α3 nAChRs亚基基因中定点氨基酸的突变研究

为了利用重叠延伸PCR技术对α3亚基中指定的氨基酸进行定点突变,以便为今后深入研究烟碱型乙酰胆碱受体(Nicotinic acetylcholine receptors,nAChRs)中关键氨基酸的功能及与药物作用的分子机制奠定基础,本研究以α3 nAChRs亚基基因作为模板,利用重叠延伸PCR技术对α3亚基中指定的氨基酸进行了定点突变,突变后的基因片段被连接到pMDTM18-T载体上,并通过基因测序来验证突变的正确性.结果表明:通过重叠延伸PCR法已将α3 nAChR N端第174位的丙氨酸(Alanine,Ala,A)成功突变为谷氨酸(Glutamic acid,Glu,E).由此认为:重叠延伸PCR法成功实现了α3 nAChRs亚基基因中定点氨基酸的突变,该方法可为更多受体突变型的建立提供借鉴,也可为研究nAChRs中关键氨基酸的功能以及药物与nAChRs相互作用的分子机制奠定基础.     

棒状链霉菌扩环酶R306位点的定点突变

目的:通过对棒状链霉菌的脱乙酰氧基头孢菌素C合酶(DAOCS)C末端R306位点突变,改变酶的活力和底物专一性。方法:利用生物信息学和空间结构分析推测,利用定点突变技术,对DAOCS的C-末端R306位点进行定点突变。结果:将DAOCS的C末端R306位点突变为其它3种性质相异的氨基酸,显示酶的活力和底物专一性都有一定改变。结论:DAOCS的C末端修饰对于提高酶活力或改变酶的底物专一性是一个非常有效的策略。     

蛋白质分子的定点突变和化学修饰

回顾蛋白质工程研究及应用技术、手段和方法,分析定点突变及化学修饰在改造蛋白质分子结构与功能方面的异同。定点突变技术可以随心所欲地在已知DNA序列中取代、插入或缺失一定长度的核苷酸片段。该方法与使用化学因素导致突变的方法相比,具有突变率高、简单易行、重复性好的特点。     

位点特异性DNA内切酶在植物基因打靶中的应用

基因打靶是在基因组指定位点插入、删除和替换DNA序列的技术。由于同源重组频率低,在植物中高效的基因打靶技术一直未被建立,制约了植物基因功能和分子育种的研究。近年来,人工设计的锌指蛋白和TAL效应因子DNA结合结构域实现了对全新DNA序列的识别。人工设计的DNA结合结构域连接核酸内切酶能在基因组指定位点创造双链DNA断裂,进而产生定点突变和促进同源重组。笔者重点介绍锌指核酸酶和TAL效应因子核酸酶在植物基因组定点突变和基因打靶中的研究进展,并对目前存在的问题进行分析。     

基因编辑技术在哺乳动物上的研究应用进展

基因编辑技术是近几年兴起的对目标基因组进行高效、定点、精准编辑的技术,主要通过人工核酸内切酶在基因组特定位点进行双链断裂,从而引入DNA片段插入或缺失,实现靶位点的基因敲除、基因定点突变和基因修复等.基因编辑技术被广泛运用在多种动物上,取得了重要成果,前景广阔.文章对基因编辑的发展历程以及在多种哺乳动物上的研究现状和进展进行综述,并对技术瓶颈进行讨论.     

Hlrg基因定点突变体的构建及其对HepG2细胞的影响

构建Hlrg基因的定点突变体,研究突变Hlrg基因表达的蛋白对HepG2细胞的影响.首先利用数据库对Hlrg基因的结构特点进行分析,在此基础上用PCR法构建Hlrg基因的定点突变体.将突变的Hlrg基因克隆到pcDNA3.1（＋）载体中,并稳定转染到HepG2细胞中.流式细胞仪和透射电镜观察突变基因表达的蛋白对HepG2细胞的影响.结果获得了针对Hlrg基因的定点突变体,亮氨酸拉链中的第二个亮氨酸被突变成丝氨酸.发现稳定表达HLrgm蛋白的HepG2细胞中出现一定比例的凋亡细胞.表明构建了Hlrg基因定点突变体,为进一步的功能研究奠定了基础.     

