甲型H1N1流感患儿免疫球蛋白水平变化

目的探讨甲型H1N1流感患儿免疫球蛋白水平变化及临床意义。方法采用放射免疫法检测51例甲型H1N1流感患儿（其中非危重组31例,危重组20例）急性期和恢复期以及对照组25例健康儿童外周静脉血的Ig,A、IgG、IgM、C3水平,并对结果进行分析。结果非危重组急性期和恢复期及对照组血清IgA、IgG、C3水平两两比较,差异均无统计学意义（P〉0．05）;危重组急性期血清IgA、IgG、C3水平低于非危重组急性期和对照组（P〈0．05）,恢复期血清IgA、I如、C3水平上升,与急性期比较差异有统计学意义（P〈0．05）;危重组和非危重组恢复期血清IsA、Is,G、C3水平比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。非危重组、危重组及对照组血清IgM两两比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论甲型H1N1流感患儿免疫球蛋白水平变化与病情严重性有关,危重患儿表现为急性期血清IgA、IgG、C3水平降低,恢复期恢复正常,提示危重甲型H1N1患儿体液免疫抑制是暂时的、可逆的。     

KPC-rg1抗H1N1流感病毒活性研究初探

为了研究肉桂提取物KPC-rg1对H1N1流感病毒的抗病毒活性.本研究以C57BL/6近交系小鼠为研究对象,并将小鼠分为3组,分别是健康空白组、对照组和实验组,分别对应给予磷酸缓冲盐(PBS)溶液、H1N1流感病毒溶液和H1N1流感病毒+KPC-rg1混合溶液,饲养28 d,观察实验过程中各组小鼠的存活率,通过红细胞凝集抑制实验(HI)分析KPC-rg1抗H1N1流感病毒的血凝抑制效价,并采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法定量检测病毒载量.与健康空白组相比,对照组小鼠接受H1N1病毒攻击后,体质量急剧下降,并在第3天出现死亡,而实验组小鼠给药后2 d内体质量略微下降,之后恢复到正常增长水平,且无小鼠死亡;小鼠感染28 d后,对照组和实验组小鼠血清中均检测出高滴度的血凝抑制效价(128 HAV);病毒攻击后3 d,对照组和实验组小鼠肺部病毒载量均达到1×10~7 copies/50 mg(1 IU≈5.6 copies);实验终点所有攻毒存活小鼠的肺组织病毒均得到了有效的清除.由此可知,KPC-rg1可有效地灭活H1N1流感病毒,对小鼠有显著的保护预防作用;被灭活的病毒保留了完整的抗原性,形成"原位固化灭活"效应;KPC-rg1可促使小鼠产生强烈的免疫应答反应,使机体产生高滴度的抗病毒抗体.     

抗甲型流感病毒H1N1亚型单克隆抗体制备及应用

采用快速免疫佐剂免疫小鼠,通过杂交瘤技术获得针对甲型流感病毒H1N1亚型的特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株.共获得7株能稳定分泌特异性抗体的细胞株,经腹水诱生和Protein A亲和层析纯化的抗体用于标记荧光量子点,并基于双抗体夹心免疫层析检测用于对甲型流感病毒H1N1亚型的检测.针对甲型流感病毒H1N1亚型,检出限为3.06×10~3TCID_(50)/L,具有较高的灵敏度,所制备的抗体在检测中具有良好的特异性和准确性,可用于对甲型流感病毒H1N1亚型的现场快速检测.     

无血清微载体培养MDCK细胞和甲型流感病毒H1N1的条件优化

 血清微载体培养MDCK细胞,并接种流感病毒H1N1,优化培养条件,为细胞流感疫苗的工艺研发奠定基础.采用不同的细胞接种量在50mL无血清微载体搅拌瓶中培养MDCK细胞,并接种甲型流感病毒H1N1,检测不同pH值和TPCK-胰酶含量的病毒培养液,不同病毒接种量,补加TPCK-胰酶,以及不同收毒时间对血凝效价的影响.以1.0×10⁵mL^-1的MDCK细胞数量接种到无血清微载体上,病毒培养液pH值为7.2~7.4范围内,TPCK-胰酶质量浓度为1.0μg/mL,接种后不补加胰酶,病毒接种量MOI=1.0,并在72h收获,最高血凝效价达到512.由此获得了在无血清为载体上培养MDCK细胞和甲型流感病毒H1N1的适宜条件.     

