红藻藻胆体内部蛋白间的能量传递研究：I.人工合成R—PE／R …

研究了人工合成的藻胆体模拟复合物时间分辨荧光光谱,并运用多指数拟合的方法对数据进行了详细的处理和分析,结果表明能量在Ｒ－ＰＥ和Ｒ－ＰＣ之间的传递时间与能量从Ｒ－ＰＣ传递到ＡＰＣ的时间几乎相等（５０ｐｓ）除此之外,Ｒ－ＰＥ到ＡＰＣ还有两种能量传递的通道,能量在这两个通道的传递时间分别为１１０ｐｓ和４００ｐｓ,即：蛋白之间有能量传递通道是并行的。     

红藻藻胆体内部蛋白间的能量传递研究 Ⅱ.人工合成复合物RPE/RPC以及RPE/APC内的能量传递

研究了２种人工合成的二元藻胆体模拟复合物（ＲＰＥ／ＲＰＣ和ＲＰＥ／ＡＰＣ）的时间分辨荧光光谱并运用多指数拟合的方法对数据进行了详细的处理和分析,研究结果证实了能量在ＲＰＥ和ＲＰＣ之间的传递时间与能量从ＲＰＥ传递到ＡＰＣ的时间几乎相等（５０ｐｓ）;此外,ＲＰＥ到ＡＰＣ还有２个能量传递的途径,能量在这２个通道的传递时间分别为：１３５ｐｓ和４３６ｐｓ,而ＲＰＥ到ＲＰＣ的光谱解叠结果并未显示有上述的通道,即：能量可以从ＲＰＥ直接传递到ＡＰＣ同时也可以经过ＲＰＣ传递到ＡＰＣ,在实际的体系中应该是二者竞争的机制     

红藻藻胆体内部蛋白间的能量传递研究 Ⅲ.人工合成复合物R-PC/APC内的能量传递

研究了人工合成的二元藻胆体模拟复合物（ＲＰＣ／ＡＰＣ）的时间分辨荧光光谱并运用多指数拟合的方法对数据进行了详细的处理和分析,研究结果证实了能量在ＲＰＣ和ＡＰＣ之间的传递时间与能量从ＲＰＥ传递到ＲＰＣ的时间几乎相等（５０ｐｓ）;除此之外,ＲＰＣ到ＡＰＣ没有其它能量传递的通道．结果为能量可以从ＲＰＥ直接传递到ＡＰＣ同时也可以经过ＲＰＣ传递到ＡＰＣ,ＲＰＣ作为能量传递的中间受体,在实际的体系中其作用是通过竞争的机制实现的．     

红藻藻胆体内部蛋白间的能量传递研究

研究了人工合成的二元藻胆体模拟复合物（Ｒ－ＰＣ／ＡＰＣ）的时间分辨荧光光谱并运用多指数拟事的以数据进行了详细的处理和分析，研究结果证实了能量在Ｒ－ＰＣ和ＡＰＣ之间的传递时间与人Ｒ－ＰＥ传递到Ｒ－ＰＣ的时间几乎相等；除此之外，Ｒ－ＰＣ到ＡＰＣ没有其它传冯通道，结果为可以从Ｒ－ＰＥ直接传递到ＡＰＣ同时也可以经过Ｒ－ＰＣ传递到ＡＰＣ，Ｒ－ＰＣ作为能量传递中间受体，在实际的体系中其作用是通过竞争的机制实现     

红藻藻胆体内部蛋白间的能量传递研究：Ⅱ.人工合成复合？…

研究了２种人工合成的二元藻胆体模拟复合物的时间分辨荧光光谱并运用多指数拟合的方法对数据进行了详细的处理和分析,研究结果证实了能量在Ｒ－ＰＥ和Ｒ－ＰＣ之间的传递时间与有量从Ｒ－ＰＥ传递到ＡＰＣ的时间几乎相等;     

小麦叶绿体psbA基因的克隆及表达

用ＰＣＲ直接从小麦叶绿体基因组扩增到完整的ｐｓｂＡ基因，并构建了ｐｓｂＡ基因的克隆ｐＴＤ１Ⅱ。为研究ｐｓｂＡ基因在Ｅ·ｃｏｌｉ中的表达，将完整的ｐｓｂＡ基因正向插入高表达载体ｐＫＫ２２３－３中构建表达克隆ｐＫＴＤ１。含有重组表达质粒的转化细胞经ＩＰＴＧ诱导后提取总蛋白，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，小麦叶绿体ｐｓｂＡ基因能在Ｅ·ｃｏｌｉ中表达３２ｋＤ的Ｄ１蛋白，表达的Ｄ１蛋白占细菌总蛋白的３％以上。     

