高等真核细胞受极低频磁场作用后特异反应基因的克隆及鉴定

极低频磁场（ＥＬＦ ＭＦ）生物学效应的机理研究是当前生物电磁学中迫切需要解决的问题．为探索 ＥＬＦ ＭＦ的特异反应基因及这些基因的结构与功能,用 ｍＲＮＡ差异显示技术（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｄｉｓｐｌａｙ, ＤＤ）对受ＥＬＦ ＭＦ辐照与假辐照的Ｄａｕｄｉ细胞内的ｍＲＮＡ进行了检测,筛选到一个受ＥＬＦ ＭＦ诱导表达的ＤＤ片段（＞１ｋｂ）,反向Ｎｏｒｔｈｅｒｎ及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ鉴定进一步证实系磁场诱导所致．经克隆测序及与ＧｅｎｅＢａｎｋ同源性比较表明该基因片段（ＭＦ－ＣＡ）是人细胞中新发现的受磁场诱导的反应基因。     

小鼠胸腺上皮细胞株MTEC1表达的化学趋化因子的类型分析

以自行设计的引物用ＲＴ－ＰＣＲ方法从小鼠胸腺上皮细胞株ＭＴＥＣ１的总ＲＮＡ中扩增出了ＳＤＦ－１α,ＩＰ－同和Ｌｙｍｐｈｏｔａｃｔｉｎ等６种化学趋化因子的ｃＤＮＡ片段,对扩增片段进行了酸测序鉴定,Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交分析结果显示;ＳＤＦ－１ｍＲＮＡ在ＭＴＥＣ１细胞株中存在两种不同的剪切形式,ＭＴＥＣ１的浓缩培养上清对小鼠胸腺ＣＤ＾４－ＣＤ＾８Ｔ细胞具有中等强度的趋化活性,符合ＳＤＦ－１的生物学功能。     

水分胁迫诱导表达的小麦基因的cDNA片段克隆和序列分析

以３０％（－１．３１ＭＰａ）ＰＥＧ－６０００对小麦幼苗进行重度水分胁迫处理,利用ｍＲＮＡ差异显示技术分离了水分胁迫诱导表达的小麦基因ｄｉｌｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎ ｉｎｄｕｃｅｄ,ｄｉ１）的ｃＤＮＡ片段,Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ分析表明,ｄｉ１基因在水分胁迫１０ｈ后表达开始增强并随着水分胁迫时间的延长而增强,水分胁迫４８ｈ时其表达最强。对ｄｉｌ基因的ｃＤＮＡ片段进行了克隆和序列测定（２１１ｂｐ）     

边界元法与广义Langevin动力学相结合的模拟方法

提出了将水化力加到广义Ｌａｎｇｅｖｉｎ方程中的新的模拟方法（ＧＬＤＢＥＭ）。水化力通过边界元方法（ＢＥＭ）求出,包括溶质分子与表面诱导电荷的Ｃｏｕｌｏｍｂ相互作用和溶剂对分子表面的压力,摩擦记忆函数采用指数模型。以环苞霉素Ａ（ＣＰＡ）为研究对象,并将ＧＬＤＢＥＭ模拟结果与分子动力学（ＭＤ）模拟和通常的随机动力学（ＳＤ）模拟结果作了比较。结果表明ＧＬＤＢＥＭ模拟方法对研究分子的结构和动力学性质均比Ｓ     

羰基钴催化乙基迁移反应机理的从头算研究

采用有效核势能进行（ＥＣＰ）从头算方法,研究了羰基钴催化的氢化反应循环中的乙基迁移反应机理,在ＨＦ／ＬＡＮＬ２ＤＺ水平优化得到了反应基态势能面的反应物,过渡态和产物的几何构型、对反应位能剖面的各驻点进行了ＭＰ２／ＬＡＮＬ２ＤＺ／ＬＡＮＬ２ＤＺ相关能校准和零点能校准,理论计算结果表明,乙基迁移反应是经过一个三元环过渡态而进行的,反应位垒力２８．８９ｋＪ／ｍｏｌ（ＭＰ２／ＬＡＮＬ２ＤＺ／ＬＡＮＬ２ＤＺ     

