牛疱疹病毒Ⅰ型PCR检测方法的建立及在牛源样本检测中的应用

目的建立牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)PCR检测方法,用于临床牛样本中BHV-1的检测。方法根据已发表的BHV-1 gB基因保守区域设计合成引物,建立BHV-1 PCR方法,对方法的特异性、敏感性、稳定性等进行方法学评价,并用建立的PCR方法检测64份牛临床样本。结果建立的BHV-1 PCR检测方法与牛副流感病毒Ⅲ型(BPIV3)、猪伪狂犬病毒(PRV)、单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)、犬疱疹病毒(CHV)、均无交叉反应;可检测病毒最小滴度为5lg TCID50/mL,对应的DNA模板浓度为5.26×10~2拷贝/μL;BHV-1 DNA在-30℃冰箱放置12个月仍可检测出目的条带。应用建立的方法检测145份牛源组织样本,BHV-1核酸阳性率为15.2%。结论建立的BHV-1PCR检测方法具有快速、特异、敏感及稳定的特点,适合于临床牛样本BHV-1的感染的检测。     

牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)荧光定量PCR检测方法的建立及应用

目的 建立牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)实时荧光定量PCR检测方法,用于牛源性样本中BHV-1的快速检测。方法 根据已发表的BHV-1 gB基因设计特异引物和TaqMan探针,建立BHV-1实时荧光定量PCR方法。并对方法的特异性、敏感性、重复性稳定性等进行测定。用建立的方法对181份牛源性样本进行检测。结果 建立的BHV-1荧光定量PCR检测方法与牛副流感病毒Ⅲ型(BPIV3)、牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV1)、猪伪狂犬病毒(PRV)、单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)、猫疱疹病毒1型(FHV-1)均无交叉反应;检测灵敏度可达到1×101copies/μL;批内变异系数均小于5%。应用建立的方法检测181份牛源性样本,有6份样本BHV-1核酸为阳性。结论 建立的BHV-1荧光定量PCR检测方法具有快速、特异、敏感及稳定的特点,可用于牛源性样本中BHV-1污染的检测。     

牛传染性鼻气管炎病的研究进展

牛传染性鼻气管炎(Infectious bovine rhinotracheitis,IBR)又名牛疱疹病毒Ⅰ型(Bovine herpesvirus-1,BHV-1)感染症,是一种急性、热性、接触性传染病,以高热、呼吸困难、鼻炎、鼻窦炎、上呼吸道炎症和潜伏感染为主要特征。该病目前在世界范围内流行,除南美部分国家之外,世界各国都已分离到该病毒,在我国部分省市该病有蔓延趋势。文章主要针对该病的病原学、流行病学、诊断与防控进行了阐述,为认识和研究该病提供一定的理论参考。     

牛病毒性腹泻病原的分子生物学与检测技术研究进展

腹泻是牛群中最常出现的疾病。病毒引起的牛病毒性腹泻是一种传染性腹泻,会给牧场造成巨大的经济损失。目前研究发现,引起牛腹泻的病毒主要有牛轮状病毒(Bovine rotavirus,BRV)、牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)、牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)、牛肠道病毒(Bovine enterovirus,BEnV)等。此外,牛凸隆病毒(Bovine torovirus,BToV)、牛诺如病毒(Bovine norovirus,BNoV)、牛纽布病毒(Bovine nebovirus,BNebV)、牛星状病毒(Bovine astrovirus,BoAstV)及牛嵴病毒(Bovine kobuvirus/aichivirus B,BKoV)也可诱发牛腹泻。随着病原检测技术,尤其是分子检测技术的进步,许多检测方法如IEM、RT-PCR、ELISA和PAGE已用于病毒的检测和疾病诊断。本文结合国内外文献资料,对牛病毒性腹泻的病原分子生物学特征及诊断技术进行概述,以期为牛腹泻的致病原因和检测技术的进一步研究提供基础。     

牛病毒性腹泻/黏膜病病毒(BVDV/MDV)的分子生物学研究进展

牛病毒性腹泻/粘膜病病毒(Bovine viral diarrhea virus/mucosal disease virus,BVDV/MDV)是引起牛病毒性腹泻/粘膜病的病原,与猪瘟病毒(CSFV)、羊边界病病毒(BDV)同属.其基因组由5‘非翻译区(5‘UTR)、一个大的开放阅读框(ORF)和3‘非编码区(3‘NCR)组成,编码结构蛋白P14、gP48、gP25、gP53及几种非结构蛋白.下面就BVD/MD的分子生物学研究进展做一综述,以便给该病的进一步防制奠定理论基础.     

