四种电化学底物伏安酶联免疫分析法检测烟草花叶病毒

分别以对苯二胺，间氨基酚，邻联茴香胺和硫酸对氨基N，N－二乙基苯胺为辣根过氧化物酶（HRP）的电化学底物，这四种物质在HRP的催化下能够被H2O2氧化生成具有电化学活性的酶催化反应产物，可以用线性扫描二阶导数极谱法进行检测。将该法与抗原直接包被间接法（DAC－ELISA）相结合，应用于烟草花叶病毒（TMV）的检测，取得了较好的结果。     

二苯胺-H_2O_2-HRP伏安酶联免疫分析新体系的研究

提出了以二苯胺为底物的伏安酶联免疫分析新体系测定辣根过氧化物酶 (HRP)的方法 .通过线性扫描二阶导数极谱法测定 HRP催化 H2 O2 氧化二苯胺的产物 ,从而间接的测定 HRP的浓度 ,进而用于酶联免疫分析 .在 p H=8.5的 Britten-Robinson(BR)缓冲溶液中 ,二苯胺的氧化产物可以在 -0 .53V(vs.SCE)左右处产生一个灵敏的极谱还原峰 .在选定的最佳条件下 ,应用此峰测定 HRP的检测限可达 1 .0× 1 0 - 9g/m L,测定 HRP的线性范围是 4 .0× 1 0 - 9～ 2 .0× 1 0 - 7g/m L.另外 ,还推导了酶催化反应和电极还原反应方程式     

二苯胺—H2O2—HRP伏安酶联免疫分析新体系的研究

提出了以二苯胺为底物的伏安酶联免疫分析新体系测定辣根过氧化物酶（HRP）的方法.通过线性扫描二阶导数极谱法测定HRP催化H     

基于对羟基桂皮醇的新型酶联荧光免疫传感系统测定布氏杆菌抗体

以一种纯天然产物对羟基桂皮醇(4-hydroxycinnamic alcohol,HCA)为辣根过氧化物酶(HRP)底物,建立对羟基桂皮醇-辣根过氧化物酶-过氧化氢新体系。对羟基桂皮醇本身只有极弱的荧光,在HRP催化下可被H2O2氧化成二聚体产物,该二聚体在315nm的激发光下能发射波长为467nm的强荧光,并且反应体系荧光强度增加值与HRP量在一定浓度范围内呈线性相关。根据此关系和竞争型免疫定量原理,建立兔布氏杆菌抗体测定的荧光酶联免疫传感体系,并对免疫测定条件如pH值、HRP-BrAb用量、BSA和流速等进行优化。运用制备传感体系测定兔布氏杆菌抗体的质量浓度线性范围为2.7～90μg/L,检测限为2.7μg/L,相对标准偏差为4.6%;对羟基桂皮醇在空气中较稳定,对人体无毒害,在临床上可代替传统HRP底物。     

基于中空PtCu纳米复合材料的电化学传感界面构建及其对2-羟基蒽醌的测定

中空PtCu纳米复合材料因其内部的空心结构和粗糙的多孔表面,具有较大的比表面积和良好的渗透性,可以有效提高2-羟基蒽醌的电子传递速率和氧化峰电流.基于此,构建了一种高灵敏度、高选择性、可快速测定2-羟基蒽醌的电化学传感平台.利用循环伏安法和微分脉冲伏安法探讨了2-羟基蒽醌在中空PtCu纳米复合材料修饰电极上的电化学氧化行为,并对测定介质、修饰材料滴涂量及富集条件进行了优化.在优化条件下,该传感平台检测2-羟基蒽醌的线性范围为0.80nmol/L～50μmol/L,检出限为0.60nmol/L(R_(SN)=3).最后,将该方法成功应用于环境样品中2-羟基蒽醌的测定.     

以1-氯萘酚为底物的分光光度法测定辣根过氧化物酶

提出了1-氯萘酚-H2O2-辣根过氧化物酶(HRP)催化动力学光度法测定HRP的新方法.在pH 10.0的B-R缓冲溶液中,HRP催化H2O2氧化1-氯萘酚生成有色化合物,通过测定该有色化合物在波长为580 nm处的吸光度值,间接测定HRP的含量.在所选定的实验条件下,测定HRP的线性范围是3.0×10-9～5.0×10-7 g/mL,检测下限为2.0×10-9 g/mL.此方法可以应用于测定动植物体内的抗原和抗体.     

