水仙胚性愈伤的获得及农杆菌介导GUS基因的遗传转化

用正交实验设计对前期影响水仙胚性愈伤诱导和分化关联性大的因素进行综合分析,结果显示,培养基类型、激素及处理方式、不同添加物等对水仙外植体胚性愈伤诱导及分化的影响是基于培养基的多因素协同效应。水仙适宜胚性愈伤诱导培养基是:改良MB+NAA(0.2 mg/L)+6BA(2 mg/L)+ABA (2 mg/L)+AgNO3(5 mg/L);适宜的分化培养基是：改良N6+2,4D(0.5 mg/L)+6BA(2.5 mg/L)+NAA(0.2 mg/L)+ABA(2 mg/L)。实验中观察到水仙体细胞胚的发生,在胚性愈伤诱导和分化体系优化基础上实现农杆菌介导GUS基因转化,稳定表达抗性愈伤GUS染色显示最佳胚性愈伤诱导培养基能促进水仙外植体感受态的形成,有利于外源基因的接受,PCR检测表明实验中获得3株转GUS基因阳性植株。     

青钱柳幼胚愈伤组织的诱导

以青钱柳幼胚为外植体,研究了不同幼胚期、基本培养基种类、植物生长调节剂种类及其浓度配比对愈伤组织诱导的影响。结果表明,不同发育期的幼胚诱导出的愈伤组织在形态上差异较大,青钱柳种子发育至子叶胚中期较适合愈伤组织的诱导。青钱柳幼胚愈伤诱导时基本培养基以改良DKW效果最佳,诱导率达到了88.89%,且无褐化现象;含2,4-D与KT组合的培养基较适宜愈伤组织的诱导,其中2,4-D(0.5 mg/L)+KT(2.0 mg/L)和2,4-D(1.0 mg/L)+KT(1.0 mg/L)的组合对青钱柳幼胚诱导愈伤组织效果最佳,诱导率分别为80.00%和78.33%。     

中国七叶树悬浮培养体细胞球形胚的增殖与发育研究

以中国七叶树(Aesculus chinensis Bunge)的胚性愈伤组织为材料,进行悬浮培养诱导体胚增殖和发育研究。在MS+2,4D(3 mg/L)+NAA(1 mg/L)+KNO3(1.9 mg/L)+蔗糖(30 g/L)的液体培养基中可获得同步化程度较高的球形胚;采用MS+2,4D(2 mg/L)+KT(0.2 mg/L)+蔗糖(40 g/L)和MS+2,4D(3 mg/L)+BA(0.5 mg/L)+蔗糖(40 g/L),两种培养基均可使体细胞胚保持在球形胚阶段;而MS+TDZ(0.02 mg/L)+蔗糖(30 g/L)可有效解除对球形胚发育的阻遏,促使子叶胚的形成;建立了球形胚增殖和分化的两个悬浮培养体系,同时跟踪观测了液体培养基的pH变化,球形胚增殖方式和球形胚启动和发育动态,以及悬浮培养过程中体胚的形态结构变化。     

枸杞体细胞胚高频发生体系的建立

实验以枸杞种子为材料,培育成无菌苗后,取叶片和下胚轴进行诱导愈伤组织,在含有2,4-D的MS培养基上继代培养并诱导体细胞胚发生.通过从不同时期的胚性愈伤组织中剥离不同时期的体细胞胚,对它们进行形态学观察和发生频率统计,进而研究不同枸杞品种、2,4-D质量浓度、继代培养次数、不同部位和温度对枸杞体细胞胚发生的影响.结果表明:在含有0.2 mg/L2,4-D的MS培养基上,继代3次的愈伤组织经诱导分化体细胞胚可达496个/g;同时还探讨了枸杞体细胞胚高频发生再生体系建立的关键影响因素,为体细胞胚发生机理的研究和应用提供依据.     