CORRECT介导的人HBB-28基因定点突变细胞株的建立及其应用

为利用CRISPR/Cas9系统建立一种新型、高效的定点突变和基因修复的新方法——引入阻断突变碱基的CORRECT(Consecutive re-Guide or re-Cas steps to Erase CRISPR/Cas blocked Targets)方法，本研究使用规律间隔成簇短回文重复序列(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats,CRISPR)在线设计工具，针对人β-珠蛋白(HBB)基因设计小向导RNA (small guide RNA，sgRNA)，构建PX459-sgRNA-Cas9共表达质粒，然后以含阻断突变碱基(G>T)的单链寡核苷酸(single-stranded Oligo DNA Nucleotides,ssODNs)为同源模板，通过脂质体转染HEK293T细胞，并通过Sanger测序和酶切(T7EⅠ和AatⅡ)检测编辑效率，最后通过Sanger 测序分析敲除HBB单克隆细胞的基因型。结果表明，成功构建β-地中海贫血(简称β-地贫)HBB-28(A>G)基因纯合定点突变的HEK293T细胞株。阻断突变碱基优化的ssODNs减少Cas9蛋白对靶点的再次编辑，提高了整合效率。本研究建立的新型点突变技术可以高效获得纯合定点突变的HEK293T细胞株，既为单碱基突变疾病模型的建立提供实验依据，又为基因修复治疗提供高效的方法。     

快速点突变的优化方法

DNA传统的快速点突变方法即"一步突变法"虽然可使DNA产生突变,但效率不高.市场上出售的快速点突变试剂盒,其突变效率可达80%以上,然而价钱昂贵.本文论述的快速点突变方法,在传统的"一步突变法"基础上做了改进,通过对引物突变点5′端序列Tm值的确定,使引物设计变得简单,初学者可轻松完成DNA的定点突变,而且大大降低了成本,适用于对大量DNA进行定点突变试验.试验结果表明:这种经过改良的方法突变率为96.22%,可为研究人员的试验带来便利,是一种值得推广的新方法.     

天花粉突变体的分子模建及静电势计算：活性残基在静 …

用分子动力学模拟和静电学计算研究天花粉蛋白在１２０－１２３位的定点突变行为。结果揭示了在突变区附近静电特性和局域构象上的明显的变化，并提出了有关突变的一个可能的物理学的解释。结果建议Ｒ１２２残基对１２０－１２３活性区是至关重要的。     

青霉素G酰化酶调节基因定点诱变的研究

构建了大肠杆菌中青霉素G酰化酶（PAC）的调节基因（pacR）翻译起始密码定点突变株。对突变后PAC的表达调控特征进行了研究，结果表明：突变株的pac基因表达后能正常加工成24ku、65ku的α亚基和β亚基；突变后，虽然PAC表达仍需要苯乙酸诱导，但是，可诱导性提高，形成低组成型表达，无葡萄糖有分解代谢物阻遏效应，因而pacR对PAC表达水平存在着影响，pacR基因是葡萄糖以及它的分解代谢物在分子水平上影响PAC表达的另一作用因素。采用突变株进行发酵生产中，PAC产量较亲株提高3倍，而且可以采用葡萄糖作为碳源，有利于改善PAC的生产。     

关于软交换技术的浅析

首先对软交换技术做了简要介绍,并针对目前软交换设备所能够提供的业务,提出了软交换网的应用及对采用软交换技术组网中应注意的问题进行了分析.     

