最直接有效筛选的方法。对四株毛霉所产蛋白酶酶学特性研究发现,在温度耐受性方面,3.4943和3.4906的蛋白酶耐温性强;在反应温度方面,3.4906和3.5009的最适反应温度较低,3.4943和3.4909的最适反应温度较高;在反应p H方面,4种毛霉所产蛋白酶的最适p H在6.0~8.0范围;在受Na Cl浓度影响方面,3.4943的酶活力受Nacl浓度影响较大,3.4909的酶活力受Na Cl浓度影响最小。各菌株的酶学特性存在差异,根据发酵食品的工艺特性选择适宜的菌株。     

Crystal structure of a retroviral protease proves relationship to aspartic protease family

Retroviral gag, pol and env gene products are translated as precursor polyproteins, which are cleaved by virus-encoded proteases to produce the mature proteins found in virions. On the basis of the conserved Asp-Thr/Ser-Gly sequence at the putative protease active sites, and other biochemical evidence, retroviral proteases have been predicted to be in the family of pepsin-like aspartic proteases. It has been suggested that aspartic proteases evolved from a smaller, dimeric ancestral protein, and a recent model of the human immunodeficiency virus (HIV) protease postulated that a symmetric dimer of this enzyme is equivalent to a pepsin-like aspartic protease. We have now determined the crystal structure of Rous sarcoma virus (RSV) protease at 3-A resolution and find it is dimeric and has a structure similar to aspartic proteases. This structure should provide a useful basis for the modelling of the structures of other retroviral proteases, such as that of HIV, and also for the rational design of protease inhibitors as potential antiviral drugs.     

纳豆菌特性的研究

筛选具有强溶栓活性等多种生物学功能的纳豆菌,并对其形态、生长特性等进行研究。分离出单菌落,进行菌种鉴定,并在不同条件下用测菌悬液吸光度的方法研究其生长特性。经菌落形态、菌体形态以及生理生化特性鉴定确定为枯草杆菌。该菌种在种子培养基中生长的最适pH值为6.0～8.0,生长温度为30～45℃,耐盐性较高,在含7%以下NaCl的盐溶液中均能生长。纳豆菌的生长条件适宜于下一步产纳豆激酶的研究。     

一株产碱性蛋白酶菌株的分离与鉴定

从黄石市土壤中分离到一株产碱性蛋白酶的革兰氏阴性杆菌,不产芽抱,具美膜．能在ｐＨ９－１１条件下生长、产酶．产酶最适ｐＨ值为９,最适温度为３７℃,适发酵时间为３６ｈ．发酵产酶量为４５．０Ｕ·ｍＬ－１根据实验结果,该菌株鉴定为毛状假单抱菌Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｌａｓｉａ．     

酶解章鱼下脚料的产物分析

为了提高下脚料的综合利用率,用4种商业蛋白酶对章鱼下脚料进行水解,并初步分析检测产物中的氨基酸和抗氧化多肽.实验结果表明:动物蛋白酶水解液中的复合氨基酸获取率占总氨基酸的57.12%,达到57.12%;而4种蛋白酶水解产物中肽类物质的·OH清除力IC50均小于1.28 mg·mL^-1,Fe²⁺螯合力IC50均小于2.82 mg·mL^-1,还原力随多肽质量浓度增加而提升;这种工艺条件和方法可以同时获取两类活性物质(复合氨基酸、抗氧化性多肽),     

产蛋白酶菌株Bacillus subtilis GS-1发酵条件优化及蛋白酶水解应用初步研究

 利用Plackett-Burman (PB)试验和相应面优化方法对枯草杆菌GS-1菌株发酵产蛋白酶的条件进行优化,以期获得高活性的蛋白酶发酵液。同时,将发酵所产蛋白酶用于蛋白水解实验,以进一步考察蛋白酶的水解特性。首先,通过PB试验,筛选出3个影响菌株发酵过程中蛋白酶活力的主要因子(氯化铵、初始pH值及培养温度)。其次,通过响应面优化法,进一步探讨各参数之间的相互关系并最终拟合得出发酵产酶活的方程。结果表明,在氯化铵 (3.768 g/L), 初始pH (5.6) 以及培养温度 22.4 ℃的条件下,发酵液中蛋白酶的最高酶活力能达到372.814 U/mL。水解试验结果表明：相对于植物来源的蛋白,该蛋白酶粗提物对于动物来源的蛋白具有较大的水解偏好型。该蛋白酶粗提物对于由谷氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸或精氨酸所组成的化学键有较强的水解偏好性。以上结果表明：该菌株发酵所产的蛋白酶在蛋白水解加工行业中具有潜在的开发应用价值。     

嗜热菌Lon蛋白酶的功能分析

Lon蛋白酶是一种在各种生物体内广泛分布并且具有多种生物功能的蛋白质.以嗜热栖热菌（Thermus thermophilus HB8）的Lon蛋白酶（TTLon）为研究对象,将TTLon蛋白酶的编码基因克隆至pTrc His载体,并在大肠杆菌中进行了成功表达,采用Ni-NTA亲和层析对其进行分离纯化,并通过一系列实验证明Lon蛋白酶能够与ATP结合,具有依赖ATP的蛋白酶活性和依赖ATP的分子伴侣活性.     

微藻生物质暗发酵产氢气和甲烷的研究

微藻生物质厌氧消化生产氢气和甲烷效率低下,本研究报道了一种新型微藻处理工艺即两段式暗发酵提高氢气和甲烷产量。结果表明微藻生物质的最佳有机负荷为10 g/L,相应的氢气产量为18.6 mL/g (每克挥发性有机质产气量)。进一步研究表明蛋白酶预处理能进一步提高水解酸化相中氢气的产量至35.5 mL/g,反应pH最低为6.0。同时,蛋白酶预处理能够提高产甲烷相中甲烷产量,并且最大产量为251 mL/g,显著高于空白对照组。机理研究表明两段式消化分别为水解酸化相和产甲烷相提供最佳环境。     

离子对深海适冷菌Pseudoalteromonas sp. SM9913胞外蛋白酶分泌的影响

以海水产酶发酵培养基为对照，研究了多种离子对P. sp. SM9913 胞外蛋白酶分泌的影响. 结果表明，淡水培养基添加NaCl浓度越高，胞外蛋白酶的酶活也越高. K+、Ca2+、磷酸盐的协同作用促进胞外蛋白酶的分泌. Mg2+能够明显抑制胞外蛋白酶的分泌. Fe3＋对胞外蛋白酶分泌影响不明显.Sr2+、F-、B-这3种离子单独作用时都能促进胞外蛋白酶的分泌；但是这3种离子协同作用劣于单独作用. 实验浓度下上述多种离子协同作用可明显促进胞外蛋白酶的分泌. 该研究为深海适冷菌P. sp. SM9913 的淡水化培养和进一步研究胞外蛋白酶的分泌机制奠定了基础.     

Three-dimensional structure of aspartyl protease from human immunodeficiency virus HIV-1

The crystal structure of the protease of the human immunodeficiency virus type (HIV-1), which releases structural proteins and enzymes from viral polyprotein products, has been determined to 3 A resolution. Large regions of the protease dimer, including the active site, have structural homology to the family of microbial aspartyl proteases. The structure suggests a mechanism for the autoproteolytic release of protease and a role in the control of virus maturation.