IGFBP-4基因结构及功能研究进展

不同生理及病理条件下，胰岛素样生长因子-IGFs（insulin—like growth factor）对细胞的生长、生存、分化有着复杂的功能。IGF对全身与局部的调节作用通过高亲和力的IGF结合蛋白——Insulin-Like Growth Factor Binding Protein（IGFBP1—6）来完成。IGFBP-4是最小的IGFBP，存在于所有的生物体液中，不同类型的细胞，包括纤维母细胞、神经母细胞瘤细胞、前列腺细胞和骨细胞等均能生成IGFBP-4，肝脏是IGFBP-4mRNA表达最丰富的部位。     

小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白7原核表达载体的构建

胰岛素样生长因子结合蛋白7（简称IGFBP7）广泛存在于多种正常的组织中，但在相应的肿瘤细胞中的含量极微。试验表明，它在肿瘤发生的不同阶段抑制其生长。采用RT－PCR和Nest-PCR方法，从正常的小鼠脾脏中扩增得到IGFBP7 cDNA片段，测序正确后，克隆于融合表达载体pRSETC中构建原核表达重组体。     

胰岛素样生长因子与眼科疾病的研究进展

胰岛素样生长因子(IGF)是一种结构上与胰岛素相似的多肽,作为一种分子信号,在维持和控制细胞生长、增殖、分化、成熟和再生等方面具有重要作用.近年来,它在眼科疾病中的作用受到广泛关注.本文对IGF系统的组成,生物学功能及其表达调节做一介绍,并对近年来国内外关于IGF系统在眼部的表达以及它在眼科疾病中的作用作一综述.     

肝病患者胰岛素样生长因子Ⅰ水平观察

探讨胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF—Ⅰ)在各型肝病患者中的变化规律。用放射免疫法到定188例肝病急者50例正常人的血清IGF—Ⅰ含量。结果表明，肝硬化及肝癌患者的IGF—Ⅰ水平明显低于正常对照组(P＜0．01)。IGF—Ⅰ是在肝脏疾病的发展过程中判断肝细胞功能不良的重要指标。检到IGF—Ⅰ对肝病患者尤其是判断肝硬化进展情况有一定的意义。     

机械生长因子研究进展

胰岛素样生长因子（IGF）最初被认为是一种由肝脏分泌的促生长因子,介导生长激素（GH）的作用,调节和诱导组织生长和发育。然而,后来人们发现IGF除了能在肝脏产生外,其他组织如肌肉也能通过自分泌或旁分泌的形式产生,并且在许多方面独立于GH而发挥作用。现在普遍认为IGF能产生几种具有不同功能和不同受体的剪接异构体。这些异构体中一种与肝脏产生的系统型IGF—IEa相同,另一种其mRNA仅在肌肉受到机械刺激后才可检测到,故称为“机械生长因子”（mechano growth factor,MGF）。     

运动对骨骼肌中胰岛素样生长因子I影响的研究进展

胰岛素样生长因子I(IGF-I)是一类促进细胞生长,具有胰岛素样代谢效应的因子,与运动能力密切相关。分析了近年来关于胰岛素样生长因子在运动、常氧运动、低氧运动不同应激下的变化情况的文献资料。对胰岛素样生长因子研究进展进行了阐述。对于IGF-I与低氧训练关系的研究,有助于提供低氧训练的评定指标,为低氧训练提供科学的理论指导。     

运动对大鼠骨骼肌及血清GH,IGF-I水平研究

生长激素(GH)、胰岛素样生长因子I(IGF-I)都是了解GH-IGF轴变化的主要指标。IGF不仅是内分泌因子,还能在组织局部起作用。通过对6周递增负荷跑台练习的大鼠进行研究,结果显示:运动后即刻处死的大鼠血清GH水平明显升高(P<0.01);运动组与对照组相比,骨骼肌IGF-I水平有明显升高(P<0.01),表明运动对骨骼肌组织内IGF的分泌有调节作用。     

齐墩果酸对衰老大鼠睾丸间质细胞胰岛素/IGF1通路关键基因表达的影响

为了探讨齐墩果酸对衰老大鼠睾丸间质细胞的作用,采用MTT法确定齐墩果酸最适药物浓度,氧化应激创建大鼠睾丸间质细胞衰老模型,RT-qPCR、免疫荧光和免疫印迹检测胰岛素/胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor 1, IGF1)信号通路关键基因转录情况和蛋白翻译情况,采用INSR抑制剂处理细胞,流式细胞术检测细胞凋亡情况.结果显示:与正常组相比,INSR、IRS1、IRS2、IGF1的mRNA转录水平和蛋白翻译水平显著下降(P<0.05);IGFBP3的mRNA转录水平显著提高(P<0.05),免疫荧光和免疫印迹均未检测到此基因表达;与衰老组相比,齐墩果酸组明显逆转此现象(P<0.05);齐墩果酸能明显抑制衰老组细胞的凋亡(P<0.05),INSR抑制剂处理后,细胞凋亡率明显高于齐墩果酸组(P<0.05).综上可知,齐墩果酸通过调控胰岛素/IGF1信号通路关键基因的转录和翻译延缓Leydig细胞衰老.     

