双链RNA技术在果树病毒研究中的应用

含ＲＮＡ基因组的植物病毒在复制时会产生双链ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）。本文介绍了用ＣＦ－１１纤维素粉提取ｄｓＲＮＡ的步骤,并列举了ｄｓＲＮＡ在果树病毒研究中的应用,其主要应用有：１）果树病毒病及病原鉴定;２）病毒分化株系的鉴定;３）以ｄｓＲＮＡ为中介对病毒核酸序列进行测定;４）探针制备和ｃＤＮＡ克隆的获得;５）用于检测病毒卫星ＲＮＡ和亚基因组ＲＮＡ;６）侵染性测定和制备抗血清等方面的研究。     

冷却型科学级CCD荧光影像系统对细胞多参数的研究

应用冷却型科学级ＣＣＤ摄像式显微荧光影像系统对受精后２０ｄ（Ｓ２０）的红莲子叶细胞进行了ＤＮＡ,ＲＮＡ和总蛋白相对质量含量的多参数相关测量。     

脱落酸受体及其基因的分子免疫学研究(英文)

发展了研究脱落酸（ＡＢＡ）结合蛋白的两类免疫探针。其一,用ＡＢＡ－Ｃ１－ＢＳＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析柱纯化出ＡＢＡ结合蛋白,聚丙烯酰胺凝胶电泳显示该蛋白分子量为５６ＫＤ的一条带,它具有特异结合ＡＢＡ的能力（Ｋｄ＝２．０×１０－９ｍｏｌ／Ｌ）。当用蛋白水解酶Ｋ水解该蛋白,并用１％琼脂糖凝胶电泳时,发现其中存在约３００个核苷酸的ｒＲＮＡ分子。用识别ＡＢＡ结合蛋白的抗体筛选ｃＤＮＡ表达文库,从２００,０００个独立噬斑中获得１２０个编码玉米１７ｓＲＮＡ的ｃＤＮＡ克隆和１个ｃＤＮＡ编码结合蛋白的ｃＤＮＡ克隆（２４ｃＤＮＡ）。２４ｃＤＮＡ有１０７５个碱基对,含编码２５４个氨基酸的开放阅读框架。其二,制备了识别抗ＡＢＡ单克隆抗体的独特型抗体（ａｎｔｉ－Ｉｄ）,它具有模拟并竞争ＡＢＡ的能力。用上述两类免疫探针定位了植物细胞中的ＡＢＡ结合蛋白。发展了研究脱落酸（ＡＢＡ）结合蛋白的两类免疫探针。其一,用ＡＢＡ－Ｃ１－ＢＳＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析柱纯化出ＡＢＡ结合蛋白,聚丙烯酰胺凝胶电泳显示该蛋白分子量为５６ＫＤ的一条带,它具有特异结合ＡＢＡ的能力（Ｋｄ＝２．０×１０－９ｍｏｌ／Ｌ）。当用蛋白水解酶Ｋ水解该蛋?     

抗－DNA免疫复合物性质的研究

用聚乙二醇（ＰＥＧ）和硫酸铵从系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）患者血清中分离出免疫复合物（ＩＣ）和血浆核酸（ＰＮＡ）。分析结果表明，ＰＮＡ的主要成分是ＲＮＡ，仅有少量ＤＮＡ存在，并且ＰＮＡ中ＤＮＡ的ｄＧ＋ｄＣ含量（５５％）明显高于正常值（４２％）。一旦经过ＲＮａｓｅ处理，ＰＮＡ抑制抗－ＤＮＡ抗体结合ＤＮＡ的能力降低，说明抗－ＤＮＡ抗体和ＲＮＡ有交叉反应。动力学研究观察到，抗－ＤＮＡ免疫复合物中抗原抗体的分子比是１：１，结合能为３７ｋＪ／ｍｏｌ。这提示，除ＤＮＡ／抗－ＤＮＡ外，其他抗－ＤＮＡ免疫复合物也可能同ＳＬＥ患者的组织损伤有关。     

抗—DNA免疫复合物性质的研究

用聚乙二醇和硫酸铵从系统性红斑狼疮患血清中分离出免疫复合物和血浆核酸。分析结果表明，ＰＮＡ的主要成分是ＲＮＡ，仅有少量ＤＮＡ存在，并且ＰＮＡ中ＤＮＡ的ｄＧ＋ｄＣ含量（５５％）明显高于正常值（４２％）。一旦经过ＲＮａｓｅ处理，ＰＮＡ抑制抗－ＤＮＡ抗体结合ＤＮＡ的能力降低，说明抗－ＤＮＡ抗体和ＲＮＡ有交叉反应。动力学研究观察到，抗－ＤＮＡ免疫复合物中抗原抗体的分子比是１：１结合能为３７ｋＪ／ｍｏｌ．     

环丙沙星与DNA的作用机理研究

通过紫外光谱法与荧光光谱法研究了环丙沙星（ＣＰＬＸ）与ＤＮＡ的相互作用，实验结果表明，药物ＣＰＬＸ主要通过ＤＮＡ大沟或小沟插入到碱基对平面间而与ＤＮＡ相结合，并用ＣＰＬＸＣ７位的哌嗪环上正电性的４位胺基与ＤＮＡ负电性的磷酸基骨架间存在库仑作用，温度和盐浓度对其相互作用有一定影响。     

