黄连木叶片基因组DNA提取方法

黄连木叶片中酚类化合物、色素、多糖和其它次生代谢物质含量较高,这给黄连木基因组DNA提取带来困难。为了从黄连木叶片中提取高质量基因组DNA,本文运用CTAB法和改良CTAB法提取黄连木基因组DNA,通过定性、定量及PCR分析检测所提取DNA的质量。结果表明:改良CTAB法提取的DNA电泳条带清晰无RNA等污染,OD260和OD280比值在1.8左右,RAPD扩增条带清晰、无弥散现象、亮度均一。说明改良CTAB法提取的DNA纯度较高,适用于PCR扩增反应。     

非伤害性取样方法获取的拟穴青蟹DNA质量研究

选取5只采自广西北海的野生拟穴青蟹(Scylla paramamosain),分别采用非伤害性(血淋巴)和伤害性(肌肉组织)取样方法提取基因组DNA进行COI扩增和ISSR扩增,检测DNA质量。结果表明,非伤害性(血淋巴)和伤害性(肌肉组织)取样方法获得的拟穴青蟹全基因组DNA的OD260/OD280分别为1.75~2.01和1.81~1.94,全基因组DNA纯度均较高,质量不相上下。同时,两种取样方法获取的DNA扩增片段大小均在600bp左右,同一个体扩增带型也是一致的。非伤害性(血淋巴)取样方法提取的基因组DNA,在质量上可以媲美伤害性取样(肌肉组织)提取的DNA,可以用于其它分子生物学实验研究。     

一种快速提取酵母样真菌DNA方法的研究

对一种提取酵母样真菌染色体DNA方法进行实验,试图找到一种快速简便提取酵母样真菌的方法,并对提取结果进行了紫外分光光度、琼脂糖凝胶电泳、PCR扩增等方法的鉴定。结果表明:用此方法提取的酵母样真菌基因组DNA浓度为395.5ng/μL,OD260/OD280比值为1.58~1.66,可满足PCR特异性扩增捡验酵母样真菌的需要。     

三种罗布麻干燥叶片基因组DNA的提取方法

采用Qiagen的植物基因组DNA提取试剂盒并加以改进,首次从不同季节采收、不同干燥方法保存的三种罗布麻(罗布红麻、大叶白麻和白麻)干燥叶片中提取出基因组DNA.提取的基因组TE溶解液的OD260/OD280 值多在1.7～1.9范围内,电泳呈现单条带,核基因组的ITS片段、叶绿体基因组的trnL内含子和trnL-F非编码区片段的PCR扩增条带清晰并能进行DNA测序,这表明基因组DNA质量较好,可以满足后续分子生物学实验的要求.本研究为罗布麻等中药材的进一步分子生物学研究提供了必要的技术基础.     

山西省沙棘品种AFLP的初步分析

沙棘体内酚类物质和蛋白质含量较高,影响了基因组DNA提取的产量.采用改良CTAB法对观光木基因组DNA进行提取,经过紫外吸收、琼脂糖凝胶电泳、双酶切和AFLP标记检测,结果表明:改良CTAB法提取的基因组DNA吸光值OD260/OD280为1.7～1.9,DNA无降解现象和杂质污染;基因组DNA双酶切彻底,并且APLP...     

两种动物基因组DNA提取方法的比较

分别用酚抽提法和盐洗法提取鼠、鲤、鲍三种动物基因组DNA。利用分光光度计测定其OD260与OD280的吸光值，计算比率估计核酸的纯度，并利用琼脂糖凝胶电泳观察DNA片段在凝胶中的位置，鉴定DNA．最终确定了一种简便、快捷、经济并适用于大多数动物基因组DNA提取的方法．     

活性污泥基因组DNA快速提取新方法及其指纹分析

建立了从活性污泥中快速提取基因组DNA的新方法,过程包括粗提与精制两个步骤,简化了繁琐的提取程序,提高了提取效率．用该方法提取的基因组DNA做模板,进行扩增核糖体限制性酶切片断分析（ARDRA）及核糖体基因间区序列分析（RISA）,均获得了理想的多态性指纹图谱;采用两对特异性引物（鞘氨醇单胞菌属和氨加氧酶基因）对所提污泥基因组DNA进行扩增,均获得了正确的PCR产物．该方法提取的污泥基因组DNA不但适用于研究污泥系统中菌群多样性分析,而且还可以对特定基因进行跟踪监测。     