小麦黄花叶病毒72ku蛋白在大肠杆菌中的表达及其抗血清制备

采用逆转录－ＰＣＲ方法,扩增获得小麦黄花叶病毒（ＷＹＭＶ）ＲＮＡ２上的７２ｋｕ蛋白基因,将其克隆到ｐＥＴ３０ａ（＋）上,构建了该基因的原核表达载体ｐＥＴＰ７２。ＳＤＳ－ＲＡＧＥ分析结果显示,经ＩＰＴＧ诱导,７２ｋｕ蛋白基因在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ中得到高效表达。以含表达产物的凝胶作为抗原,免疫家兔,首次制备了小麦黄花叶病毒ＲＮＡ２７２ｋｕ蛋白特异性抗血清。     

DPH2L基因在细胞分化/凋亡中的降调节——mRNA差异显示的应用

为鉴定维甲酸诱导的人肺癌细胞分化／凋亡相关基因,采用ｍＲＮＡ差异显示的方法对全反式维甲酸处理前后的人肺腺癌细胞系ＧＬＣ８２的ｍＲＮＡ表达模式进行了分析。６个ｃＤＮＡ片段被分离和克隆。其中１个对就于序列已知而功能未知的ＤＰＨ２Ｌ基因。该基因的２．３ｋｂ全长ｃＤＮＡ最初是从人卵巢癌的关键缺失位点１７ｐ１３．３上分离出来,并被认为是一个候选的肿瘤抑制基因。结果显示ＤＰＨ２Ｌ是一个广泛的基因,除已报道的２     

VK3诱导的植物细胞凋亡及其机理

ＶＫ３可诱导烟草细胞的凋亡,表现为：染化体凝集,凋亡小体形成,ＤＮＡ末端断裂、降解形成梯状电泳,此过程伴随特异核酸酶的激活,其活性依赖于Ｃａ＾２＋,Ｍｇ＾２＋,可被Ｚｎ＾２＋和ＥＤＴＡ（Ｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅｔｅｔｒａａｃｅｔｉｃ）抑制。ＤＮＡ降解可被ＤＥＶＤ（Ａｃ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ａｓｐ－ａｌｄｅｈｙｄｅ）抑制。核纤层蛋白降解为３５ｋｕ片段,ＤＥＶＤ,ＰＭＳＦ（Ｐｈｅｎｙｌｍｅｔ     

巨噬细胞集落刺激因子受体的配基结合区的分析

从人胎盘中提取总ＲＮＡ〈利用ＲＴ－ＰＣＲ技术分别扩增巨巨噬细胞集落刺激因子受体（Ｍ－ＣＳＦＲ）胞外区的Ｄ１－３,Ｄ２－３和Ｄ３功能区,并在大肠杆菌中成功夺表达了各相应的重组蛋白,酶联免疫吸附分析（ＥＩＡ）证明重组Ｄ１－３结合Ｍ－牟能力是重组Ｄ２－３的３倍,前者的Ｋｄ为１１ｎｍｏｌ／Ｌ后者的为３９ｎｍｏｌ／Ｌ,而重组的Ｄ３则完全没有结合能力,这些数据提示Ｄ２－３是与其配基结合的主体位点,Ｄ１为其配基     

DREB转录因子在提高植物抗逆性中的作用

拟南芥ｒｄ２９Ａ基因编码一种与ＬＥＡ蛋白相似的亲水性很强的蛋白,该基因的表达受干旱、高盐及低温的诱导、ｒｄ２９Ａ基因启动子区域中的有两个与上述环境胁迫应答有关的ＤＲＥ顺式作用元件,利用ｒｄ２９Ａ基因启动子的ＤＲＥ顺式作用元件和酵母Ｏｎｅ－Ｈｙｂｒｉｄ方法,两类与ＤＲＥ元件特异结合,在低温或干旱、调卤胁迫条件下调控报道基因表达的南芥ＤＲＥＢ转录因子被克隆及鉴定,分别定名为ＤＲＥＢ１Ａ￣Ｃ和ＤＲＥＢ２     