营养支持对肠外瘘患者入院初期人体组成的改善作用

观察肠外瘘患入院初期营养支持对人体组成的改善作用。30例肠外瘘患分成两组各15例，分别给予全肠外营养支持(TPN)或全肠内营养支持(TEN)，观察10d前后患人体组成、血清胰岛素样生长因子—1(IGF—1)及血清蛋白浓度的变化。结果发现，所有患的人体体质指数(BMI)与体细胞群(BCM)均有显改善，而且TEN组患BCM增加幅度更明显，两组患总体水(TBW)与细胞内水(ICW)均增加，尤其是ICW差异显，而细胞外水(ECW)没有明显变化。TEN组患的血清前白蛋白有显改善，而两组患的血清IGF—1均有显上升，TEN组患IGF—1增加幅度更明显；IGF—1的变化与FFM、BCM、ICW、TBW的改善显相关，营养支持治疗显改善肠外瘘患入院初期的体细胞群，迅速增加细胞内水量，纠正细胞内外水的异常分布，而且肠内营养支持可以比肠外营养支持更明显地促进肠外瘘患人体组成的改善。     

围产窒息儿血清类胰岛素样生长因子－1水平变化及意义

目的 :了解围产窒息存活儿血清类胰岛素样生长因子 - 1(IGF - 1)水平变化规律 ,探讨其与缺氧缺血性脑病的关系。方法 :以围产窒息的足月存活儿为对象 ,根据缺氧缺血性脑病程度分为轻度组和中重度组 ,并以正常足月儿为对照 ,于生后 3d内 (急性期 )和 (14± 3)d(恢复期 )采外周静脉血 ,采取双抗体不平衡的放射免疫分析法进行测定。结果 :围产窒息 (轻、中重度 )存活儿生后 3d内 (急性期 )IGF - 1的含量水平与正常对照组差异无显著性 ,而生后 (14± 3)d(恢复期 )IGF -1明显升高 ,显著高于正常对照组 ,且中重度缺氧缺血性脑病组较轻度组升高更加显著。结论 :IGF- 1在围产期窒息脑损伤修复过程中起重要作用。     

IGF-1对绵羊皮肤中GHR、IGF-1、IGF-1R、kAP3.2和KAP6-1基因表达的影响

选取36只健康、体况一致的新疆细毛羊随机分成6组。在每只羊的左侧肩胛部皮下局部注射0．5mL（10ng／mL）的IGF-1,右侧肩胛部皮肤为未注射IGF-1的对照组,然后分别于第0、3、6、9、12、50d采集各皮肤样品,用反转录多聚酶链式反应（RT-PCR）方法,定量分析绵羊皮肤中生长激素受体（GHR）、胰岛素样生长因子1（IGF-1）和胰岛素样生长因子1型受体（IGF-1R）、角蛋白关联蛋白KAP3．2和KAP6-1mRNA的相对丰度。试验结果表明,IGF-1对GHR基因的表达有下调的作用,对IGF-1、IGF-1R基因的表达没有显著的影响,而对KAP3．2、KAP6—1基因的表达具有显著的促进作用。说明IGF-1促进绵羊角蛋白关联蛋白基因的表达可能是通过生长轴以外的其他途径实现的。     

肝癌胰岛素样生长因子Ⅱ基因启动子P3甲基化的检测及意义

目的：建立检测肝癌胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)基因启动子P3甲基化状态的方法。方法：培养三株肝癌细胞系(BEL7402、SMMC7721、HepG2)，选取正常肝组织3例；提取基因组DNA，亚硫酸氢钠修饰，巢式聚合酶链反应(nested PCR)加甲基化特异性PCR(MSP)检测IGF-Ⅱ基因启动子P3的甲基化状态，PCR产物经克隆、测序验证。结果：三株肝癌细胞系IGF-Ⅱ基因启动子P3去甲基化，正常肝组织IGF-Ⅱ基因启动子P3甲基化，目的片段无突变，甲基化修饰完全。结论：巢式PCR加甲基化特异性PCR可准确检测IGF-Ⅱ基因启动子P3的甲基化状态。     

被动运动和电刺激对失神经大鼠骨IGF-1、BAKP和TRAP含量的影响

选用健康Wistar大鼠40只,随机分成4组,建立了失神经大鼠骨质疏松模型．经28d电刺激和被动运动后,检验并比较各组大鼠胫腓骨IGF-1含量及碱性磷酸酶（BAKP）、抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）活性的变化．电刺激组和电刺激＋被动运动组IGF-1含量较失神经石膏固定组明显增加（P〈0．05;P〈0．01）,被动运动和电刺激可提高骨BAKP活性（P〈0.05）．被动运动和电刺激可加快成骨过程,对延缓和防治骨质疏松的发生有一定的作用．     

The binding of the anticoagulation factor Ⅰ from the venom of Agkistrodon acutus to activated factor Ⅹ