蝴蝶干标本DNA的提取及RAPD分析

通过对3种基因组DNA提取方法的实验比较，提出了适合蝴蝶干标本基因组DNA的提取方法，并成功地应用于RAPD-PCR的扩增，表明该方法可行．     

从动物血液中提取基因组DNA方法的比较研究

从血液中提取基因组DNA的传统方法是先得到淋巴细胞,再用蛋白酶K、SDS消化,然后用酚、氯仿抽提,乙醇沉淀．CTAB法提取基因组DNA多应用于植物和微生物,从全血中提取基因组DNA报道甚少．采用改良的CTAB法从全血中提取基因组DNA,并以传统方法和TAKARA Blood Genome DNA Extraction Kit作对照．结果表明：CTAB法可以得到大量的、较完整的基因组DNA,并且纯度达到1．8～2．0,可以满足PCR扩增和限制酶切等实验的要求．     

运用RAPD技术检测Cu2+对草鱼基因组DNA的影响

对草鱼腹腔注射了CuSO4,抽取注射前后其血液以提取基因组DNA。选用10个随机引物对草鱼基因组DNA进行了RAPD扩增,结果表明:5个引物能产生1～5条扩增带,扩增产物分子大小在200～3500bp之间,其中引物S15和S16能检出用CuSO4染毒前后草鱼基因组DNA的差异。CuSO4可使草鱼基因组DNA发生改变,应对其使用加以限制。     

链霉菌基因组提取方法的比较与改进

将链霉菌菌株Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．纯化后,测得其葡萄糖异构酶的比活力为０．４１４ｕ／ｍＬ,使用苯酚氯仿法提取提的基因组ＤＮＡ浓度较低,ＲＮＡ和蛋白较多,但用大量法时仍可得到大量的ＤＮＡ,使用试剂盒法得到的基因组ＤＮＡ浓度较大,但仍有大量ＲＮＡ存在,由亚精胺法得到的基因组ＤＮＡ浓度较好,ＲＮＡ很少,自行设计的改进法得到的基因组ＤＮＡ,量特别大,纯度很高,ＤＮＡ大小集中在３０ｋｂ左右,ＲＮＡ很少,非竽相应的基因工程操作。     

拟步甲昆虫基因组DNA提取的比较研究

对拟步甲科8种昆虫的新鲜标本及无水乙醇浸泡标本，分别用SDS-蛋白酶K消化法和乙酸钾抽提法进行基因组总DNA的提取．经5次重复实验，结果表明，用两种方法均能从新鲜标本中获得较完整的DNA，且DNA得率较高；而对于无水乙醇保存的标本，提取出的DNA用琼脂糖凝胶电泳检测不出DNA条带，说明标本在保存过程中DNA可能发生了变化，致使提取出的DNA量太少或未分离出DNA．通过对比实验，分析原因，阐明了两种方法的优缺点，并提出了该类昆虫用于DNA提取的标本的保存方法．     

红碱淖遗鸥血液基因组DNA提取方法的比较研究

采用酚-氯仿法和改良Miller盐析法从红碱淖遗鸥冷冻血液样品中提取基因组DNA,以筛选遗鸥冷冻血液DNA的最佳提取方法.结果显示：酚-氯仿法琼脂糖凝胶电泳DNA样品亮度和清晰度较高,条带较粗,纯度较高;而改良Miller盐析法提取基因组DNA,获得率较低,并且难以去除杂质;酚-氯仿法提取时,酶解16 h比酶解10 h的DNA提取效果好,说明在一定时间范围内,延长酶解时间可有效地提高DNA提取效果.上述结果提示,酚-氯仿法对遗鸥冷冻血液基因组DNA提取的效果优于改良Miller盐析法.     