与水稻光敏核不育性相关的cDNA片段的鉴定和染色体定位

对利用ｃＤＮＡ－ＲＡＰＤ技术获得的光敏核不育水稻可育和不育幼穗ｍＲＮＡ差异表达的ｃＤＮＡ片段进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交鉴定,获得１个与光敏核不育性相关的阳性片段ＲＰＧ４３。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交及相应的ＲＡＰＤ分析表明,ＲＰＧ４３为单拷贝序列,是转录后的加工产物。序列分析表明,ＲＰＧ４３长度为７４４ｂｐ,其中第１２６～１８５的６０个碱基与人类１１号染色体的ｐａｃ ｐＤＪ３５６ｄ６ ＤＮＡ序列有７２％的     

EPO激活HEL细胞内CREB转录因子

ＣＲＥＢ（ｃＡＭＰｒｅｓｐｏｎｓｅｅｌｅｍｅｎｌｔｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ）是一种细胞核内转录因子,激活的ＣＲＥＢ能与特异调控元件ＣＲＥ（ｃＡＭＰｒｅｓｐｏｎｓｅｅｌｅｍｅｎｔ）结合研究结果显示,ＥＰＯ（Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｎｔｉｎ）诱导ＨＥＬ细胞（ＵＭＡＮＥＲＹＴＨＲＯＬＥＵＫＥＭＩＡＣＥＬＬ）２０ｍｉｎ后分子筛的ＨＥＬ细胞核内ＣＲＥＢ的１３３位丝氨酸残基被磷酸化,并具有转录因子功能,用１３     

乙烯在3种沸石中极化和扩散的分子动力学(MD)模拟

用分子动力学（ＭＤ）方法模拟研究了３００Ｋ下乙烯在正交ＭＥＩ,单斜ＭＦＩ以及Ｈ（Ａｌ）ＺＳＭ－５中的吸附,极化和扩散行为。结果表明,乙烯与正交ＭＦＩ的作用最强;在正交ＭＦＩ中乙烯具有相对较低的总能量。在Ｈ（Ａｌ）ＸＳＭ－５中铝和Ｂ酸质子的存在有利于降低乙烯分子的能量,在孔道交叉部位的边界处特别是铝址附近,乙烯分子受极化较大,偶极矩增高。乙烯分子出现在孔道交叉部位的几率最大。在上述３种晶系中乙烯的簇     

人δ珠蛋白基因启动子区-64位C→T点突变对DNA结合蛋白的影响

用凝胶迁移改变实验研究了人δ珠蛋白基因启动子区－６４Ｃ→Ｔ点突变对ＤＮＡ结合蛋白的影响,人工合成两条３６ｂｐ该基因启动子区－８３－－４８ｂｐ之间的片段ＷＯＧ和ＭＯＧ,ＷＯＧ含有野生型“ＣＡＡＴ样盒”以及,ＭＯＧ含有变异型“ＣＡＡＴ样盒”。结果表明：（１）在红系细胞ＭＥＬ,ｋ５６２以及经Ｈｅｍｉｎ诱导的ｋ５６２细胞中,ＭＧ对ＣＣＡＡＴ结合蛋白和ＧＡＴＡ－１的要和力显著增加;（２）经Ｈｅｍｉｎ诱导的ｋ     

神经再生过程中脊髓腹角运动神经元神经丝蛋白基因的表达

用原位杂交法观察了大鼠坐骨神经损伤后脊髓Ｌ４－６腹角运动神经元中神经丝蛋白亚基基因的表达。光学显微镜下显示轴突损伤后脊髓腹角运动神经元内每个神经丝蛋白亚基ｍＲＮＡ的杂交信号明显减弱。神经丝蛋白－Ｌ和Ｍ－ｍＲＮＡ的杂交信号仅见于脊髓运动上元胞浆中,而神经元的胞核及胞浆内均有神经丝蛋白－Ｈ ｍＲＮＡ的表达。图象分析结果表明,损伤后３损伤侧腹角运动神结凶内神经丝蛋白－Ｌ －Ｍ和－Ｈ ｍＲＮＡ含量明显减少     

