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沙冬青抗冻蛋白的分离、纯化及其理化特性分析 总被引:18,自引:0,他引:18
用DEAE-纤维素DE-52,丙烯葡聚糖S300柱层析,热处理及等速电泳技术分离纯化了热稳定的冬季沙冬青叶片抗冻蛋白(AFP),获得了电泳纯的分子量约为50ku的AFP,经Shiff试剂检验为含糖的AFGP,显微镜观察冰点熔点差异技术和差示扫描量热法(DSC)测定了该蛋白热滞活性(THA),用DSC测定THA在5mg/mL时约为0.35℃.圆二色性(CD)分析表明,该AFGP中a-螺旋为11%,反 相似文献
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山羊草属(Aegilops)是小麦属(Triticum)的近缘属之一,山羊草属物种的种子中含有与普通小麦高分子量麦谷蛋白亚基(HMW glutenin subunit)结构相似的贮藏蛋白,通称为山羊草高分子量麦谷蛋白亚基。利用SDS-PAGE分析了4种多倍体山羊草物种所含高分子量麦谷蛋白亚基的组成,之后又通过比较各种PCR扩增方法,以偏凸山羊草(Ae。ventricosa)为材料建立了从多倍体山羊 相似文献
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人肝癌细胞系BEL-7404和正常肝细胞系L-02表达的蛋白质组双向凝胶电泳分析 总被引:6,自引:0,他引:6
蛋白质组分析技术已在生物科学各领域被广泛应用,也是功能基因组研究的重要组成部分.通过对人BEL-7404肝癌细胞系和L-02正常肝细胞系表达的蛋白质组IPG-DALT双向凝胶电泳和图象分析,发现7个蛋白点只在肝癌细胞中检测到表达,14个点只在肝细胞中检测到表达,78个蛋白点在两种细胞中表达量上有显著变化(P<0.01).两种细胞蛋白质组表达反映在差异表达谱上.双向电泳重复性分析表明 IEF方向平均位置偏差为0.73 mm, SDS-PAGE方向为0.44mm,量的变异为17.6%一19.2%.双向电泳的重复性已适合于蛋白质组差异表达的研究,蛋白质组差异表达谱可成为疾病诊断、药物作用分析和生命过程等研究的有用工具. 相似文献
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人肝癌细胞系BEL-7404 和正常肝细胞系L-02表达的蛋白质组双向凝胶电泳分析 总被引:4,自引:1,他引:3
蛋白质组分析已在生物科学各领域被广泛应用,也是功能基因研究的重要组成部分,通过对人BEL-7404肝癌细胞系和L-02正常肝细胞系表达的蛋白质组IPG-DALT双向凝胶电泳和图象分析,发现7个蛋白点只在检测到表达,14个点只在肝细胞中检测到表达,78个蛋白点在两种细胞中表达量上有显著变化,两种细胞蛋白质组表达反映在差异表达谱上,双向电泳重复性分析表明IEF方向平均位置偏差为0.73mm,SDS-P 相似文献
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RGD序列普遍存在于细胞外基质蛋白中,并能为许多整合素蛋白所识别。利用ELISA,SPR等技术,对表面固定的人工合成生物素-含RGD环六肽〔cyclo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys-Gly-)〕与人血小板整合素蛋白αⅡbβ3的结合能力进行了检测。结果表明,含RGD环六肽与生物素基团之间的间臂长度在1.48 ̄2.2nm时,RGD序列才能有效进入αⅡbβ3头部的反应中心并发生结合反应; 相似文献
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RGD序列普遍存在于细胞外基质蛋白中,并能为许多整合素蛋白所识别.利用 ELISA,SPR等技术,对表面固定的人工合成生物素-含 RGD环六肽[cyclo(-Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys-Gly-)]与人血小板整合素蛋白α_(Ⅱb)β_3的结合能力进行了检测结果表明,含RGD环六肽与生物素基团之间的间臂长度在 1.48~2.2 nm时, RGD序列才能有效进入α_(Ⅱb)β_3以头部的反应中心并发生结合反应;反应的平衡解离常数为 1.1μmol/L.为在固体表面研究整合素蛋白介导的细胞吸附过程提供了一个理想的模型系统. 相似文献