甲型H1N1流感超敏感诊断方法的建立及优化

利用几种助沉剂和核酸纯化方法富集病毒RNA,建立甲型H1N1流感超敏感诊断方法。收集31份甲型H1N1流感确诊病人提取的病毒RNA,稀释至1000分之一倍后分别应用酵母tRNA、糖原、AcrylCarrier助沉剂和磁珠、硅胶颗粒和离心柱的9种组合进行病毒RNA的富集,富集后分别进行RealtimePCR检测。并对检测结果进行统计学分析。利用几种助沉剂和核酸纯化方法的组合时,发现磁珠+AcrylCarrier助沉剂方法是最佳的核酸富集方法,能够大大提高病毒核酸的检出效率。建立了甲型H1N1流感超敏感诊断方法,该方法能够大大提高甲型H1N1流感的检出率。     

2009年甲型H1N1流感临床研究回顾

2009年全球爆发的甲型H1N1流感由一种源于猪流感病毒、致人急性呼吸道疾病的新型流感病毒所致.本文总结了甲型H1N1流感病毒感染病例的临床特征、治疗及研究展望.     

一类H1N1型流行病模型的研究

建立了一类描述H1N1型流行病的常微分方程模型,利用常微分方程动力系统的理论,研究了所建立的模型,得出了该系统的奇点以及奇点的类型,得出结论,在H1N1流感的控制中,政府行为是控制疾病流行的重要的元素。     

甲型H1N1流感病毒病原学特征

自从2009年3月18日墨西哥发现的首例甲型H1N1流感病例以来,在众多国家科研工作者的共同努力下,这种新流感病毒已经开始慢慢向人们揭开面纱。尤其是2009年4月27日公布从美国加利福尼亚州患者身上获得并分离得到的病毒基因序列后,研究人员陆续获得初步研究成果。研究表明：这种病毒基因组由禽流感、猪流感和人流感病毒基因混合而成,是一种新型的甲型H1N1流感病毒,它所引起的流感具有高度传染、传播迅速、易流行的特点。该病毒既有甲型流感病毒的共有特征,也有其特殊性。本文对该病毒的分类与命名、基因组结构特点与变异、相关蛋白及其功能作一综述以便对甲型H1N1流感的诊断、预防、治疗有所帮助。     

关于甲型H1N1流感防控的探讨

本文主要介绍甲型H1N1流感的特性,并结合工作实际对甲型H1N1流感的防控作了深入的探讨,对于群发性传染疾病的预防护理给出指导性意见。     

非结构蛋白NS1-ELISA检测禽流感野毒感染抗体

利用RT-PCR技术扩增获得了H5N2亚型禽流感病毒的NS1基因,ORF长度为678 bp。成功构建了重组表达载体pET-NS1,将其转化BL21(DE3),用终浓度1 mmol／I的IPTG诱导表达5 h,经15％的SDS-PAGE分析表明,诱导表达出了分子量大约为28 KD的 NS1融合蛋白,且以包涵体的形式存在,NS1融合蛋白经His trap Hp Kit柱子纯化或用尿素变性复性,获得纯度较高的NS1蛋白,并以此为抗原,建立了检测抗NS1蛋白抗体的ELISA(NS1-ELISA)方法。最佳包被浓度为2．5μg／ml,血清的最佳稀释倍数为1:200, 酶标二抗的最佳工作稀释度为1:5 000。重组NS1蛋白只与AIV感染的血清反应,而不与ND、IB、IBD、EDS76的阳性血清反应。分别检测H9N2、H5N2和H5N1亚型灭活疫苗和H9N2纯化病毒免疫的血清,各5份,其平均OD490值分别为0．225、0．210、0．205和0．184．均为阴性;而对H9N2和H5N2亚型活毒感染10-15 d的血清进行检测,各5份,其平均OD490值分别为0．610和0．619,均为阳性。因此,NS1蛋白能特异地区分野毒感染和灭活疫苗免疫鸡群,可作为一种鉴别诊断标记,但不能区分亚型．具有A型特异性。NS1-ELISA 方法的初步应用,不仅为生产提供了一种快速、特异、敏感的鉴别诊断方法,为进一步组装成试剂盒奠定了基础,也为禽流感的早期诊断、适时监控和净化提供了行之有效的方法。     

