大肠杆菌O157中肽聚糖水解酶MpaA的克隆、表达、纯化及晶体学研究

采用分子克隆方法将来源于大肠杆菌O157的mpaA基因构建入pET-21b(+)表达载体.诱导MpaA蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中高效表达,通过Ni亲和层析、离子交换层析和凝胶过滤层析三步法纯化得到高纯度蛋白.使用气象扩散法进行蛋白质晶体生长的初步筛选与优化,得到MpaA蛋白质单晶,并使用X射线衍射仪进行衍射数据的收集与处理.MpaA晶体分辨率为0.26 nm,属于P31空间群,晶胞参数为a=5.989 3 nm,b=5.989 3 nm,c=12.987 0 nm,β=90.000 °.MpaA晶体衍射数据的收集为后续结构解析和催化机制的阐明提供了基础.     

基因功能研究新技术———新的晶体解析方法

建立了包含 5 0 0多种筛选条件的蛋白结晶系统 ,提高了获得蛋白晶体的概率 .目前 ,已对 3种新基因编码蛋白进行晶体培养 ,其中一种新基因蛋白已经得到单晶 ,为解析该蛋白结构做好了准备 .同时 ,结合已建立的大规模蛋白原核分泌表达与纯化技术系统 ,将对大量新基因编码蛋白进行晶体培养条件的筛选 ,为大规模结构生物学研究和新基因功能 结构关系分析奠定了基础 .已成功制备了耐热邻苯二酚 2 ,3 双加氧酶、耐热碱性磷酸酯酶的蛋白质晶体 ,并收集了Ｘ 衍射数据 .在国内首次获得了硒化耐热邻苯二酚 2 ,3 双加氧酶的晶体 ,在日本的同步辐射光源上…     

结核分枝杆菌酰基辅酶A脱氢酶的晶体学初步研究

结核病是人类健康的重要威胁. 随着多药耐药和广泛耐药结核分枝杆菌菌株,以及结核分枝杆菌与人类免疫缺陷病毒共感染现象的出现,寻找新的更安全有效的药物靶标迫在眉睫. 对来自结核分枝杆菌的潜在药物靶标进行蛋白三维结构的阐释是研究抗结核药物的有力手段之一. 酰基辅酶A 脱氢酶在结核分枝杆菌的脂肪酸合成酶系统中发挥着重要的作用,有可能成为潜在的药物靶标. 在大肠杆菌中克隆表达了酰基辅酶A 脱氢酶蛋白FadE5,经多步蛋白质的纯化和结晶条件的筛选后,获得具有衍射能力的蛋白质晶体,并收集了分辨率为0.29 nm 的X-射线衍射数据. 这些实验和衍射数据都为FadE5 蛋白的晶体结构与功能的研究奠定了基础.     

牙龈卟啉单胞菌蛋白酶Tpr的表达、纯化和初步晶体学研究

牙龈卟啉单胞菌是一种能够引起牙周炎的口腔病原菌,能够分泌许多种蛋白酶.这些蛋白酶在获得营养、逃脱宿主免疫、粘连组织细胞和其它疾病进程中发挥了重要作用,被认为是牙周炎的重要致病因子.其中一种蛋白酶是巯基蛋白酶Tpr,它能够降解许多常见蛋白酶的底物,其活性受到营养状态和钙离子浓度的调节.本实验在大肠杆菌中表达得到Tpr蛋白,经多种方法纯化后筛选获得蛋白质晶体.通过X射线衍射实验收集到分辨率达到0.20 nm的衍射数据,并使用软件HKL2000进行了处理.这些数据为解析Tpr3维晶体结构奠定了基础.     

铜绿假单胞菌PAO1亚精胺脱氢酶SpdH的表达、纯化和初步晶体学研究

铜绿假单胞菌是一种具有很强环境适应性的机会致病菌,感染后通常很难治愈从而造成很严重的后果.聚胺类化学物质在很多种生物体内广泛存在,并且在细胞内发挥多种重要的功能.铜绿假单胞菌 PAO1可以利用聚胺类物质作为菌体生长所需的唯一的碳源和氮源,亚精胺脱氢酶(SpdH)在铜绿假单胞菌亚精胺代谢过程中发挥重要的作用.本研究在大肠杆菌中成功表达了可溶性SpdH蛋白,并经过多种方法纯化后筛选获得了蛋白质晶体,通过X射线衍射实验收集到分辨率达到0.185 nm的衍射数据,并使用 HKL2000软件对衍射数据进行了处理,这些数据为SpdH结构的解析奠定了基础.     