珙桐未成熟胚的萌发及植株再生的研究

为了建立珙桐的再生体系,试验以珙桐未成熟胚为外植体,获得了再生植株。采用正交设计和极差分析法对影响未成熟胚再生植株的四种主要因素α-萘乙酸(α-Naphthaleneacetic acid,NAA)、噻苯隆(Thidiazuron,TDZ)、赤霉素(gibberellic acid,GA)和活性炭(active carbon,AC)进行了研究。结果表明:胚萌发的最佳培养基组合为WPM+0.09mg/L NAA+0.6mg/L TDZ+0.9 mg/L GA+0.8g/LAC,芽诱导率为71.43%;萌发胚芽分化及生根的最佳培养基组合为WPM培养基+0.1mg/L NAA+3mg/L TDZ+6mg/L GA+1.2g/LAC,再生率为50%。AC能促进下胚轴变绿和子叶变绿,NAA、GA对解除胚的形态后熟有重要作用。GA和TDZ在芽分化及生根过程中起主导作用。     

抗松材线虫病马尾松体胚发生与植株再生条件的优化

【目的】为使抗松材线虫病马尾松(Pinus massoniana Lamb.)快速大规模繁殖,对抗性马尾松体细胞胚胎发生和植株再生条件进行优化。【方法】以抗病马尾松未成熟合子胚为材料,探讨胚性愈伤组织的诱导、增殖与维持、分化成熟以及萌发的合适培养条件,并对体细胞胚进行生根诱导,对再生植株进行壮苗培养以及驯化移栽。【结果】以LP为基本培养基,添加2.0 mg/L 2,4-D(二氯苯氧乙酸)和1.0 mg/L 6-BA(6-苄氨基腺嘌呤),抗性马尾松胚性愈伤组织诱导率最高达27.8%。在胚性愈伤组织增殖维持过程中,悬浮培养中的增殖系数和同步化程度都显著高于固体培养,且经过悬浮培养的细胞系分化能力更强。萌发过程中只有少量能顺利分化出根系,未能顺利分化出根的体胚于添加适量 IBA和 NAA的生根培养基中能够更好地生根。壮苗培养过程中,添加0.01 mg/L油菜素内酯有助于体胚苗的生长。体胚苗在驯化移栽时不同大小的苗移栽成活率相差较大,5 cm左右的体胚苗成活率最高达90.3%。【结论】生长素2,4-D和6-BA组合(2.0 mg/L和1.0 mg/L)对抗性马尾松胚性愈伤组织诱导率较好; 悬浮培养后的细胞系更利于诱导体胚,适宜浓度的IBA和NAA(1.0 mg/L和0.2 mg/L)能够促进体胚苗根系生长。在壮苗培养基中添加适量油菜素内酯能够促进抗性马尾松再生植株的生长,待苗长至5 cm左右移栽较好。     

石防风胚性愈伤组织的诱导和体细胞胚的发生

石防风幼苗的根在含0.1-50mg/L 2,4-D的 MS 培养基中能诱导产生愈伤组织,最适浓度为0.5mg/L.愈伤组织来源于中柱内部的细胞。在0.5mg/L2,4-D 存在下,细胞分裂生长并发育至胚性细胞团或原胚,转移至无激素培养基后,愈伤组织表面及内部分化出发育阶段不同的体细胞胚,最后发育成为完整植株。在初生幼苗的胚轴上(有时在根或叶)常有次级胚的发生,它们能继续长成次级苗,并在苗上再次长胚,如此不断,直至多次。由此可见石防风体细胞胚发生的能力,是十分强大的。     

苜蓿不同品种愈伤组织诱导、分化和再生能力的比较研究

以新疆大叶、甘农1号、甘农3号和陇东4个苜蓿品种的下胚轴、子叶和子叶节为外植体,比较了不同苜蓿品种及外植体愈伤组织诱导、分化及再生能力的差异,研究了不同浓度及配比的植物生长调节物质对愈伤组织诱导和芽分化再生的影响。结果表明,4个苜蓿品种再生能力依次为新疆大叶>甘农3号>甘农1号>陇东苜蓿,下胚轴外植体在愈伤诱导培养基(MS 2mg/L2,4-D 0.2mg/LZT)上出愈率分别为94%,83%,71%和58%,胚性愈伤组织在分化培养基(MS 0.2mg/LZT 50mg/L谷氨酰胺)上分化率分别为15.8%,9.2%,7.1%和4.5%;下胚轴再生能力优于子叶节和子叶;丛生芽在生根培养基(1/2MS)上生成完整的根;各品种的再生苜蓿植株均成功移栽到土壤中,成活率100%。上述4个苜蓿品种分化再生能力的阶段性研究结果为今后通过基因工程方法改良苜蓿奠定了基础。     