用EDA技术设计LED大屏幕显示系统的总控模块

EDA技术是当今数字系统设计领域出现的一种革命性的新设计技术．作为该技术的应用研究，阐述在一个异步全彩色LED大屏幕显示系统的设计中采用EDA技术完成其总控模块设计的可行性和具体设计方法．以此显示EDA技术的技术优势和所设计LED大屏幕显示系统的高集成度、高可靠性和高灵活性等特点．     

真空冷冻干燥技术在食品工业中的应用

冻干技术是食品干燥技术领域中科技含量高、涉及面广的一门技术。为了在食品工业中推广该技术,本文阐述了冻干技术的原理、工艺操作、冻干食品的特点及冻干技术在食品工业中的应用。随着真空冷冻干燥技术的深入研究,该技术将成为今后一个时期食品工业的发展方向。     

多代高新技术竞争扩散模型

通常扩散源企业连续推出多代高新技术,在市场上相互竞争、共同扩散.以企业综合质量、高新技术的性能和质量为主要变量,构建了多代高新技术竞争扩散的供求均衡牛型,并对高新技术扩散和采用的动态性进行了分析和模拟.指出更高综合质量的企业总是更早采用新一代高新技术,并且随着新一代技术的引入,上代高新技术的应用率随之降低,更上一代技术则失去市场.     

煤层气多分支水平井钻井技术研究

煤层气多分支水平井钻井技术的应用极大地促进了煤层气的开发,是煤层气开发的主要工艺之一。本文简要分析了煤层气多分支水平井的增产机理和基本模式,并剖析了该工艺中井位优选,井眼轨迹控制,钻井液设计等重要环节的技术要点。     

浅谈流媒体技术在IPTV系统中的应用

IPTV技术是一项系统技术,包括多方面的内容,本文主要介绍了IPTV技术中的流媒体技术,讨论流媒体技术原理,以及流媒体技术在IPTV系统中的应用。     

海洋环境监测技术及仪器装备的发展现状与趋势

随着陆地资源逐渐枯竭,向海洋要资源、要空间已成为涉海各国的必然选择,导致了海洋技术领域的竞争愈演愈烈,从而促进了海洋环境监测技术及仪器装备的高速发展,这对我国海洋核心技术的研究提出了更高的要求。从海洋环境监测技术领域所涉及的海洋环境监测平台技术、传感技术及数据综合处理技术等3个方面进行了分析总结,在明确技术及仪器装备现状的前提下找出中国与国外相关研究领域存在的差距,并首次对海洋环境监测数据综合处理技术进行了全面梳理,在此基础上根据其发展趋势对海洋环境监测技术及仪器装备的未来前景进行了展望。指出该领域仪器装备在目前已经实现的模块化、系列化基础上,将向网络化、智能化方向发展,本文旨在对我国海洋环境监测技术领域的发展规划、技术研究、装备研制及工程应用等方面的工作提供建议。     

RFID技术在西部高校图书馆的应用研究

随着RFID技术在生产、物流、交通运输等行业的广泛应用,越来越多的图书馆开始关注此项技术。根据西部高校图书馆的发展现状,从需求、经济、技术3个方面对RFID技术在西部高校图书馆中的可行性应用进行了分析研究,探讨了使用该技术将面临的主要问题。     

基于Gabor小波的特征提取技术应用

介绍人脸识别和小波技术,分析其工作原理,给出Gabor小波技术的基本特征和特征提取方法,提出了把Gabor小波技术应用于人脸识别技术中的实验步骤。     

欧洲颠覆性太空技术搜寻方法体系研究

 欧洲颠覆性太空技术搜寻计划因其系统化的优势而受到关注。研究了欧洲颠覆性太空技术搜寻初选、评价环节，分析了颠覆性太空技术的理论基础、基于STEP框架的评价标准和评价方法，介绍了颠覆性太空技术的技术路线图。通过对欧洲颠覆性太空技术方法体系在理论、方法、实施3个层面经验的总结，得出推动中国颠覆性技术创新的启示，即重视技术应用场景分析，建立专家履历信息平台，构建多源信息支撑体系，加强技术发展规划管理等。