酿酒酵母中一种新的反义snoRNA分子的鉴定

核仁小分子ＲＮＡ（ｓｎｏＲＮＡ）是一类在真核生物核糖体生物合成过程中起重要作用的小分子ＲＮＡ．通过计算机直接分析国际分子生物学数据库及ＲＮＡ杂交分析、ｃＤＮＡ序列测定等方法,在酿酒酵母（Ｓａｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）中发现和鉴定了１个新的ｓｎｏＲＮＡ－Ｚ６ｓｎｏＲＮＡ．该ｓｎｏＲＮＡ长１０９个核苷酸,由位于酿酒酵母第１３号染色体上的１个独立基因编码．Ｚ６ｓｎｏＲＮＡ含有ｂｏｘＣ（ＵＧＡＵＧＡ）、ｂｏｘＤ（ＣＵＧＡ）等保守的结构元素,属于反义ｓｎｏＲＮＡ家族,即分子中有１段１１个核苷酸的片段与２５ＳｒＲＮＡ中１段保守核心序列互补,该ｓｎｏＲＮＡ片段连同其下游的ｂｏｘＤ共同指导与其互补的ｒＲＮＡ序列第２１９５位胞苷酸的２’－氧－核糖的甲基化．     

荧光染料离子缔合作用在荧光法测定微量DNA中的应用

建立了高灵敏荧光分光光度测定ＤＮＡ 和ＲＮＡ 的新方法． 方法的线性范围分别为０－０４ ～１－２０μｇ／ｍ Ｌ（ 鲑鱼精子ＳＭＤＮＡ 和小牛胸腺ＣＴＤＮＡ） , ０－１０ ～１－２０μｇ／ｍＬ（ 酵母ＲＮＡ） , 检测限分别为１７ｎｇ／ｍＬ（ＳＭＤＮＡ） , ２４ｎｇ／ｍＬ（ＣＴＤＮＡ） , ９８ｎｇ／ｍＬ（ＲＮＡ） ． 将方法用于实际样品金黄色葡萄球菌中ＤＮＡ 含量的测定, 结果满意．     

近红外荧光探针法测定核酸的研究

以阳离子花菁染料为荧光探针, 依近红外荧光猝灭测定核酸． 最大激发及发射波长分别为７６５ 、７９０ｎｍ ． 核酸测定的线性范围为０－０８ ～１－２μｇ／ｍ Ｌ（ＣＴＤＮＡ 及ＳＭ ＤＮＡ） , ０－１ ～１－６μｇ／ｍＬ（ｙｅａｓｔ ＲＮＡ） ．     

纺锤菌素－DNA相互作用的分子力学分析

文章介绍了纺锤菌素－ＤＮＡ相互作用分子力学研究的最新成果，对纺锤菌素－ＤＮＡ相互作用的性质、相互作用能作了详细的叙述，并与ｘ射线晶体衍射结果作了比较．在此基础上，我们对纺锤菌素ＤＮＡ相互作用进行了分子力学分析、考察了纺锤菌素与ｄ（Ａ６）、ｄ（Ｔ６），ｄ（ＴＡＴＡＴＡ）２、ｄ（ＣＧＣＧＣＧ）２和ｄ（ＣＧＣＧＡＡＴＴＣＧＣＧ）２的相互作用，得到了一些有益的结论．     

核黄素与脱氧核糖核酸相互作用的液滴荧光法研究

在接近人体生理pH条件下,采用紫外光谱法和液滴荧光法研究了核黄素和小牛胸腺DNA的相互作用.研究结果表明,随着DNA浓度增加,核黄素产生紫外光谱减色效应及荧光猝灭效应.进一步研究发现盐效应可使核黄素的荧光猝灭效应减小,由此推测核黄素与DNA之间可能存在嵌入作用和静电结合作用.通过计算和Scatchard作图求得该反应的结合常数与结合位点数.     

3,5-二碘水杨醛缩-2-氨基苯并噻唑schiff碱过渡金属配合物的合成及与DNA的作用

合成3,5-二碘水杨醛缩-2-氨基苯并噻唑schiff碱及其过渡金属（Cu,Zn,Ni,Co）的配合物.用元素分析、UV和IR吸收光谱、TG-DTA分析和摩尔电导率方法表征了配合物的组成和基本性质;通过荧光发射光谱、黏度及其与溴化乙锭（EB）的竞争实验研究了配合物与CT DNA的作用情况.结果表明,该系列配合物的组成为M（NO3）L·H2O;配合物与CT DNA的作用方式为插入模式.另外,4种配合物对藤黄微球菌的抑菌作用明显高于配体.     

