比较免疫磁珠法与A蛋白亲和层析法纯化兔抗血清中的IgG

优化了免疫磁珠分离法纯化抗血清的实验条件,并与A蛋白亲和层析法比较纯化效果,以求得到一种简便、快速、高效的纯化IgG方法.结果表明:从5只新西兰兔获得210 mL试管凝集效价高达1∶5 120的兔抗鳗弧菌抗血清,磁珠与IgG结合10 min达到平衡,其最大结合量为0.227 mg/mL;免疫磁珠分离法与A蛋白亲和层析法...     

AtPCS1基因的原核表达及多抗血清的制备

利用RT-PCR扩增拟南芥螯合肽合成酶(AtPCS1)基因全序列,构建原核表达载体pET28a-AtPCS1并测序.将该载体转化大肠杆菌BL21,用0.75mmol/LIPTG诱导融合蛋白AtPCS1-His的表达,纯化该融合蛋白.用纯化的融合蛋白免疫小鼠,ELISA法测定抗血清的效价可达1:2000.抗血清与融合蛋白及拟南芥总蛋白的western-blot结果表明:制备的抗血清具有较高的活性和特异性.     

中国明对虾ALFFc基因的原核表达与抗血清制备

利用聚合酶链式反应(PCR)技术和基因重组技术克隆了中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)抗脂多糖因子(ALFFc)基因的成熟肽编码序列并构建了pET-DsbA-ALFFc原核表达载体,转化E.coli BL21(DE3)后,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)筛选法获得了1株高表达量重组菌,并通过实验确定其最佳诱导条件为:菌液初始OD6000.7,IPTG终浓度0.8 mmol/L,培养温度37℃,诱导时间3 h.重组蛋白经纯化后免疫新西兰大白兔制备了抗血清,为进一步研究ALFFc的功能奠定了基础.     

八肋游仆虫第一类肽链释放因子eRF1a多克隆抗体的制备、纯化及鉴定

将八肋游仆虫第一类肽链释放因子基因eRF1a克隆入表达载体pRSETc,并在大肠杆菌Bl21(DE3)中进行诱导表达.表达形成的包含体经切胶回收,然后免疫大鼠制备抗血清.所获得的抗血清用Amersham Biosciences抗体纯化试剂盒进行纯化,SDS-PAGE电泳分析表明纯化后的抗体纯度很高.Western blotting印迹和ELISA鉴定结果表明抗体特异性好,效价为1∶5000.     

八肋游仆虫第一类肽链释放因子eRFla多克隆抗体的制备、纯化及鉴定

将八肋游仆虫第一类肽链释放因子基因eRFla克隆入表达载体pRSETc,并在大肠杆茵B121(DE3)中进行诱导表达.表达形成的包含体经切胶回收,然后免疫大鼠制备抗血清.所获得的抗血清用Amersham Biosciences抗体纯化试剂盒进行纯化,SDS-PAGE电泳分析表明纯化后的抗体纯度很高.Western blotting印迹和ELISA鉴定结果表明抗体特异性好,效价为1 5 000.     

重组猪生长激素抗体的制备与纯化

为了获得重组猪生长激素抗体,对重组猪生长激素融合基因的真核表达产物进行免疫印迹(Western blot)检测,将利用DNA重组技术构建的重组质粒pPGH020在大肠杆菌(E.coli)BL21中进行诱导表达.表达产物经Ni+亲和层析柱纯化,获得纯化的重组猪生长激素融合蛋白.然后以此为抗原免疫新西兰大白兔,获得多克隆抗体,抗体再经硫铵沉淀、透析和亲和层析纯化.Western印迹结果表明,该纯化抗体显示了良好的免疫反应,其灵敏度比兔抗rpGH抗血清提高50倍,为猪生长激素融合基因在真核细胞的表达及功能鉴定奠定了基础.     