单晶衍射测试条件对小分子化合物衍射数据的影响

为优化Rigaku Saturn 724单晶衍射仪测定小分子化合物结构的测试条件,本文测定了标准晶体胞嘧啶核苷的衍射数据,比较了曝光时间、晶体与面探测器的距离、样品温度和数据收集方式对于测试结果的影响.结果表明,合适的曝光时间、较低的温度、较小的晶体与探头的距离和以较高对称性收集数据有利于提高小分子化合物衍射数据的质量,解析结果较好.     

小立碗藓ACL1的晶体制备

乙烯是一种重要的植物激素,1-氨基环丙烷-1-羧酸合成酶(ACS)是高等植物乙烯合成途径中的限速酶和主要调节位点.然而低等陆生植物小立碗藓基因组编码的ACS同源蛋白PpACL1却被发现不具有ACS活性,而是具有β-C-S裂解酶活性.为了探究PpACL1与高等植物ACS酶活性差异的成因,采用结构生物学方法来进行研究.对小立碗藓PpACL1蛋白进行了表达、纯化和结晶,得到了大且棱角分明的块状PpACL1晶体,然而该晶体的X射线衍射分辨率却仅有0.7 nm左右.为得到可用于结构解析的PpACL1晶体,进行了添加剂的筛选以及PpACL1晶体的防冻处理等优化工作,使晶体衍射质量得到了显著提高,最终收集得到了最高分辨率达0.32 nm的PpACL1晶体衍射数据,初步具备了结构解析的条件.     

使用无细胞翻译体系合成尿激酶原突变体蛋白

应用无细胞翻译体系对KGD-尿激酶原重组蛋白质进行表达,表达产物以可溶状态存在,约占体系总蛋白质量分数的5%.使用亲和层析技术对表达产物进行纯化,纯化产物具有较好的分子均一性,并表现出明显的纤溶活性.     

GST-Jab1融合蛋白表达载体的构建及表达纯化

目的获取GST-Jab1蛋白,进一步研究Jab1的功能。方法以pMSCVneo-Jab1为模板,PCR扩增Jab1 DNA片断,EcoRI和XhoI双酶切后克隆至pGEX-5X-1表达载体,测序验证。将正确重组的pGEX-5X-1-Jab1表达质粒转化E.coli BL21,IPTG诱导后,超声破碎细胞,用GST琼脂糖珠对上述表达产物进行纯化,SDS-PAGE、Western Blot分析和鉴定诱导表达和纯化的GST-Jab1蛋白质。结果成功构建了pGEX-5X-1-Jab1重组表达载体,SDS-PAGE分析结果显示表达和纯化的蛋白质与融合蛋白GST-Jab1预期分子量一致,Western Blot鉴定结果证实纯化的蛋白质为GST-Jab1。结论成功地表达、纯化了GST-Jab1融合蛋白。     

酿酒酵母钙调蛋白依赖性激酶-2的过量表达及其在氧化胁迫应答中的作用初探

利用PCR方法扩增钙调蛋白依赖性激酶（CaM-dependent kinase ,cmk）-2基因的蛋白质编码序列,经限制性内切酶Kpn I和BamH I酶切后连接入空载体pYES2/NTA构建真核表达载体,构建的pYES2/NTA-cmk2转化酿酒酵母菌株BY4741进行真核表达.经诱导和收集细胞后,对酵母细胞用玻璃珠震荡破壁,收集上清液进行镍离子亲和层析,并纯化Cmk2,纯化的蛋白通过Western blot检测.并且初步研究了Cmk2在酵母细胞氧化胁迫应答中的作用.     