细胞生长时期对两种海洋微藻总脂含量和脂肪酸组成的影响

报道海洋微藻后棘灌（Ｅｌｌｉｐｓｏｉｄｉｏｎ ｓｐ．７－１４）和眼点拟微球藻（Ｎａｎｎｏｃｈｌｏｒｏｐｓｉｓ ｏｃｕｌａｔａ）细胞生长时期对细胞内总脂含但和脂肪酸组成的影响。结果表明,两种微藻的总匀在稳定期含量最高,分别占干重的５４．５～和４３．３％,而ＥＰＡ、ω－３多不饮和脂肪酸和总ＰＵＦＡ的最高比例均分别占干征的２２．９和２２．０％。在生长对数期中ＥＰＡ是脂肪酸的主要成分,而在稳定期中１６：０     

大肠杆菌二硫键异构酶DsbA和脯氨酸异构酶PPIaseA双顺反子表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达

用ＰＣＲ方法获得大肠杆菌二硫键异构酶ＤｓｂＡ的编码基因ｄｓｂＡ和大肠杆菌脯氨酸异构酶ＰＰＩａｓｅＡ的编码基因ｒｏｔ,并将ＤｓｂＡ和ｒｏｔ以双顺反子形式克隆至含有Ｐｔａｃ启动子的表达载体ｐＫＫ２３３－２中。在ＩＰＴＧ的诱导下,ＤｓｂＡ和ＰＰＩａｓｅＡ获得了表达。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和薄层扫描分析表明：ＤｓｂＡ、ＰＰＩａｓｅＡ的表达水平分别为占菌体裂解上清液总蛋白质的４．３２％和４．０６％。     

多能硫杆菌RubisCO基因的亚克隆及各种启动子对其表达的影响

将多能硫杆菌（Ｔｈｉｏｂａｃｉｌｕｓｖｅｒｓｕｔｕｓ）ＲｕｂｉｓＣＯ基因从两个方向亚克隆到ｐＢＲ３２２和ｐＫＫ２２３－３载体上,通过酶切的方法对各种质粒的插入方向进行了确证．并进一步对这两种插入方向的质粒在大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）中的表达情况进行了酶活性的测定,该基因片段在ｐＫＫ２２３－３载体的ｔａｃ启动子的启动下,表达活性比ｌａｃ启动子以及ｐＢＲ３２２载体上的Ｐ１和Ｐ２启动子高．     

类志贺氏菌毒素Ⅱ型变异体基因的克隆与鉴定

用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术,从大肠杆菌ＴＢ１中扩增出类志贺氏菌毒素Ⅱ型变异体（ＳＬＴⅡｅ）的Ａ亚单位基因（ｓｌｔ－ⅡｅＡ）的９６０ｂｐ的编码序列和Ｂ亚单位基因（ｓｌｔ－ⅡｅＢ）的１０７ｂｐ的编码序列,将这两个ＰＣＲ扩增产物在ＥｃｏＲ１和ＢａｍＨ１位点分别克隆进ＰＵＣ１８质粒载体,并转化到大肠杆菌ＴＧ１中,再根据生内切酶酶切分析筛选到含有ｓｌｔ－ⅡｅＡ的重组质粒Ｐ１８ｓｌｔ－ⅡｅＡ和含有ｓｌｔ－     

乙型肝炎病毒(HBV)DNA免疫的初步研究

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增了编码ＨＢＶｓＡｇ的基因序列,将其插入到ｐｃＤＮＡ３载体中,位于人巨细胞病毒（ＣＭＶ）早期启动子下游．重组质粒ｐｃＤＮＡ３－ｓＡｇ转染细胞后检测到ＨＢｓＡｇ表达．用纯化后的重组质粒直接注射到ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠骨骼肌内,诱发实验小鼠产生了抗ＨＢｓＡｇ特异性抗体．ＰＣＲ扩增未检测到注射部位及肝脏细胞染色体中有外源ＨＢＶＤＮＡ整合     

人红细胞生成素受体膜外结构域在大肠杆菌中的融合表达及其纯化

将插入ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｂｅ的人红细胞生成素受体ｃＤＮＡ,用ＥｃｏＲＩ和ＢａｍＨＩ酶解,分离得到的基因片段,插入到经ＥｃｏＲＩ和ＲａｍＨＩ消解的表达载体ｐＧＥＸ－３Ｘ中,得到重组表达质粒ｐＧＥＸ－３Ｘ／ｈＥＰＯＲ。重组质粒ｐＧＥＸ－３Ｘ／ｈＥＰＯＲ含有ｔａｃ启动子,ＥＰＯＲ膜外结构域基因５端与谷胱甘肽转移酶（ＧＳＴ）编码基因融合,阳性重组子在大肠杆菌中经ＩＰＴＧ诱导表达ＧＳＴ－ｈＥＰＯＲ,重组表达菌裂解上清液经ＧＳＨ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和柱一步纯化,能除去绝大部分杂蛋白,基本达到纯化的效果。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和免疫杂交分析显示,重组表达产物确系人红细胞生成素受体     