柳杉种子合子胚的愈伤组织诱导及植株再生

为探索柳杉种子合子胚的愈伤组织诱导技术,选取柳杉4个家系,采集其尚未完全成熟的种子进行愈伤组织的诱导,并经器官发生再生途径得到再生植株。利用6-BA、2,4-D等激素种类及其浓度的正交设计,研究各因素及其交互作用对柳杉种子合子胚愈伤组织诱导的影响。结果发现:柳杉4个家系的愈伤组织诱导量在8月中旬采种时呈明显上升,至8月底时各家系的子叶胚愈伤诱导率达到最高,其中57号家系愈伤诱导率最高,达92%。柳杉4个家系,在不同激素组合中愈伤诱导率存在着一定的差异。其中57号家系子叶胚在DCR+6-BA1.0 mg/L+2,4-D 1.0 mg/L培养时,愈伤组织诱导率达到最高,且诱导出来的愈伤组织状态为白色、干燥、无针状突起,结构紧密。愈伤组织在DCR培养基上成功获得再生植株。     

外源激素对防风体细胞胚发生和发育的影响

目的探讨生长素和细胞分裂素对防风体细胞胚发生和发育过程的影响。方法组织培养和石蜡切片。结果0．5mg／L2，4-D是诱导胚性愈伤组织最适宜的生长素浓度，0．5mg／LNAA在胚性愈伤组织的长期继代培养中替代0．5mg／L2，4-D可减少畸形胚的发生，NAA浓度降至0．2mg／L时促进体细胞胚的发生和分化；生长素加一定比例的细胞分裂素(6-BA或KT)可有效促进体细胞胚的发生；通过逐步降低生长素和细胞分裂素的浓度，可促进体细胞胚的分化和生长；体细胞胚在无附加激素或附加激素浓度分别低于0．2mg／LNAA和0．5mg／L6-BA的MS培养基上，均能发育成完整的植株。结论一定浓度的生长素是诱导防风胚性愈伤组织的关键因素，细胞分裂素在体细胞胚的发生和发育过程中起协同作用。     

胡萝卜体细胞胚胎发生 Ⅱ胡萝卜体细胞胚的组织学和细胞起源

通过大量的叶柄外植体培养系统切片观察及悬浮细胞和平板培养证明,胡萝卜体细胞胚一般是由单个胚性细胞分裂经2,3,4细胞的原胚阶段发育为胚状体的,进一步证明了其单细胞的起源。实验中也观察到有由愈伤组织细胞团内部的多个细胞共同形成胚状体的现象,和文献中所述的多细胞起源十分类似。     

珍稀濒危植物四合木体细胞胚胎发生的组织学观察

通过对四合木愈伤组织诱导和体细胞胚胎形成过程中组织学观察的研究,得出以下结果：１）茎尖、茎段、肉质叶和花蕾四种外植体中花蕾的愈伤组织诱导率最高,其中花蕾的肉质花托是四合木体细胞胚胎发生的良好外植体来源;２）基本２基为改良Ｍｓ固体培养基;ａ．附加０．１ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ和０．５ｍｇ／Ｌ,２,４－Ｄ可诱导产生大量的淡黄色疏松状愈伤组织;ｂ．愈伤组织在去除外源植物生长调节物质的条件下,经一年左右继代培养     