中心回线瞬变电磁法观测二次电位误差对计算全期视电阻率的影响研究

通过对均匀半空间中心回线装置瞬变电磁法核函数的研究,推导了中心回线瞬变电磁法观测二次电位误差对计算全期视电阻率的影响的表达式,发现在晚期微小的二次电位的误差将比早期对视电阻率的计算的影响更大,并介绍了目前对提高早晚期数据采集与处理质量的方法技术。     

基于过采样和卫星图像多特征融合的街区品质评估

城市街区的品质评估是城市规划中的重要步骤之一。针对已有街区品质评估模型中使用的街景图像采集位置和角度不统一造成的图像内容偏差问题,本文提出使用视角统一且易获取的卫星图像代替街景图像。同时考虑多种街区品质测度指标,将非图像型数据与图像型数据进行特征融合,从多角度进行城市街区品质表达,然后针对小样本和数据不平衡场景,结合机器学习中的随机过采样和随机森林（Random Forest,RF）,基于融合数据进行城市街区的品质评估。实验结果表明,本研究方法可以有效进行全面的城市街区品质表达,并有效降低过拟合,对比未使用过采样和多特征融合的方法,正确率提高约8个百分点。     

浅谈图书馆多媒体资料质量评价体系

在分析传统图书馆藏书质量评价方法的基础上,提出构建多媒体资料质量评价体系的方法和对策,并阐述了构建多媒体资料质量评价体系的意义。     

浅议高职院校图书馆的馆藏建设

从高职院校的人才培养目标和教学要求出发,指出高职院校图书馆的馆藏建设应体现学院专业特色,紧贴学院教学实际,并就如何提高藏书质量提出了一些对策。     

水质在线检测系统

介绍了一种水质在线检测系统，该系统用于水产养殖中，能随时了解水质情况，提高养殖效益。本系统利用MCS－51单片机的多机通信原理，其上位控制机和下位采集机均采用89C51单片机为CPU。同时介绍了上位控制机和下位采集机的设计以及上、下位机之间多机通信的实现。     

Large-scale analysis of the yeast genome by transposon tagging and gene disruption

Economical methods by which gene function may be analysed on a genomic scale are relatively scarce. To fill this need, we have developed a transposon-tagging strategy for the genome-wide analysis of disruption phenotypes, gene expression and protein localization, and have applied this method to the large-scale analysis of gene function in the budding yeast Saccharomyces cerevisiae. Here we present the largest collection of defined yeast mutants ever generated within a single genetic background--a collection of over 11,000 strains, each carrying a transposon inserted within a region of the genome expressed during vegetative growth and/or sporulation. These insertions affect nearly 2,000 annotated genes, representing about one-third of the 6,200 predicted genes in the yeast genome. We have used this collection to determine disruption phenotypes for nearly 8,000 strains using 20 different growth conditions; the resulting data sets were clustered to identify groups of functionally related genes. We have also identified over 300 previously non-annotated open reading frames and analysed by indirect immunofluorescence over 1,300 transposon-tagged proteins. In total, our study encompasses over 260,000 data points, constituting the largest functional analysis of the yeast genome ever undertaken.     

磁场CT成像的高速数据采集方法

介绍磁场ＣＴ成像的高速数据采集方法。通过对一对ＮｄＦｅＢ小圆柱磁体任一断面上磁场的测量与成像，说明此方法采集速度快，质量好。     

重组鲑鱼降钙素融合蛋白工程菌发酵工艺研究

为研究大肠杆菌表达重组鲑鱼降钙素融合蛋白(GST-sCT-Gly)工程菌的发酵工艺,采用瑞士比欧生物工程公司40 L发酵罐发酵,对影响工程菌生长和目的蛋白的表达条件进行优化;在优化条件下,以40 L发酵罐发酵工程菌,菌体收获量可达到57 g/L,目的蛋白表达量占总蛋白的23.5%;结果表明,研究确定的发酵工艺可以提高工程菌收获量及目的蛋白的表达量,且稳定可靠,可应用于生产。     

实验动物资源数据库数据质量建设的探讨*

摘要: 数据质量是数据资源共享的生命,是实现数据资源价值的必要保证。在实验动物资源数据库的建设中,数据 质量的保证,着重在数据测定和采集规范的制定及数据入库流程的规范化建设上。本文探讨实验动物资源数据库 数据质量的建设,介绍数据采集的制度建设和数据入库的审核流程设计,也提出了一些在数据库的后期运行中对 提升数据质量有帮助的思考,给正在从事或将要开展数据信息化建设的人员提供一些借鉴。     

浅谈中文社科藏书建设如何适应读者的阅读需求——基于哈尔滨工业大学图书馆借阅统计实例

对哈尔滨工业大学2009-2011年中文社科图书馆藏量、流通量、借阅率等数据进行了统计分析,提出了相应的服务对策和措施,以实现馆藏资源有效配置和提高流通阅览服务质量。