桂北五步蛇纤溶酶金属蛋白酶原基因的初步研究

从桂北五步蛇毒腺中抽提蛇毒总ＲＮＡ,采用一步法（ＲＴ－ＰＣＲ和ＰＣＲ在同一试管内进行）扩增纤溶酶金属蛋白酶原基因,并进行电泳检测,可见３条特异的ＤＮＡ条带,分别约为１．５Ｋｂ、１．３Ｋｂ和８００ｂｐ,利用平端连接的方法将其中的８００ｂｐＰＣＲ产物克隆至ｐＧＥＭ－Ｔ Ｅａｓｙ载体,挑选白色菌落,用酶切和ＰＣＲ法对其进行鉴定。     

人胰岛素样生长因子—I的基因克隆融合表达及产物纯化

利用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）方法,以ＩＧＦ－ＩｃＤＮＡ为模板,扩增ＩＧＦ－Ｉ的基因,在序更测定确证后,将其定向克隆到载体ｐＥｘＳｅｃｌ上,构建了ＩＧＦ－Ｉ融合表达载体ｐＥｘＩＧＦ,经ＩＰＴＧ诱导表达后,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明：含有重组表达质粒的菌株可表达出约３２．５８％的６ＫＤ融合蛋白,且主要以可溶性形式存在。经ＩｇＧ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ亲和层析一步纯化后,可获得纯度的９０％的融合蛋白,经Ｗｅｓ     

人组织型纤溶酶原激活剂（t—PA）在大肠杆菌中的表达,…

人组织型纤溶酶原激活剂（ｔ－ＰＡ）ｃＤＮＡ重组在表达质粒ｐＤＲ７２０中。在Ｅ．ｃｏｌｉＣ６００中获得了表达，表达水平为２％。以醋酸锌显色ＰＡＧＥ凝胶回收ｔ－ＰＡ表达条带，进行复性处理。复性产物经Ｂｅｎｚａｍｉｄｉｎｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ，Ｌｙｓｉｎｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析，纯化得到ＳＤＳ－ＰＡＧＥ银染一条带纯度，比活为４，０００ｍｏｌ／ｓ·ｇ的人ｔ－ＰＡ。     

P48L和D74N突变影响P16基因功能

应用ＰＣＲ技术，对Ｐ１６抑癌基因进行体外定突变。在Ｐ１６ｃＤＮＡ中引入第４８位密码子ＣＣＧ（Ｐｒｏ）→ＣＴＧ（Ｌｅｕ）和第７４位密码子ＧＡＣ（Ａｓｐ）→ＡＡＣ（Ａｓｎ）突变，构建了ｐ１６－Ｐ４８Ｌ和ｐ１６－Ｄ７４Ｎ突变体，并把它们导入纯合缺失Ｐ１６基因的人肺癌细胞株Ｈ４６０。     

人胰岛素样生长因子—Ⅰ的基因克隆,融合表达及产物纯化

利用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）方法,以ＩＧＦ－ＩｃＤＮＡ为模板,扩增ＩＧＦ－Ｉ的基因。在序列测定确证后,将其定向克隆到载体ｐＥｘＳｅｃＩ上,构建了ＩＧＦ－Ｉ融合表达载体ｐＥｘＩＧＦ,经ＩＰＴＧ诱导表达后,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明：含有重组表达质粒的菌株可表达出约３２．５８％的２６ＫＤ融合蛋白,且主要以可溶性形式存在。经ＩｇＧ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ亲和层析一步纯化后,可获得纯度约９０％的融合蛋白,经Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔ分析,免疫学活性呈阳性反应。     

加工番茄多聚半乳糖醛酸酶(PG)基因的cDNA克隆

以加工番茄８７－５为材料,运用反转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）技术成功地将ＰＧ基因的ｃＤＮＡ序列克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ载体上,并利用酶切及ＰＣＲ进行了初步鉴定。     

t-PA在昆虫细胞中的表达

将含完整阅读框架的人ｔ－ＰＡ（ｔｉｓｓｕｅ－ｙｔｐｅ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ,ｔ－ＰＡ）ｃＤＮＡ克隆至昆虫细胞表达转移载体ｐＢａｃＰＡＫ８中,获得重组质粒ｐＢａｃ－ｔＰＡ。应用脂质体共转染法,将ｐＢａｃ－ｔＰＡ和线性化杆状病毒ＢａｃＰＡＫ６ ＤＮＡ共转染Ｔｎ－５Ｂ－１昆虫细胞。经空斑筛选获得１１株重组病毒。经ＰＣＲ鉴定与生物活性测定,获得一株高效表达ｔ－ＰＡ的重且病毒ＢａｃｔＰ     

南瓜甘油—3—磷酸转酰酶基因cDNA的克隆及限制性图谱分析

依据国外有关文献,采用ＲＴ－ＰＣＲ技术成功地从南瓜子叶中分离了甘油－３－磷酸酰基转移酶（ＧＰＡＴ）基因的ｃＤＮＡ片段并克隆到了ｐＧＥＭ－Ｔ载体系统的多克隆位点上．限制性内切酶分析表明确属该基因．ＧＰＡＴ对植物的抗冷性有着重要的作用,该基因的克隆为进一步研究该酶和该基因及其与植物抗冷性关系迈出了第一步