一品红离体培养及体细胞胚高频率发生的研究

一品红苞片为外植体进行离体培养,以MS+2,4-D 2.0 mg.L-1+6-BA 0.5 mg.L-1固体培养基愈伤诱导率及相对生长量最高。此培养基中继代的愈伤组织转入MS+2,4-D 1.0 mg.L-1+6-BA 0.5 mg.L-1+水解酪蛋白80 mg.L-1固体培养基时体细胞胚分化率最高。加入活性碳1 g.L-1有利于高频率体细胞胚发生。MS培养基优于N6和B5培养基,有利于高频率体细胞胚发生。胚性愈伤组织及时转入液体培养基中悬浮振荡培养有利于高频率体细胞胚发生。     

水稻籼粳杂种多倍体的研究

以秋水仙碱诱导的水稻籼粳杂多倍体植株中，部分植株的体细胞呈现具有整倍体和非整倍体染色体数细胞嵌合现象，其中四倍体细胞最高可占35．3％，其余均为染色体数低于48条的各种细胞，与二倍体植株相比，这些植株的叶表皮气孔增大，气孔数减少，花粉粒直径增大都是十分显的，与多倍体植株无明显区别，并对这类植株根尖体细胞中存在具各种染色体数目细胞嵌合现象可能的原因进行了分析。     

低温对动物体细胞的损伤影响

低温保存细胞是最常见的长期保存方法,但低温保存是有条件的,降温过快或过慢及其复温速率都直接影响细胞的存活。综述了降温与复温对动物体细胞的损伤。     

甘薯品种“白星”体细胞胚的诱导

将甘薯品种“白星”带2个叶原基的茎尖接种于含5μmol/L 2,4-D的修改的MS培养基上能诱导出胚性俞伤组织;胚性愈伤组织在不含生长素类的修改的MS培养基上进一步发育成子叶胚;子叶胚在1/2MS培养基上能发育成试管植株.     

花生体细胞胚发生发育过程中淀粉代谢的动态变化

将花生实生苗的幼对接种于MS固体诱导培养基上诱导体细胞胚发生 ,用PAS染色法观察了体细胞胚发生发育过程中的淀粉代谢的动态变化 .结果表明 ,在体细胞胚的发育过程中 ,淀粉表现出两次积累高峰 ,第一次在胚性细胞团中 ,淀粉粒大而密集 ;随着胚性细胞的分裂 ,淀粉逐渐被消耗 ,到多细胞原胚期胚体内淀粉趋于消失 .球形胚期 ,淀粉粒又开始积累 ,出现第二次积累高峰 ;到成熟胚期 ,淀粉积累只限于生长点区域淀粉的两次积累高峰为体细胞胚的发育提供了物质和能量基础     

杂交鹅掌楸体胚发生过程的起源及发育过程

以杂交鹅掌楸体细胞胚为材料,利用细胞学技术研究杂交鹅掌楸体细胞胚的起源及发育过程。结果表明:以杂交鹅掌楸未成熟胚为材料,比较容易形成胚性愈伤组织,胚性愈伤组织细胞结构致密、胚性细胞小、直径相等、细胞质浓厚,细胞内大量积累淀粉等物质,胚性愈伤组织表面的一些核质比大的单细胞发育成单细胞原胚,单细胞原胚有厚壁包围,呈生理隔离状态,后经过细胞分裂建立极性,细胞分裂经过球形胚、心形胚、鱼雷胚最后发育有茎段、根端及V形维管束系统的成熟子叶胚。     

诱导性多潜能干细胞(iPS)研究：现状与展望

通过特定的基因组合与转染可以将已分化的体细胞诱导重编程为多潜能干细胞（iPS）,是近年来干细胞研究领域最令人瞩目的一项新的干细胞制造技术。与胚胎干细胞（ES）不同,iPS细胞的制造不需要毁损胚胎,因而不会涉及更多的伦理学问题。iPS的出现不仅为体细胞重编程去分化机制的研究注入了新的活力,而且为疾病发生发展相关机制研究与特异的细胞治疗,特别是再生医学带来新的曙光。目前,iPS的研究尚处于初级阶段,文章就iPS的研究现状与应用前景进行综述和展望。