绿尾大蚕蛾核型多角体病毒DNA抽提与鉴定

绿尾大蚕蛾(Actias selene ningPoana Felder)核型多角体病毒DNA(As NPV DNA),用酚-SDS法从病毒粒子中抽提。紫外吸收光谱测定最高和最低吸收值分别在258nm和232nm处。在0.7％琼脂糖凝胶电泳中,NPV DNA呈均一片段,经测定其T_m值为86℃,G C含量为41％。抽提的DNA经注射寄主幼虫,有一定的感染活性,感病虫表现核多角体病的典型症状。     

酒精和冷冻处理对肌肉组织基因组DNA提取的影响

提取基因组DNA的质量对于后续的基因扩增、酶切以及测序等分子生物学研究具有关键的影响,对肌肉组织进行不同的酒精和冷冻处理会显著影响提取DNA的质量。经过-80℃超低温冷冻数日的黄鳝样品解冻,取肌肉组织放入75%酒精处理后提取的基因组DNA完整性差、降解厉害;经过-80℃超低温冷冻数日的黄鳝样品直接取肌肉组织提取的基因组DNA比较完整、降解程度低;活体采取的黄鳝新鲜肌肉组织样品经过75%酒精处理,在-80℃超低温冷冻数日然后提取的基因组DNA质量也较好,电泳条带明晰而锐利,弥散降解带较少。后两种处理方法对黄鳝肌肉组织中DNA酶活性降低显著,因此提取的肌肉组织基因组DNA质量较高,可以有力支持后续的酶切、PCR扩增等分子生物学实验。     

杨树毒蛾核型多角体病毒的形态结构与病毒DNA的限制性内切酶酶谱分析

杨毒蛾核型多角体病毒(Lencoma Salicis nuclear polyhedrosis virus,简称LsNPV)是一种多粒包理型的杆状病毒。在扫描电镜下呈不规则多面体,病毒多角体大小不一致,平均直径为1.2μm。病毒粒子长为215nm直径30～50nm。LsNPV的基因组是一个环状双链DNA。限制性内切酶BglI,SalI分别把病毒DNA酶解为26和24个限制性片段,由片段总和法计算,基因组大小为86.3kb。     

甲醛溶液保存的中华哲水蚤基因组DNA提取和PCR扩增

提取了保存于5％甲醛溶液中的单只中华哲水蚤基因组DNA．经凝胶电泳后虽无清晰条带．但PCR扩增后可得线粒体DNA细胞色素氧化酶Ⅰ亚基基因(mtCOI)片段．测序分析，该片段长度为710bp。与GenBank中的序列(索引号AF332769)比对后确定为中华哲水蚤mtCOI序列的一部分．利用本实验方法所提取的基因组DNA可适用于系统发生、种群遗传结构等领域的分子水平研究．为保存在甲醛溶液中的小型海洋浮游动物的基因信息利用提供实用技术。     

用基因枪法将AGP基因导入水稻的初步研究

以水稻成熟种子的愈伤组织为受体，采用基因枪法将AGP基因导入水稻细胞，通过组织培养和抗性筛选，得到了转基因植株，转基因植株总DNA的PCR分析初步表明，目的基因已整合到水稻的基因组中。     

克隆植物珠芽蓼基因组DNA的提取及RAPD鉴定

高原植物体内所含有的酚类、多糖、色素等次生代谢物质严重影响提取其基因组DNA的得率和纯度,是导致后续分子操作失败的主要原因.运用一种新改进的CTAB法对变色硅胶保存的高原植物珠芽蓼(Polygonumviviparum)叶片进行基因组DNA的提取,采取常温下沉淀DNA,增加洗涤沉淀的体积分数为70%乙醇用量和洗涤时间等措施,有效地去除了酚类、多糖、色素等物质的干扰,减少了褐化现象的发生.样品检测所得DNA片段均在48 kb左右,电泳谱带呈线状,无拖尾现象;紫外分光光度计检测,A260nm/A280nm值在1.7~1.9之间.RAPD扩增结果表明,此方法提取的DNA无论在质量和纯度上都较理想.