芜菁皱缩病毒P38蛋白的原核表达及抗血清的制备

从感染芜菁皱缩病毒(TCV)的拟南芥中提取总RNA,通过反转录PCR(RT-PCR)扩增得到TCV的外壳蛋白基因P38.在目的基因ORF框两边引入酶切位点BamHⅠ和SacⅠ,并连接到表达载体pET30-a上,导入大肠杆菌BL21(DE3)中,37℃经0.5mM/L IPTG诱导6h后获得了分子量约为48kD的融合蛋白.经Ni-NTA纯化目的蛋白,注射大白兔制备抗血清.Western blot结果表明制备好的抗血清能成功检测感染TCV的拟南芥.     

抗人PD-1高亲和力抗血清的制备及其在PD-1免疫印迹分析中的应用

利用纯化的可溶性人PD-1胞外域(sPD-1)蛋白为免疫原免疫小鼠,获得抗血清.免疫印迹显示该抗血清与原核表达的sPD-1有特异性反应,但与某些菌体蛋白存在交叉反应.经菌体蛋白吸附法处理后,交叉反应明显减弱.以商业化抗人PD-1抗体和小鼠sPD-1抗血清分析经亲和层析富集的活化的Jurkat T细胞表达的PD-1,只有自制的抗血清鉴定到特异反应条带,其表观分子质量为49 ku.     

人新型肿瘤坏死因子在E.coli中的高效表达、纯化及诱导凋亡活性

采用PCR技术获得了新型的人肿瘤坏死因子基因，在153位氨基酸处引入突变，使Gly突变为Leu.将突变体hTNF基因克隆到表达载体pQE30中，SDS-PAGE结果显示经IPTG诱导后,hTNF基因获得大量表达，通过Ni金属螯合层析柱亲和层析获得到纯化的hTNF融合蛋白，Western blot结果表明hTNF蛋白可与抗TNF的抗血清知识性发生特异性反应，荧光染色实验检测了hTNF蛋白诱导细胞发生凋亡的活性。     

葡萄球菌GST-mTSST-1融合蛋白的纯化及其免疫活性鉴定

将DH5α/pGXmTSST基因工程菌用IPTG诱导表达,经超声波破碎、离心、收集上清再用谷胱甘肽琼脂糖凝胶柱(GS4B)亲和层析纯化金黄色葡萄球菌无毒诱变GST-mTSST-1融合蛋白.以SDS-PAGE分析该融合蛋白的表达量和纯度,经双向免疫琼脂扩散试验鉴定GST-mTSST-1融合蛋白的免疫活性.结果表明,GST-mTSST-1融合蛋白在重组菌中可溶性表达,通过GS4B胶亲和层析纯化,SDS-PAGE电泳分析得到纯度较高的目的蛋白,其相对分子质量约为47 000,与理论值一致.兔抗GST-mTSST-1抗血清可特异识别天然rTSST-1蛋白中与GST-mTSST-1融合蛋白相对应的抗原组份,证实GST-mTSST-1融合蛋白具有与野生型rTSST-1相同的表面抗原决定簇,具有较好的免疫原性.     

小鼠集落刺激因子（CSFs）的体外诱导研究

用体外淋巴细胞培养系统，对一些非淋巴因子诱导小鼠脾细胞产生集落刺激因子（ＣＳＦｓ）进行研究的结果发现，静止的小鼠脾细胞对原激酶（ＵＫ）不产生应答，只有当ＣｏｎＡ刺激后才能产生ＣＳＦｓ；表皮生长因子（ＥＧＦ）与ＣｏｎＡ协同作用能明显诱导ＣＳＦｓ的产生．人绒毛膜促性腺激素（ＨｃＧ）可直接作用于静止的脾细胞，使其产生ＣＳＦＳ．剂量依赖试验表明当ＵＫ为１６００ＩＵ／ｍｌ，ＥＧＦ为２０ｎｇ／ｍｌ，ＨＣＧ为４００ＩＵ／ｍｌ时所诱导的ＣＳＦｓ活性达到最高值．此外，ＣＳＦｓ的诱导还具有时间依赖关系．ＵＫ作用６０ｈ，ＥＧＦ和ＨＣＧ作用４８ｈ诱导产生的ＣＳＦｓ活性达到最高值．ＨＣＧ抗体中试验进一步说明ＨＣＧ可直接作用于脾细胞．联苯胺染色结果表明ＵＫ．ＥＧＦ和ＨＣＧ诱导的条件培养液中均不含红系集落刺激因子．     