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以小鼠乳清酸蛋白基因(mWAP)调控区与人促红细胞生成素基因(hEPO)构建晤基因,经动物个体暂态表达方法确证hEPO可在乳特异表达后,用显微注射方法将融合基因导入小鼠受精卵,再将受精移植到假孕小鼠,获得86只G0代小鼠,经PCR-Southernblot及Southernblot证实,有58只整合阳性小鼠,整合率为67%,ELISAkit,dotELISA等方法检测小鼠39只,有16只表达阳性, 相似文献
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与辅酶不同,辅酶类似物ADP-ribose和SNAD与D-甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)的结合不表现协同性.用共晶方法和座滴汽相扩散技术培养出中国南海龙虾(Palinurus versicolor)GAPDH与ADP-ribose和SNAD复合物的晶体.X射线衍射数据分析表明它们的空间群均为C2,并具有类似晶胞参数,分别为 α= 15.280 nm, b= 10.035 nm, c= 12.831 nm, β=110.28°和α=15.341 nm,b=10.051 nm,c=12.844nm,β=110.48°.估算不对称单位合1个分子即4个亚基.与GAPDH全酶和酶蛋白晶体比较,属于不同晶型.这个结果提示着辅酶类似物的结合产生了比较大的酶构象变化,而且这个构象变化不同于辅酶结合引起的构象变化.旋转函数计算结果表明,这两种辅酶类似物复合物的四聚体也具有明显的222分子对称性.它们的结构分析并与全酶和酶蛋白比较将为了解酶的协同性机理提供一些有益的线索. 相似文献
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电喷雾离子阱质谱法鉴定人肝癌细胞双向凝胶电泳胶内蛋白质 总被引:3,自引:0,他引:3
质谱法鉴定双向电泳胶内蛋白质是目前蛋白质组研究中最重要的分析方法.采用电喷雾离子阱质谱法对人肝癌细胞系BEL-7404双向电泳后的胶内蛋白质进行分析鉴定.蛋白质经双向电泳分离,从凝胶上切割后,经过胰蛋白酶胶内酶解,通过液相色谱-电喷雾离子阱质谱分析肽谱和各肽段的氨基酸序外.根据肽谱和序列信息,经数据库检索,结合双向电泳分离获得的蛋白质分子量和等电点信息,对9种胶内蛋白质进行了鉴定.获得的氨基酸覆盖率为对21%~72.2%.其中两种蛋白质在SWISS-2DPAGE的肝细胞蛋白质组数据库中尚未报道.在此基础上,进一步探讨了所鉴定的蛋白质与肝癌发生的关系.这一方法的应用,为与疾病相关的蛋白质组研究提供了有效和快速的分析鉴定方法. 相似文献
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血管生成抑制因子TSF的设计、表达及其对血管生成的抑制效应 总被引:1,自引:0,他引:1
PF4的C-末端13肽和TSP1的429~459片段31肽通过Gly-Pro-Gly肽桥设计为融合蛋白TSF.采用pGEX-2T载体在 E.coliJM109中获得了 TSF蛋白的高效表达.采用 MTT方法、损伤细胞迁移实验。鸡胚绒毛尿囊膜实验和小鼠移植肿瘤抑制实验,测定了TSF及其相关物GST-TSF,PF4(58-70),TSP1(429~459)等对血管生成和肿瘤生长的抑制效应.结果显示TSF特异抑制小牛主动脉血管内皮细胞的生长,并有明显的剂量依赖关系;非常显著抑制血管内皮细胞的运动迁移;显著抑制鸡胚绒毛尿囊膜的新生血管生成;上述抑制活性TSF>>GST-TSF>PF4(58~70)>TSP1(429~459).TSF显著抑制小鼠Lewis肺癌的生长,1.0μmol/kg·d的TSF对Lewis肺癌的抑瘤率达到68.75%.结果说明TSF的重组设计是成功的,TSF为一个人工重组的有效的血管生成抑制因子. 相似文献