牛细胞核移植试验初报

体外成熟培养（ＩＶＭ）２３－２４ｈ的牛卵母细胞，去核后用８０Ｖ／ｍｍ，４０μｓ电激活２次（Ｉ组）或不激活（Ⅱ组），然后注入８－３２细胞期体外受精（ＩＶＦ）牛胚胎的卵裂球，再用８０－１００Ｖ／ｍｍ，４０μｓ电激两次诱导卵母细胞与卵裂球融合，两组的融合率（６２．８％与６５．１％）和卵裂率（５５．４％与５１．９％）无显著差异（Ｐ〉０．０５）。全部４１２枚重组卵电激后的融合率是６３．８％（２６３／４１２）     

发情犬与未发情犬卵母细胞体外受精的研究

采集发情犬和未发情犬卵巢,回收大腔（直径大于２ｍｍ）、小腔（直径１－２ｍｍ）和不可见卵泡卵细胞,进行体外受精,结果如下：①发情组的单精受精率（３１．２％）,原核形成率（１９．４％）高于未发情组。发情组的多精受精率（１２．６％）要低于未发情组。②直径１－２ｍｍ、大于２ｍｍ卵泡组单精受精率略高于不可见卵泡组。可见卵泡组的原核形成率高于不可见卵泡组。③发情犬卵泡直径大于２ｍｍ组卵裂率高于发情犬和未发情犬     

猪卵母细胞生长成熟过程中脂质成份的研究

本实验应用Ｃａｔａｌａｎ及Ｌｉｌｌｉｅ氏油红Ｏ染色法和Ｂａｋｅｒ氏酸性氧化苏木精染色法，对猪卵母细胞生长成熟过程中脂质成份的改变情况进行了染色研究，把生长卵泡按其直径：０．８～２．４ｍｍ（Ｓ组）、２．５～４ｍｍ（Ｍ组）、＞４ｍｍ（Ｌ组）分为三组，分别取其中的卵母细胞进行染色观察．另外，还作了卵巢冰冻切片的染色观察．结果表明，在卵泡腔形成之前的猪卵母细胞中就含有大量的脂滴，在卵泡形成时，卵母细胞内的脂滴有所增加．脂滴中含有中性脂肪和磷脂．     

羔山羊的超数排卵及体外受精

以ＦＳＨ或ＦＳＨ－ＬＨ四种不同处理方法对２９只６８～１１０日龄羔山羊进行超排处理，结果共采集卵泡卵母细胞７０８枚，平均每只羔羊采卵２４．４枚．卵母细胞经体外培养２４ｈ后有８１．２％的卵发育为成熟卵．分别用经钙离子载体Ａ＿（２３１７８）或肝素进行获能处理的精子对体外培养成熟的卵子进行体外受精，结果精子穿入卵率分别为５４．８％和３４．４％，发育至２～４细胞胚的卵裂率分别为２８．６％和４１．９％．采用ＦＳＨ－ＬＨ（肌注）进行超排处理得到的卵子经体外受精处理后，其卵裂率明显高于采用其它超排方法得到卵子的卵裂率．     

肝素及血小板激活因子对牛卵母细胞体外受精的影响

在受精液中添加不同浓度的肝素（２，６，１８，５４，１６２，４８６ｍｇ／Ｌ）均能明显提高牛卵母细胞的受精分裂率（分别为８３．６，８４．９，８５．７，８９．２，８４．５和９０．２％，比对照组７３．６％，Ｐ〈０．０５）和卵裂指数（授精后４４－４５ｈ大于２－细胞的卵裂数占卵裂总数的百分率，分别为８５．７，８５．０，８９．９，９．８７，８７．４和８５．５％，对对照组５７．６％，Ｐ〈０．０１。然而，卵母细胞的     

体外培养绵羊卵母细胞核质成熟的研究

实验通过研究卵母细胞的核相及皮层颗粒的分布,探讨按照卵泡大小和卵丘细胞层多少分类后的不同绵羊卵母细胞在体外培养过程中的核质成熟情况,结果表明：（１）小卵泡卵经体外２４ｈ后的核质成熟率分别为４５．９％和２８．２％,远低于大（９３．５％,６６．７％）、中（８５．１％,５１．０％）两类卵泡卵,２）大卵泡卵在体外培养２０ｈ已完成核质成熟,较中等卵泡提前４ｈ。３）ｇｋｐｈｅ ３ｎｆｃ ｃ ｈ ｇｃｆｔ ｐｎ     