输卵管妊娠保守适应证选择的研究

目的探讨彩色多普勒超声（CDFI）筛选合适药物保守治疗异位妊娠的临床价值。方法50例生命体征平稳的异位妊娠患者,在行CDFI检查后接受甲氨蝶呤（MTX）50mg/m。单次肌肉注射配合米非司酮150mg,三日口服,随访直至临床结局．分析成功与失败病例CDFI的特点和绒毛膜促性腺激素（HCG）的水平,并制作CDFI评分。结果CDFI能直接反映胚胎生命力,不同CDFI图像和血清HCG水平的病例,保守治疗成功率有很大差异。结论CDFI评分可应用于适合保守治疗异位妊娠病例的筛选。对评分〉9者,因失败率高,不推荐药物保守治疗。     

D—半乳糖亚急性中毒大鼠拟衰老生理生化改变

大鼠皮下注射Ｄ－半乳糖４８ｍｇ／ｋｇ４２天,导致体重,胸腺和脾重量的改变,血清ＳＯＤ活性下降,表明Ｄ－半乳糖诱发的拟衰老反应是建立衰老模型的可行途径。     

阿奇霉素在鸡组织中的消除规律及临床毒性研究

探讨了阿奇霉素对仔鸡的临床毒性及其在鸡组织中的消除规律.阿奇霉素以0、50、100和200 mg/L的水溶液供麻花肉鸡连续自由饮用14 d后,测定血清生化指标、脏器系数,并进行组织病理学观察;同时,阿奇霉素按10 mg/kg的剂量连续对肉鸡灌服7 d后测定体内各组织中的残留量.结果显示,高剂量组肉鸡的肝脏系数和谷丙转氨酶活性存在显著差异(P<0.05),阿奇霉素在肉鸡肝脏中的残留时间最长,其他依次是肾脏、脾脏、肌肉和血清.表明肉鸡的肝脏为阿奇霉素的中毒靶器官;根据其在鸡组织中的消除规律,阿奇霉素的肉鸡休药期可定为15 d.     

赤霉素GA3对小鼠机体氧化抗氧化系统平衡的影响

选择昆明种小鼠为试验动物,以超氧化物歧化酶、谷胱苷肽过氧化物酶活性及丙二醛含量为观察指标,研究赤霉素GA3在剂量(197,394和788 mg/kg)暴露条件下,小鼠脾脏、肝脏和心脏组织是否发生氧化应激.结果表明,394和788 mg/kg每千克体重bw剂量组脾脏超氧化物歧化酶、谷胱苷肽过氧化物酶活性有所下降,与对照组相比,分别降低了21.01%,29.02%和23.36%,35.03%,与对照组相比差异显著;肝脏超氧化物歧化酶、谷胱苷肽过氧化物酶活性分别降低了9.01%,13.05%和12.81%,16.17%,与对照组相比差异显著(P<0.05,P<0.01).同时赤霉素GA3处理后丙二醛含量显著升高,394,788 mg/kg bw剂量处理组脾脏和肝脏分别升高了19.06%,23.61%和22.33%,26.39%,与对照组相比差异显著(P<0.05,P<0.01);肾脏超氧化物歧化酶、谷胱苷肽过氧化物酶活性有所上升,与对照组相比,分别上升了22.34%和40.20%,丙二醛含量有所下降,与对照组相比分别下降了35.93%和30.05%;另外,赤霉素GA3处理后,对心脏的氧化应激作用与对照组相比差异不显著.表明赤霉素对小鼠不同组织器官的氧化应激表现不同,对肝脏、脾脏有氧化损伤作用,对心脏作用不明显.     