Anticoagulation factor Ⅰ (ACF Ⅰ) from the venom of Agkistrodon acutus prolonged plasma prothrombin time (PPT) with dose-dependent manner and exhibited marked anticoagulant activity only at the concentration higher than its critical concentration (12 nmol/L). It was discovered that ACFⅠ formed a 1:1 complex with activated coagulation factor (FⅩa) in the presence of Ca2+ ions by the method of polyacrylamide gel electrophoresis. Both native ACFⅠ and decalcified ACFⅠ failed to form complexes with FⅩa in the absence of Ca2+. Sr2+ ions were able to replace Ca2+ ions in the binding of ACFⅠ to FⅩa, but both Ba2+ ions and Tb3+ ions were ineffective. ACFⅠ was a new member of the Ⅸ/Ⅹ-bp family in the C-type lectin superfamily, and had a amino acid composition similar to the other members of this family. It was composed of 251 amino acid residues with a molecular weight of 29 603.6 u on non-reducing condition, determined by MALDI-TOF-MS, and a molecular weight of 14.7 ku on reducing condition, determined by the sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE).     

Alternative splicing and expression of the insulin-like growth factor （IGF-1） gene in osteoblasts under mechanical stretch

Insulin-like growth factor 1 (IGF-1) promotes osteoblasts differentiation and bone formation, and its expression is induced by mechanical stretch, thus IGF-1 has been considered an effector molecule that links mechanical stimulation and local tissue responses. In this study, a mechanical stretching device was designed to apply physiological level static or cyclic stretching stimulation to osteoblasts. Different isoforms of IGF-1 mRNA were amplified by RT-PCR from the cells using respective primers and these amplified products were sequenced. An iso-form of IGF-1 splicing product was found to be selectively produced by osteoblasts under stretching stimulation. This IGF-1 isoform had identical sequence with the mechano growth factor (MGF) which was originally identified in muscle cells. Regulations of the expression of the liver-type IGF (L.IGF-1) and MGF in osteoblasts under stretch stimulation were further studied using semi-quantitative RT-PCR. Stretch stimulation was found to promot the expression of IGF-1 (L.IGF-1 and MGF), and for both isoforms expression was more effectively stimulated by cyclic stretch than static stretch. MGF was detected only in osteoblasts subjected to mechanical stretch, suggesting MGF was a stretch sensitive growth factor. Expression of MGF peaked earlier than that of L.IGF-1, which was similar to their regulation in muscle and suggested similar roles of MGF and L.IGF-1 in bone as in muscle cells. The functions of MGF and LIGF-1 in osteoblasts shall be established by further experimental studies.     

拟南芥钙调素结合蛋白cDNA克隆的分离和初步鉴定

以生物紊标记的钙调素为探针，从拟南芥（Arabidopsis thaliana）λZAP Ⅱ cDNA表达文库中分离到9个阳性克隆．融合蛋白经CaM-gel overlay分析，其中Y1编码的融合蛋白在1mmol／L Ca^2＋存在下与胶体金标记的钙调紊有明显结合．序列测定结果显示其外源片段全长为726bp，含有一个476bp的开放阅读框．GenBank数据库搜索及同源性分析结果表明该序列为拟南芥1号染色体基因组5661～7013序列，编码一未知蛋白，但与真核生物翻译起始因子5A（elF5A）具87％的同源性，并具相似的分子量、等电点和相同的保守序列．与eIF-5A的结构特征比较，可初步确定Y1编码的蛋白为真核生物翻译起始因子5A家族中的新成员．即拟南芥1号染色体5661～7013序列为一尚未报道的翻译起始因子基因＋蛋白质二级结构预测其c端122～135氨基酸残基处有一双亲α-螺旋结构，这一结构与大多数钙调素结合蛋白中的钙调素结合位点的结构特征一致．该序列已提交NCBI Banklt数据库，登录号为AF492850．     

重组人血管内皮生长因子165在大肠杆菌中的可溶性表达、纯化与体外活性评价

人血管内皮生长因子165(VEGF165)可有效促进血管新生和增加血管通透性,在伤口愈合方面有重要医疗价值。建立获取高纯度、高活性的优质重组VEGF165蛋白的方法具有重要意义。研究利用带有6组氨酸标签的二硫键形成蛋白A(Dsb A)的E.coli表达系统实现了Dsb A-VEGF165融合蛋白的可溶性表达;诱导过程中添加5%(v/v)的乙醇可显著提高工程菌中可溶性融合蛋白表达水平。融合蛋白通过Ni亲和层析粗纯,并经牛肠激酶酶切去除标签蛋白。随后利用肝素亲和层析精纯获得重组人VEGF165蛋白。非还原及还原SDS-PAGE电泳检测到分子量为约40 k Da的同源二聚体蛋白,促HUVEC细胞增殖实验显示重组蛋白具有较优的活性,EC50为13 ng/m L。研究实现了Dsb A-VEGF165的在E.coli中可溶性表达,建立了经济、高效的纯化方法,获得了高质量、高活性的重组人VEGF165蛋白。