小鼠腔前卵泡卵母细胞的体外培养、体外成熟和体外受精研究

小鼠腔前卵泡在体外生长过程中，于培养液中添加血清，以及ＦＳＨ和胰岛素均对小鼠腔前卵泡的体外生长、体外成熟、体外受精起促进作用，其中以胰岛素的效果最为显著，腔前卵泡的体外成熟率和体外受精率可达６９．４％和８０．６％，但是体外受精后的体外发育率低于添加ＦＳＨ的试验组，表明ＦＳＨ有益于卵母细胞生长过程中细胞质的成熟。单层培养的卵巢颗粒细胞对腔前卵泡的体外生长也具有促进作用。将体外受精后发育至２—细胞的胚胎移植入受体鼠，胚胎可以正常着床发育。同时，卵母细胞的核仁和线粒体在培养过程中也发生相应的变化。     

盐酸胺碘酮等三种含碘药物的光化学－化学发光法测定

应用碘离子－鲁米诺体系的光化学－化学发光法测定盐酸胺碘酮、胆影葡胺和泛影葡胺三种含碘有机药物，方法简单、快速，Ｉ￣－离子含量在２×１０￣（－５）～４×１０￣（－４）ｍｏｌ／Ｌ范围内与化学发光强度呈良好线性关系。三种药物样品测定的相对标准偏差均小于５％，回收率为９４．９４％～９９．７４％．     

小鼠腔前卵泡卵母细胞的体外培养、体外成熟和体外受精研究

小鼠腔前卵泡在体外生长过程中，于培养液中添加血清，以及ＦＳＨ和胰岛素均对小鼠腔前卵泡的体外生长，体外成熟，体外受精起促进作用，其中以胰岛素的效果最为显著，腔前卵泡的体外成熟率和体外受精率可达６９．４％和８０．６％，但是体外受精后的体外发育率低于加ＦＳＨ的试验组，表明ＦＳＨ有益于卵母细胞生长过程中细胞质的成熟，单层培养的卵巢颗粒细胞对腔前卵泡的体外生长也具有促进作用，将体外受精后发育至２－细胞的胚胎     

The Effects of Different Culture Systems on the Quality of Bovine In Vitro Fertilized Embryos

研究探讨了不同体外培养条件下牛体外受精胚胎的发育速度及囊胚细胞数，从而了解不同体外培养系统对牛体外受精胚胎质量的影响．实验一中将体外受精卵分别在ＳＯＦ＋牛输卵管上皮细胞（ＢＯＥＣ）和ＴＣＭ１９９＋ＢＯＥＣ两种培养系统内培养，在这两种培养条件下囊胚发育率分别为２２．２％和２１．２％，囊胚细胞数分别为１１３．３±５．０和９７．９±８．３，受精后第６～９ｄ的囊胚出现率分别为４０．１％ａ、３７．０％、１９．２％ｂ、２．７％和１３．５％ｃ、３２．７％、３６．５％ｄ、１７．３％（ａ＞ｃ，Ｐ＜０．０１，ｄ＞ｂ，Ｐ＜０．０５），表明牛体外受精卵在ＳＯＦ＋ＢＯＥＣ中的发育速度快于在ＴＣＭ１９９＋ＢＯＥＣ中．实验二中将体外受精卵分别培养于ＳＯＦ＋ＢＯＥＣ、ＳＯＦ＋牛卵丘细胞、ＳＯＦ＋ＢＳＡ三种培养系统中，结果囊胚发育率分别为３５．５％ｅ、２９．４％和２２．４％ｆ（ｅ＞ｆ，Ｐ＜０．０１），囊胚细胞数分别为１１７．３±８．０ｇ、９４．２±９．３和９０．２±９．４ｈ（ｇ＞ｈ，Ｐ＜０．０５）．实验三观察了体外受精胚胎在ＳＯＦ＋ＢＯＥＣ培养条件下发育速度与囊胚细胞数的关系，结果第６～９ｄ的囊胚细胞数分别为１１０．８±１０．２ｉ、１２８．     

灭活与未灭活发情母牛血清对牛体外受精卵发育的影响

通过在成熟培养液和发育培养液内添加灭活或未灭活发情母牛血清（ＯＣＳ）探讨了血清灭活与否对牛体外受精（ＢＩＶＦ）卵发育的影响，在卵母细胞成熟培养实验中，两个组分别添加１０％灭活、未灭活发情零日母牛血清（Ｄ＿０ＯＣＳ），另一组为不加血清的对照组。三个处理组的卵裂率分别为７４．８％、７６．５％和５０．２％（Ｐ＜０．０１）。囊胚发育率分别为２５．９％、１８．３％和４．８％（Ｐ＜０．０５）。前两个处理组间无显著差异，但二者的各项发育指标均显著高于对照组。在发育培养液内分别添加５％灭活或未灭活发情第五日母牛血清（Ｄ＿５ＯＣＳ）。两个处理组的卵裂率分别为７６．７％和７２．０％，囊胚发育率分别为２４．５％和２０．１％，二者间无显著差异，结果表明：牛卵母细胞的成熟过程中，血清的添加是必须的。未灭活ＯＣＳ同样可以促进ＢＩＶＦ卵的体外发育，但其效果仍不如灭活的ＯＣＳ．     