沙冬青抗冻蛋白的分离、纯化及其理化特性分析

用ＤＥＡＥ－纤维素ＤＥ－５２,丙烯葡聚糖Ｓ３００柱层析,热处理及等速电泳技术分离纯化了热稳定的冬季沙冬青叶片抗冻蛋白（ＡＦＰ）,获得了电泳纯的分子量约为５０ｋｕ的ＡＦＰ,经Ｓｈｉｆｆ试剂检验为含糖的ＡＦＧＰ,显微镜观察冰点熔点差异技术和差示扫描量热法（ＤＳＣ）测定了该蛋白热滞活性（ＴＨＡ）,用ＤＳＣ测定ＴＨＡ在５ｍｇ／ｍＬ时约为０．３５℃．圆二色性（ＣＤ）分析表明,该ＡＦＧＰ中ａ－螺旋为１１％,反     

数据包络分析(DEA)

数据包络分析（简称ＤＥＡ）是运筹学、管理科学和数理经济学交叉研究的一个新的领域,是使用数学规划评价具有多个输入与输出的决策单元（简记为ＤＭＵ）间的相对有效性（ＤＥＡ有效）,即判断ＤＭＵ是否位于生产可能集的“前沿面”上。使用ＤＥＡ对ＤＭＵ进行效率评价时,可以得到很多在经济学中具有深刻经济含义和背景的管理信息。介绍ＤＥＡ研究的历史、现状,特别是它的发展过程,同时对某些模型作了扩展。阐述了数学、经济学和     

人β-簇珠蛋白基因上游远侧端调控元件与GATA转录因子结合模式

用羟基脲诱导ＨＥＬ细胞,将诱导前后细胞核内蛋白质因子与人β－类珠蛋白基因ＬＣＲ调控元件内ＤＮａｓｅⅠ超敏感点Ⅲ和Ⅳ核心ＤＮＡ序列（ＨＳ３－１４７１６－－１４９９１ＢＰ和ＨＳ４－１８３０６－１８５８６ＢＰ）的结合模式进行了分析,Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析结果表明,随着羟基脲诱导ＨＥＬ细胞时间的延长,细胞核内ＧＡＴＡ－２的含暧渐减少;与之相反,ＧＡＴＡ－１的含量却随着诱导的时间而增加。结合竞争性ＥＭＳ     

离子束介导转基因提高E.coli UV敏感菌株的DNA损伤修复能力

以氯化钙制备感受态受体细胞转移法为对照,用离子束介导基因转移技术,将具有高效ＤＮＡ损伤修复系统的耐辐射异常球菌（Ｄ．ｒａｄｉｏｄｕｒａｎｓ ＡＳ１．６３３）的基因组ＤＮＡ片段,转入对紫外（ＵＶ）辐照敏感的大肠杆菌中。结果表明,转入ＤＮＡ后的菌株对ＵＶ辐射的抗性不仅高于其对应的敏感菌株,而且也高于其对应的敏感菌株的产生菌株,表现为转入ＤＮＡ后的菌株受紫外辐照的存活率明显提高,代表修复合成的非按期ＤＮ     

耐旱植物厚叶旋蒴苣苔BDN1脱水素基因的克隆及表达特性分析

根据已知植物脱水素基因保守区域设计引物,采用ＲＴ－ＰＣＲ方法从耐旱植物厚叶旋蒴苣苔的总ｃＤＮＡ中扩增出一个５００ｂｐ的与植物脱水素基因同源的序列。结合５’ＲＡＣＥ获得了植物脱水素基因家族一个新成员ＢＤＮ１的全长ｃＤＮＡ（１１４８ｂｐ）。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析表明,ＢＤＮ１基因在厚叶旋蒴苣苔基因组中以单拷贝形式存在,Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交结果表明,该基因的表达受干旱,寒冷及ＡＢＡ的诱导。推测该基因与