杏鲍菇菌糠多糖对小鼠脾指数、脾淋巴细胞增殖及免疫因子的影响

目的 观察杏鲍菇菌糠多糖对小鼠脾指数、脾淋巴细胞增殖及免疫因子的影响。方法 将超声法提取制备的杏鲍菇菌糠多糖与基础饲料混合制成低剂量(200 mg/kg)、中剂量(400 mg/kg)及高剂量(800 mg/kg)三种多糖饲料。用48只KM小鼠,随机分为空白组,杏鲍菇菌糠多糖低、中、高剂量组。连续饲养60 d后,测定小鼠脾指数、脾淋巴细胞增殖和免疫因子IFN-γ、TNF-α及IL-6含量指标。结果 杏鲍菇菌糠多糖组与空白组相比,低剂量组显著提高脾指数(P<0.05),中剂量组能显著提高脾指数和脾淋巴细胞增殖(P<0.05),同时能提高免疫因子TNF-α、IL-6含量(P<0.05);高剂量组能显著提高小鼠的IFN-γ含量(P<0.05),极显著提高小鼠的脾指数、脾淋巴细胞增殖、TNF-α及IL-6含量(P<0.01)。结论 杏鲍菇菌糠多糖对小鼠的脾指数、脾淋巴细胞增殖及免疫因子具有调节作用。     

熊去氧胆酸对小鼠酒精性肝损伤的保护作用

目的研究熊去氧胆酸(UDCA)对小鼠酒精性肝损伤的保护作用。方法将昆明种小鼠60只随机分为正常对照组、模型组、联苯双酯组(200mg/kg)、熊去氧胆酸低剂量组(UDCA-L(30mg/kg)),熊去氧胆酸中剂量组(UDCA-M(60 mg/kg))、熊去氧胆酸高剂量组(UDCA-H(120 mg/kg))。除正常对照组外,其余各组均灌胃给药,1次/d,连续10 d,灌胃容积为0.2 mL/10g。每日灌胃给药30 min后,除正常对照组灌胃等容积的蒸馏水外,其余各组小鼠均灌胃35度二锅头白酒16 m L/kg,造酒精性肝损伤模型。10 d后,观察小鼠肝脏、脾脏系数、检测血清ALT、AST,肝组织SOD、GSH、MDA、NO的水平。HE染色,观察肝病理变化。结果 UDCA各剂量组均可降低小鼠脾脏系数和血清ALT、AST活性,升高肝组织SOD、GSH活性,并降低肝组织MDA和NO含量(P 0.05或P0.01)。结论 UDCA对小鼠酒精性肝损伤有一定的保护作用。     

甲醛吸入对小鼠脾淋巴细胞分泌白细胞介素-2水平的影响

目的研究甲醛吸入对小鼠脾淋巴细胞分泌白细胞介素（IL）-2水平的影响。方法选用健康清洁级昆明种小鼠48只．随机分成4组（即阴性对照组．21．42．84mg／m3染毒组）．每组12只．用静式吸入染毒方式染毒12W处死后．测定小鼠脾淋巴细胞分泌IL-2的水平。结果甲醛吸入染毒组小鼠脾淋巴细胞分泌IL-2水平均随染毒剂量的升高而呈明显下降趋势（P〈0．05或,P〈0．01）。结论吸入甲醛可导致小鼠脾淋巴细胞分泌IL-2水平的下降。     

植物血球凝集素-Sepharose 4B亲和层析纯化人绒毛膜促性腺激素

本文报道一种新的制备和纯化HCG的方法．人工流产物经45％乙醇抽提、调pH5．2～5．4后40～60％乙醇分级、植物血球凝集素-Sepharose4B柱层析纯化后,低温酒精沉淀干燥,可得到比效价3777.8IU／mg的hCG精品．     

白鲜皮提取物对辐射损伤小鼠造血功能的保护作用

目的探讨白鲜皮乙醇提取物(AEDP)对辐射损伤小鼠造血系统的保护作用.方法将60只ICR小鼠随机分为正常对照组(NC)、照射对照组(IC)、AEDP低剂量(300 mg/kg)照射组(LI)、AEDP高剂量(600 mg/kg)照射组(HI)、AEDP低剂量(300 mg/kg)组(LD)、AEDP高剂量(600 mg/kg)组(HD),共6组,测定小鼠外周血白细胞数、骨髓有核细胞数、血清中铁含量.结果与照射对照组比较,AEDP高、低剂量组小鼠外周血白细胞数、骨髓有核细胞数显著增加(P0.05),血清中铁含量明显降低(P0.05).结论 AEDP可有效缓解辐射对造血系统造成的损伤.