完全体外化牛细胞核移植的研究

本研究探讨了用体外成熟卵母细胞和体外受精胚胎进行核移植的可能性。本研究结果在我国首次获得牛核移植的成功。从屠宰场回收的卵巢中抽取卵球－卵母细胞复合体，采用以前报道的方法（石德顺等，广西农业大学学报’１９９４：１３：１－５）进行体外成熟（ＩＶＭ）和体外受精（ＩＶＦ），获得ＩＶＭ卵母细胞和ＩＶＦ胚胎，体外成熟２３－２４ｈ后，在含０．１％透明质酸酶的无钙镁ＰＢＳ（ＰＢＳ）内，用细管反复吹打去掉卵丘细胞。选择具有明显第一极体的卵母细胞通过显微操作移去第一极体及其附近约一半的细胞质进行去核，去核的卵细胞在成熟液内继续培养到ＩＶＭ３０ｈ．体外发育到８－３２细胞期的ＩＶＦ胚胎用作核供体．供体胚胎用含０．２５％Ｐｒｏｎａｓｅ（溶于ＰＢＳ￣－）溶解透明带，并用细管吹打将其分散成单个卵裂球，在ＩＶＭ３０ｈ将单个卵裂球显微注入去核卵母细胞的卵周隙内，并在ＩＶＭ３１ｈ用８０Ｖ／ｍｍ４０μｓ两次电脉冲（间隔１秒）来诱导卵裂球与去核卵母细胞的融合。融合卵在颗粒细胞单层培养滴内共培养，体外培养２４ｈ后观察卵裂结果，经体外培养５－８天后发育到桑椹和囊胚的核移植胚胎移植到同期发情的受体．２个月后直检妊娠情况．本实验中共操作１９４枚卵母细胞，     

在表面活性剂存在下泰尔登的电分析化学特性研究

在ｐＨ７．００缓冲溶液中，当有０．００２０％ＯＰ存在时，泰尔登在－１．９５Ｖ产生一灵敏极谱波，利用此波可测定痕量泰尔登，检测下限为５．４×１０￣（－９）ｍｏｌ／Ｌ。用恒电位库仑法，计时库仑法和循环伏安法测得反应电子数为２，吸附量为１．１７×１０￣（－１０）ｍｏｌ／ｃｍ￣２，扩散系数为４．３×１００￣（－５）ｃｍ￣２／ｓ。     

郁金香叶片直接诱导试管人工种球的快速繁殖的研究

对郁金香的叶片直接诱导试管人工种球及发育成大球的快速繁殖途径进行了研究，结果表明：叶段在ＭＳ＋ＢＡ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ２．０￣５．０ｍｇ／Ｌ中不经愈伤组织直接分化多个小鳞茎，Φ（Φ：鳞茎的直径）２ｍｍ的小鳞茎在ＭＳ＋ＧＡ１．０￣２．０ｍｇ／Ｌ中发育成带１￣２片叶的Φ５￣１０ｍｍ的大鳞茎，大鳞茎的移栽成活率为９８％￣１００％。从而建立了郁金香试管人工种球快速繁殖的新途径。     

阿坝州牛的种群分布与气候生态环境的关系

对阿坝州气候生态环境与牛的种群分布进行了探讨，确定牦牛、普通牛适宜气候区的综合气候指标分别为：年均气温０．７～１２．２℃，年≥０℃积温为１４３２．２～４４４８，年辐射总量１２２．９～１４７．９ｋＪ／ｃｍ￣２，年日照时数为２１２９．７～２４１７．９ｈ，年降水量≥６１０ｍｍ，生长季干燥度０．０９４～１．０５６，隶尾度：　＝１；年均气温９．０～１３．５℃，年≥０℃，积温为３３６２—１８９２，年辐射总量１０１～１１０．４ＫＪ／ｃｍ￣２，年日照时数为１６３７．５～１７４３．７ｈ，年降水量４９２．７～８３０ｍｍ，生长季干燥度０．５７４～１．４２１，隶属度＝０．两者之间为牦牛、普通牛过度气候生态区，其气候指标为年均气温４．７～５．７℃，年≥０℃积温２１３１～２３９６，年辐射总量１１５．６～１２１．９ＫＪ／ｃｍ￣２，年日照时数为１８２７．５～１８４３．９ｈ，年降水量７２９．７～７５６．１ｍｍ，生长季干燥度０．２１６～０．３５５，隶属度＝０．０６１～０．２２５，为充分利用气候资源和牛的品种资源，发展阿坝州养牛业提供了理论依据。     