大熊猫粪便样品中犬瘟热病毒的检测

根据GenBank中登录的犬瘟热病毒(CDV)N基因序列,设计合成1对特异性引物,以犬瘟热病毒疫苗中提取的RNA为阳性模板建立了快速检测CDV的RT-PCR方法,结果显示,所建立的CDV RT-PCR扩增得到与理论设计值大小一致的456 bp的特异性片段,对犬细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、牛轮状病毒(BRV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、大肠杆菌(E.coli)和新城疫病毒(NDV)的扩增结果均为阴性;最低可检出约1.53×10~2拷贝/μL的核酸;重复性试验结果表明,该方法检测重复性好.此方法对成都大熊猫繁育研究基地的37份眼观正常的大熊猫粪便样品检测,未检测出犬瘟热病毒,与胶体金试纸卡检测结果一致.     

BICP0 and its RING finger domain act as ubiquitin E3 ligases <Emphasis Type="Italic">in vitro</Emphasis>

Bovine infected-cell protein 0 (BICP0) encoded by bovine herpes virus 1 (BHV-1) immediate early gene is necessary for efficient productive infection, in a large part,because it activates all 3 classes of BHV-1 genes. It also has the ability to efficiently transactivate promoters that are not derived from BHV-1. To investigate the mechanism by which BICP0 achieves these effects, we expressed and purified BICP0 and its different mutants in E. coil In vitro assays showed that both full-length BICP0 and its isolated RING finger domain induce the accumulation of polyubiquitin chains. Mutations within the RING finger region that abolish the in vitro ubiquitination activity also cause severe reductions in BICP0 activity in other assays. Based on these, we conclude that BICP0 has the potential to act as an E3 ubiquitin ligase during viral infection and its RING finger domain is necessary for this function. These strongly support the hypothesis that BICPO might influence virus infection through its ability to interact with the ubiquitin-proteasome pathway.     

牛病毒性腹泻病毒致病分子机制的研究进展

牛病毒性腹泻病毒(BVDV)常侵害牛等多种动物,引起一种极为复杂,呈多种临床症状的牛病毒性腹泻-黏膜病,严重危害全球畜牧业的健康发展.BVDV致病机理非常复杂,给该病的防控和净化带来极大的困难.文章从BVDV分子生物学、病毒感染细胞、免疫逃逸、细胞凋亡等方面进行综述,对BVDV与宿主相互作用研究进行了展望,有助于阐明BVDV致病及产生持续性感染的机制.     

LPB—ELISA对新生牛血清中口蹄疫抗体的检测

口蹄疫是由于口蹄疫病毒(FMDV)感染引起的一种急性、热性、高度接触性和可快速远距离传播的动物疫病,被国际畜疫局(OIE)列为A类传染病之首.为了掌握新生牛血清中口蹄疫抗体的情况,从而为口蹄疫疫苗企业提供不含该抗体的优质新生牛血清.本试验采用液相阻断酶联免疫(LPB-ELISA)方法对20个批号新生牛血清样品中口蹄疫O型和亚洲I型抗体进行了检测,其中O型病毒抗原对照平均D492nm值50%值(临界值)为0.432;亚洲I型病毒抗原对照平均D492nm值50%(临界值)为0.897;20个新生牛血清样品亚洲I型和O型的D492nm值均大于临界值,表明各样品均显阴性,来自没有感染口蹄疫病毒或没有接种疫苗的动物.     

复方中药的体外抗病毒效果评价

根据中兽医理论选择具有清热解毒作用的黄芩、黄柏等十四味中药组方, 经水提(1#、2#)和醇提(3#、4#)制备了4种提取物, 以致病变型牛腹泻粘膜病病毒(BVDV)为模式病毒, 在犊牛睾丸细胞上评价其体外抗病毒活性. 首先在犊牛睾丸细胞上测定4种提取物的最大无毒浓度, 再按此无毒浓度和BVDV(200 TCID50)共同感染犊牛睾丸细胞, 设立BVDV病毒对照和空白对照组. 通过观察细胞形态的变化来判断结果. 结果显示4种提取物的最大无毒浓度均为1:64, 与病毒对照组相比1#提取物能使犊牛睾丸细胞出现细胞病变(CPE)的时间推迟48h, 2#、3#提取物推迟72h, 4#提取物推迟120h. 本试验证实这4种复方中药提取物在犊牛睾丸细胞上均有抑杀BVDV的效果, 为今后筛选有效的抗病毒中药复方奠定了基础.