荧光法研究苯甲酸氮芥铕配合物与DNA的相互作用

 在Tris-HCl(pH7.2)介质中,研究了1个新的苯甲酸氮芥铕(Ⅲ)配合物(Eu(BANM)₃·H₂O)与DNA相互作用的荧光性能,表明此配合物可作为DNA定量测定的荧光试剂.此外以溴化乙锭(EB)为荧光探针,对配合物与DNA的结合机理进行了探讨.结果证明DNA与配合物之间存在插入和沟结合2种非共价作用方式,配合物与DNA的平均结合常数为7.19×10⁵.     

产业集聚及其对创新绩效的影响机制研究

研究多样化和专业化的产业集聚及其对于创新绩效的影响机制。采用全国31个省份1999—2007年的面板数据,阐述了产业集聚对于创新绩效的主效应,分析了两种集聚形式的交互作用,探讨了环境不确定的调制作用。结果显示:产业的专业化和多样化集聚是相互补充的而不是相互排斥的,市场环境不确定性在其中起到重要的调制作用。     

随机可靠组播协议的改进

差错控制是保证组播可靠性的最基本技术,合理的缓存管理可以提高差错控制的效率.在随机可靠组播协议(RRMP)的基础上提出了改进的可靠组播协议(IRMP).IRMP使用短期缓存满足本地恢复需要,使用长期缓存满足远程恢复需要.在本地恢复时,利用组播发送重传请求,利用随机后退算法减少重复报文.在远程恢复时,使用指定修复节点(D...     

一种吲哚二甲川菁染料的合成、光谱性质及其应用

目的合成一种含吲哚环的二甲川菁染料,研究光谱性质、与生物分子的相互作用及其作为荧光探针在活细胞成像中的应用。方法采用UV-vis,1H NMR,IR,HR-MS分析确证产物的结构;采用吸收光谱和荧光光谱法研究二甲川菁染料在不同溶剂中的光谱性质,以及该染料在生理条件下与鲑鱼精DNA(DNA)、牛血清白蛋白(BSA)、溶菌酶、淀粉酶、糜蛋白酶和牛血红蛋白的相互作用;采用荧光倒置显微镜观察染料对K562白血病细胞的活细胞染色。结果该染料最大吸收波长(λmax)随着溶剂介电常数的增加出现蓝移。染料与DNA相互作用较强,且荧光强度随着DNA浓度的增加而增强,而其他5种生物大分子对染料的荧光强度影响不大。该染料可以穿透活细胞膜,对细胞核染色,可以清晰地看出核仁的荧光较亮,2 h后观察细胞仍有荧光。结论合成了一种光谱性质优良的二甲川菁染料,该染料对核酸(DNA/RNA)有较强的亲和性,属于活细胞通透性染料,是一种潜在的活细胞成像荧光探针。     

锌(Ⅱ)配合物与DNA作用的研究

采用紫外可见光谱、荧光光谱等光谱方法研究了配离子[zn(phen)2]^2 (phen=邻菲咯啉)与小牛胸腺DNA的相互作用。在DNA存在下，配合物的紫外吸收光谱产生了明显的减色效应。DNA的碱变性曲线在配合物的存在下向pH值增大的方向移动，增色效应减小．荧光光谱表明EB(溴化乙锭)-DNA体系的荧光强度随[zn(phen)2]^2 的加入而迅速减弱，表明锌的邻菲咯啉配合物与DNA之间发生了插入作用。     

缩氨基硫脲类钯抗癌配合物初步筛选与作用机理的荧光法研究

新合成了8-乙酰基-4-甲基-7羟基香豆素缩氨基硫脲、3-乙酰基-7-羟基香豆素缩氨基硫脲及其与钯的配合物,以溴化乙锭为荧光探针,研究了配合物与小牛胸腺DNA的作用机制,初步判定了配合物的抗癌活性,计算了与DNA的结合常数。研究表明荧光筛选法结果与体外筛选的四唑盐染色法结果基本一致。     

Study the effects of divalent metallic ions on the combination of DNA and histones with fluorescence anisotropy assays

The effects of divalent ions(Mn2 ,Mg2 ,Ca2 ) on the interaction between DNA and histone are studied using a fluorescence anisotropy assay. Fluorescence anisotropies of DNA and DNA-histone in the presence of divalent ions(Mn2 ,Mg2 ,Ca2 ) are measured. The results indicate that histone reduces the fluorescence anisotropy of lambda DNA while the divalent ions(Mn2 ,Mg2 ,Ca2 ) significantly enhance the fluorescence anisotropy. Compared to the case of DNA incubated with histone alone,there are more histones binding to DNA when divalent ion,histone and DNA are incubated together. We also find that Mn2 makes the DNA-histone complexes more condensed than the other ions do.     

环状DNApUC118与配体小檗碱相互作用的荧光特征

采用荧光光谱法对环状双譬超螺旋DNA质粒pUC118与小檗碱(Berberine)相互作用方式进行了初步探讨，在pH=3.20的甘氨酸一盐酸缓冲液中，二者相互作用的荧光强度达到最大；二者相互作用达到稳态时，一个小檗碱分子约结合七个碱基对；二者的结合除嵌插方式外，还存在非特异的静电作用；不同的荧光猝灭荆对二者相互作用荧光强度的猝灭程度是不同的，游离的水合状态小檗碱最容易被[Fe(CN)6]^-4猝灭。