磷酸盐及其结构类似物对文昌鱼酸性磷酸酶的影响

研究了磷酸盐（ＨＰＯ￣（２－）＿４）及其结构类似物钼酸盐（ＭｏＯ￣（２－）＿４），钒酸盐（ＨｖＯ￣（２－）＿４），钨酸盐（ＷＯ￣（２－）＿４）对文昌鱼酸性磷酸酶活力的影响及其抑制机理。实验结果表明：磷酸盐对文昌鱼酸性磷酸酶的抑制作用表现为竞争性抑制类型，而其结构类似物则是通过非竞争性抑制的方式抑制酶活力．抑制常数Ｋｉ分别为：磷酸盐：３．０×１０￣（－４）ｍｏｌ／Ｌ，钼酸盐：５．５×１０￣（－７）ｍｏｌ／Ｌ，钒酸盐：７．０×１０￣（－７）ｍｏｌ／Ｌ，钨酸盐：３．８×１０￣（－８）ｍｏｌ／Ｌ，用酸盐对酶活力呈时间抑制过程，表明该类似物可能通过氧化—还原这种新的抑制机理来抑制酶的活力。     

日本珊瑚树腋芽人工种子的初步研究

以日本珊瑚树腋芽为繁殖体，采用不同包裹基质包裹和不同萌发基质萌发，结果表明：４％海藻酸钠（加ＭＳ基本培养基作人工胚乳）中加入０．２％多菌灵制成的人工种子在含０．１％多菌灵的ＭＳ基本培养液浸过的蛭石上萌发率最高，达６７．７５％；在包裹基质中加入０．５％活性碳制成的人工种子在含有０．１％多菌灵的ＭＳ基本培养基上萌发率为５６．７％；较佳繁殖体为腋芽长度在３￣５ｍｍ之间的节段。     

生长调节物质对丹参叶片脱分化及根芽分化的效应

生长调节物质对丹参叶片脱分化及根芽分化效应的研究结果表明：（１）０．５～５．０ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ，０．１～０．５ｍｇ／ＬＮＡＡ０．５～１．５ｍｇ／ＬＩＢＡ或０．２～１．０ｍｇ／Ｌ４ＰＵ－３０诱导叶片的脱分化率高达９７％～１０００％。（２）０．１～０．５ｍｇ／ＬＮＡＡ或０．５～２．０ｍｇ／ＩＢＡ诱导芽化率为９３％～１００％，３种细胞分裂素中，４ＰＵ－３０对叶片芽化最有效，６－ＢＡ和ＫＴ次之。（３）随     

不同体外培养条件对牛体外受精胚胎质量影响的研究

研究探讨了不同体外培养条件下牛体外受精胚胎的发育速度及囊胚细胞数，从而了解不同体外培养系统对牛体外受精胚胎质量的影响，实验一中伴体外受精卵分别在ＳＯＦ＋牛输卵管上皮细胞（ＢＯＥＣ）和ＴＣＭ１９９＋ＢＯＥＣ两种培养系统内培养，在这两种培养条件下囊胚发育率分别为２２．２％和２１．２％，囊胚细胞数分别为１１３．３±５．０和９７．９±８．３，受精后第６～９ｄ的囊胚出现率分别为４０．１％，３７．０％，１９．     

受精滴中精子不同平衡时间对牛卵母细胞体外受精的影响

为寻找精子在受精滴中的最佳平衡时间, 以加入精子时间为０ ｈ （对照组）, 分别在０ｈ, ０．５ ｈ, １ ｈ, ２ ｈ, ４ ｈ 随机加入等数卵母细胞到各受精滴, 结果显示： ０ ｈ, ０．５ ｈ 组卵裂率较高, 分别为８７．７％ 、８４．７％ , 与其他组相比差异显著（ Ｐ＜ ０．０１）; ０．５ｈ 组的囊胚率最高,为６７．５％ ,与对照组的５７．７％ 比较差异显著（ Ｐ＜ ０．０１）。结果表明,受精滴中精子经过０．５ｈ 平衡后, 弱精及死精粘聚沉淀, 余下活力强的健壮精子, 此时加入牛卵母细胞受精, 可获得较高卵裂率及囊胚率