易错PCR法定向进化D-海因酶的初步研究

D-海因酶是生物转化D-型氨基酸的关键酶,在一定浓度M n2 存在下,经易错PCR法重复扩增,产物构建成pET-HDT重组子,并建立突变体文库.经筛选获得了内源DNA序列变异的变异株.进化酶催化底物海因水解的活性为亲本重组酶的1.3倍,催化底物对羟基苯海因水解的活性为亲本重组酶的2.4倍.     

漆树漆酶的催化氧化作用Ⅺ原儿茶酸酯类的漆酶酶催氧化

用分光光度法对原儿茶酸甲酯、正丁酯、正辛酯底物在不同ｐＨ条件下的离解和漆酶催化氧化反应进行了考察，测定了它们在ｐＨ＝８．０时的反应速度常数．结果表明，不为漆酶所喜爱的亲水性底物（原儿茶酸），经过适当疏水化处理，可以有效地改善其反应性和提高漆酶的催化活性．ＥＳＲ结果证明，这些底物的漆酶催化反应都经历了半醌自由基阴离子阶段；酯基的存在不能保证底物顺利地氧化成相应邻醌，用二苯乙二胺只能捕获到少量羟基化的邻醌     

辣根过氧化物酶在Au-Gemini纳米复合物修饰玻碳电极上的直接电化学

将辣根过氧化物酶(HRP)固定在Au-Gemini纳米复合物修饰的玻碳(GC)电极表面,制备了HRP修饰电极(HRP/Au-Gemini/GC),研究了HRP在Au-Gemini纳米复合膜中的直接电化学,考察了其对H_2O_2的电催化还原作用.研究表明,HRP在Au-Gemini纳米复合膜中发生了准可逆的电化学反应,其氧化峰峰电位(E_(pa))和还原峰峰电位(E_(pc))分别为-0.236 V和-0.273 V.HRP/Au-Gemini/GC修饰电极对H_2O_2具有良好的电催化还原响应,其表观米氏常数K_m=2.0×10~(-5)mol/L,H_2O_2浓度在1.0～7.0μmol/L范围内与催化电流呈线性关系.该研究为实现氧化还原酶的直接电子传递和生物传感器的构制提供了一种有效途径.     

基于芯片三电极系统检测辣根过氧化物酶的研究

本文设计一种芯片三电极系统,以金盘电极为工作电极,金片电极为辅助电极,Ag/ AgCl电极为参比电极,以邻联茴香胺（ODA）和邻苯二胺（OPD）两种常见的底物体系建立了检测辣 根过氧化物酶（HRP）的方法。HRP能够催化H2O2氧化ODA和OPD,其氧化产物在芯片金电极上分 别于-0.23 V和-0.50 V（vs.Ag/AgCl）处产生一个灵敏的还原峰,峰电流随HRP浓度增加而增大。对 于 ODA-H2O2体系,测定游离 HRP 的范围是 5.0×10-7～1.0×10-5 g/mL,检出限为 1.0×10-7 g/mL （3σ）。对于 OPD-H2O2体系,测定游离 HRP 的线性范围是 1.0×10-8～1.0×10-4 g/mL,检出限为 1.0×10-9 g/mL（3σ）。     

辣根过氧化物酶催化合成聚-4-羟基苯乙烯基吡啶

利用辣根过氧化物酶催化合成了新型共轭聚合物----聚-4-羟基苯乙烯基吡啶, 辣根过氧化物酶的催化氧化反应使底物中的苯环直接聚合. 荧光光谱研究结果表明, 聚合物具有良好的光致发光特性, 辣根过氧化物酶能有效地催化4-羟基苯乙烯基吡啶的聚 合反应.     

漆树漆酶的催化氧化作用(Ⅻ)——儿茶酚胺氧化中间体的捕获

在静止条件下，用分光光度法对３个儿茶酚胺底物的漆酶催化氧化行为进行了考察．ＥＳＲ结果证明，这些底物在弱碱性条件下的漆酶催化反应经历了半醌自由基阴离子的阶段，Ｍｇ２＋离子的存在，提高了邻苯半醌自由基的动力学稳定性．结果还表明，儿茶酚胺底物的漆酶催化氧化产物，结构十分复杂，用二苯乙二胺只能捕获到少量对位羟基化的邻醌．     

β—环糊精构筑模拟葡萄糖氧化酶的研究

采用β－环糊精（β－ＣＤ）二间羟基苯磺酸酯同三氯化铁形成的配合物构筑模拟葡萄糖氧化酶，与过氧化氢形成酶－底复合物，将葡萄糖催化氧化生成葡萄糖酸，研究了模拟酶浓度、葡萄糖浓度及温度对模拟酶催化反应的影响。     