板蓝根粗提液抑制流感病毒的实验研究

对板蓝根凝聚粗提液的抗流感病毒作用进行了研究。用丙酮脱脂提取板蓝根生药的凝集素，并分别测定各样品的血凝活性，并用45.3mg/mL的样品对流感病毒（A1／京防／97－53H1N1，A1／京防／262／95）进行了体外抑制试验。结果表明：板蓝根凝集素对流感病毒具有显著的直接杀灭作用和预防作用及较好的治疗作用，而且得出抑制流感病毒的效果与板蓝根凝集素血凝活性的高低有关。     

IFITM3 restricts the morbidity and mortality associated with influenza

The 2009 H1N1 influenza pandemic showed the speed with which a novel respiratory virus can spread and the ability of a generally mild infection to induce severe morbidity and mortality in a subset of the population. Recent in vitro studies show that the interferon-inducible transmembrane (IFITM) protein family members potently restrict the replication of multiple pathogenic viruses. Both the magnitude and breadth of the IFITM proteins' in vitro effects suggest that they are critical for intrinsic resistance to such viruses, including influenza viruses. Using a knockout mouse model, we now test this hypothesis directly and find that IFITM3 is essential for defending the host against influenza A virus in vivo. Mice lacking Ifitm3 display fulminant viral pneumonia when challenged with a normally low-pathogenicity influenza virus, mirroring the destruction inflicted by the highly pathogenic 1918 'Spanish' influenza. Similar increased viral replication is seen in vitro, with protection rescued by the re-introduction of Ifitm3. To test the role of IFITM3 in human influenza virus infection, we assessed the IFITM3 alleles of individuals hospitalized with seasonal or pandemic influenza H1N1/09 viruses. We find that a statistically significant number of hospitalized subjects show enrichment for a minor IFITM3 allele (SNP rs12252-C) that alters a splice acceptor site, and functional assays show the minor CC genotype IFITM3 has reduced influenza virus restriction in vitro. Together these data reveal that the action of a single intrinsic immune effector, IFITM3, profoundly alters the course of influenza virus infection in mouse and humans.     

玉溪市2009～2012年流感哨点监测流行病学和病原学分析

目的：分析玉溪市2009~2012年流感哨点医院ILI（流感样病例）监测结果,探索流感流行特征及规律,为制定预防和控制策略提供依据;方法对2009-2012年国家流感监测哨点医院发热门诊流感样病例（ILI）进行流行病学分布研究,通过实验室分离培养流感病毒,并对流感病毒型别检测和分析;结果2009~2012年,ILI占门诊总数百分率平均为4.25%,年平均采样数为762,标本占ILI百分率平均为6.56%,每年1~3月、10~12月呈现两个发病高峰,ILl主要集中青壮年人群,职业分布以农民和学生为主,流感病毒型别流行特点：2009~2010年以新型甲型H1N1流行为主,2010~2011年以B型流感Victory系列流行为主,2012年以季节流感H3N2l流行为主;结论对玉溪市2009~2012年流感病毒的监测,发现具有时间、人群和不同型别的流行特点,结合实验室结果科学合理地使用疫苗,积极预防和控制流感病毒的流行。     

毛脉酸模体外抗菌及抗病毒作用的实验研究

研究毛脉酸模体外抗菌抗病毒的活性.采用二倍稀释法,体外测试毛脉酸模不同提取方法下对常见几种细菌的最低抑制浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)采用CPE法进行体外抗病毒(流感甲型病毒HA)实验,按Reed-Muench法计算各提取部位的药物半数有毒质量浓度(TC50)、半数抑制浓度(IC50)和选择指数(SI).毛脉酸模水煎液和70%乙醇冷浸液均显示有明显的体外抑菌和杀菌活性.毛脉酸模水提物和75%乙醇提取物对流感甲型病毒的抑制较强,半数抑制量质量浓度分别为(IC50)6.2 mg/mL和0.4 mg/mL,治疗指数(TI)分别为16和16.毛脉酸模醇提液是抗菌抗病毒活性较高的活性部位,值得进一步开发利用.     

肾茶水浸液抑菌作用研究

目的：研究肾茶水浸液的抑菌作用。方法：通过滤纸扩散法测定抑菌作用,对于有抑制作用的菌种测定其最小抑菌浓度。结论：肾茶水浸液对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌均有抑制作用,对金黄色葡萄球菌的抑制作用最强,其次是铜绿假单胞菌和白色念珠菌。对上述3种供试菌的最低抑菌浓度分别为0．08g／mL、0．10g／mL、0．10g／mL,而对黑曲霉菌、青霉菌、酿酒酵母菌无抑制作用。     

连花清瘟胶囊抗柯萨奇B_4病毒作用的实验研究

采用中药连花清瘟胶囊进行了体外抗柯萨奇病毒B4（CVB4）的研究.通过观察病毒引起的细胞病变效应（CPE）、MTT法检测细胞活性,作为考核药物抗病毒作用.结果表明：中药连花清瘟胶囊对CVB4有直接灭活作用,并能阻止CVB4的吸附细胞和抑制CVB4在Hep-2细胞内的的生物合成,其半数抑制浓度（IC50）分别为410.00,343.13和410.32μg/mL,治疗指数（TI）分别为2.67,3.20和2.66.其中抗病毒吸附作用最强（P〈0.01）.在100～1600μg/mL范围内连花清瘟胶囊与CVB4抑制率呈明显的量效关系（P〈0.05）,在500μg/mL时能抑制CVB4在Hep-2细胞内的增殖大于50%.研究表明中药连花清瘟胶囊能有效地抑制CVB4在Hep-2细胞中的增殖,其抗病毒作用表现为直接灭活病毒,阻断病毒吸附细胞和抑制病毒进入细胞之后的复制增殖.     

牛心朴子提取物对地红蝽毒杀活性的研究

以牛心朴子(Cynanchum komarovii)的水、无水乙醇和甲醇等3种溶剂的粗提物为材料,以地红蝽为测试对象,研究牛心朴子对刺吸式口器昆虫的毒杀作用.胃毒活性采用改进的药剂浸渍法,触杀活性采用微量点滴法.结果表明:(1)牛心朴子的3种粗提物对地红蝽均有较强的胃毒作用,其中,无水乙醇粗提物的毒杀效果最好,质量浓度为15 g/L时,72 h的校正死亡率达到73.3%;(2)在触杀实验中,甲醇粗提物的效果最好,质量浓度为15 g/L时,72 h的校正死亡率为83.3%,与无水乙醇粗提物触杀效果相差不大;(3)牛心朴子水粗提物的毒杀效果均低于其他2种提取物.     

中药大黄抗柯萨奇病毒作用的实验研究

采用大黄1～4#有效提取部位进行了体外抗柯萨奇病毒B3(CVB3)的研究.通过观察病毒引起的细胞病变效应(CPE)、MTT法检测细胞活性,作为考核药物抗病毒作用.结果表明:大黄1～4#有效提取部位对CVB3无直接灭活作用,也不能阻止CVB3的吸附,而能抑制CVB3在Hep-2细胞内的的生物合成,其半数抑制浓度(IC50)分别为34.7、33.0、33.9、34.3 mg/L,治疗指数(TI)分别为7.2、7.6、7.6、7.2.与病毒唑(IC50=30.6 mg/L,TI=6.6,P＞0.01)相当,优于大黄提取液(IC50=48.5 mg/L,TI=4.7,P＜0.01).在2.5～120 mg/L范围内1～4#部位与CVB3抑制率呈明显的量效关系(P＜0.01),120 mg/L时能完全抑制CVB3在Hep-2细胞内的增殖.所以大黄1～4#有效提取部位安全高效地抑制CVB3在Hep-2细胞中的增殖.     

猪流感病毒及其人类公共卫生意义

猪流感是目前危害全世界养猪业的重要呼吸道疾病之一.目前猪流感的致病毒株主要有经典性H1N1,类人型流感病毒,类禽型流感病毒,H1N2亚型流感病毒,H5N1和H9N2亚型流感病毒.特别是从猪体分离H5N1和H9N2亚型流感病毒对禽流感的控制及人类公共卫生方面有重要意义.     

KMB17细胞培养流感病毒的实验研究

 探讨了流感病毒在KMB₁₇细胞上培养的可行性.将3株不同型别的流感病毒(A/Wisconsin/67/2005H3N2,A/New Caledonia/20/1999 H1N1和B/Malaysia/2506/2004)分别接种于KMB₁₇细胞上,在无血清的条件下于不同pH值和不同胰酶浓度的维持液中35℃培养72 h后收获病毒,测定血凝效价.实验结果表明,所用的3个毒株中的H3N2亚型毒株(A/Wisconsin/67/2005 H3N2)血凝效价明显高于另外的H1N1亚型(A/NewCaledonia/20/1999 H1N1)和B型(B/Malaysia/2506/2004)毒株.因此认为KMB₁₇细胞可作为培养流感病毒的备选培养基质.