共振光散射测定辣根过氧化物酶

辣根过氧化物酶(HRP)催化H2O2氧化四甲基联苯胺(TMB)生成大分子聚合物并产生强烈的共振光散射,由此建立了操作简单快速、高灵敏度测定HRP的新方法. 探讨了酸度、TMB浓度、H2O2浓度、温度等对散射信号的影响. 在最佳实验条件下测定HRP的线性范围为1×10-7～1×10-6 g/L,最低检出限1.8×10-8 g/L.     

漆酶的活性测定及催化单取代Fc—R氧化反应

在二乙二醇单丁醚／磷酸盐缓冲液体系中，以二苯铁为底物，用分光光度法测定湖北毛坝漆树漆酶的活性无副产物干扰，该方法简便，准确，易行，考察了漆树漆酶对２９个单取代二茂铁衍生物和左旋多巴的催化氧化反应，发现了漆酶１４个新的底物，并讨论了它们的构效关系。     

过氧化物模拟酶催化氧化测定过氧化氢

在 pH9．58 NH_4Cl－NH_3·H_2O缓冲体系中,氯化血红素(Hemin)呈现过氧化物酶的催化性能,催化过氧化氢氧化有机染料2,4－二羟基苯基荧光酮(2,3,7－tirhydroxy－9(3,5－dihydroxy)phenylfluorone,DHPF)降解褪色．本文研究了Hemin－DHPF－H_2O_2催化体系的褪色反应条件,拟定了测定H_2O_2高灵敏度的光分析方法,测定H_2O_2的线性范围为 0~2．40 × 10－5mol/L,表观摩尔吸光系数为8．06×10~3L·mol-1·cm-1,检测线为2．48×10~6mol·L-1．根据理论计算和实验现象,探讨了酶催化反应的可能反应机理．     

叠氮钠（NaN3）对ELISA检测酶活影响的探讨

用抗促黄体激素(LH)单克隆抗体为试样,进行了叠氮钠(NaN_3)在ELISA检测中影响辣根过氧化物酶(HRP)活性的研究。实验结果表明,当酶标二抗工作液中不舍NaN_3时,含0.02％NaN_3的ODP底物工作液能将其中的HRP全部失活;而当底物工作液中不舍NaN_3时,含0.02％NaN_3的酶标二抗工作液中的HRP有30％～60％失活。提出在以HRP作为标记酶的ELISA检测所用的部分缓冲液中废止使用NaN_3作为防腐剂。     

微水相酶催化乙酸三甲基硅甲酯的氨解反应

从不同来源的脂肪酶中筛选出能催化非天然底物－－乙酸三甲基硅甲酯的氨解反应且具有较高活性的脂肪酶，并首次探讨了氨源，有机介质，反应初始水活度和温度对该酶促反应的影响。     

金属胶束模拟辣根过氧化物酶催化过氧化氢氧化苯酚

研究了咪唑衍生物钴配合物Co(biap)·Cl2和胶束形成的金属胶束作为模拟辣根过氧化物酶(HRP)催化H2O2氧化苯酚反应;探讨了过氧化氢浓度、反应温度、酸度和胶束性质影响催化反应的原因;提出了金属胶束催化氧化苯酚的反应历程;建立了金属胶束催化苯酚氧化的动力学数学模型.     

基于酶生物催化沉积放大的日本血吸虫压电免疫传感器

提出了一种基于酶生物催化沉积放大的日本血吸虫压电免疫传感器.采用混合自组装单层膜技术在石英晶振金电极表面制备巯基丙酸(MPA)和巯基乙醇(ME)混合功能基底膜,通过偶联剂盐酸1 - 乙基 - 3 - (3 - 二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)及N - 羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化混合膜上富含的羧基基团用于日本血吸虫抗原(SjAg)的高效共价固定.通过夹心式免疫反应,将辣根过氧化酶(HRP)标记的羊抗兔二抗固定到晶体表面,利用HRP催化H2O2 氧化底物4 - 氯 - 1 - 萘酚在晶振表面形成不溶性沉积物,使免疫检测信号得以显著放大.在优化的实验条件下,该传感器可灵敏检测感染兔血清样中日本血吸虫抗体(SjAb)浓度(稀释比)的线性范围是1∶10 000～1∶100,可望用于日本血吸虫病的早期临床诊断.