小麦与高冰草原生质体融合及再生能力的恢复

以普通小麦（Ｔｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｖｕｍ）济南１７７悬浮细胞来源的原生质体与高冰草（Ａｇｒｏｐｙｒｏｎｅｌｏｎｇａｔｕｍ）愈伤组织来源的原生质体用ＰＥＧ法诱导融合．由于来源材料的长期继代，小麦原生质体的再生能力已很低；高冰草原生质体不能分裂；而融合产物却能高频率的分化出完整植株．融合再生植株的表型类似高冰草，染色体数目和同工酶谱亦然．但它们早期发育的模式与小麦相似．     

普通小麦与高冰草不对称体细胞杂种F_2代 Ⅰ表型与性状分析

普通小麦（ＴｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｖｕｍＬ．）济南１７７原生质体和经紫外线照射的高冰草（Ａｇｒｏｐｙｒｏｎｅｌｏｎｇａｔｕｍ）原生质体用ＰＥＧ法诱导融合，形成杂种植株，但未能正常结实．杂种植株经子房诱导产生可育Ｆ０代；将Ｆ０代产生的４粒种子播种后产生Ｆ１代植株，对由其产生的Ｆ２代４个株系进行田间观察和室内考种．分析表明，Ｆ２代植株的表现型及产量性状均明显优于亲本小麦．田间穗行、株系表型稳定，具有抗寒、茎杆硬、抗倒伏等优良性状．在分蘖数、单株粒重及千粒重等产量性状上亦有明显优势，此研究为培育体细胞杂种优良小麦品系奠定了基础．     

小麦与高冰草体细胞杂种F2代Ⅱ.同工酶和蛋白质分析

比较了小麦与高冰草杂种F2代不同穗行和株系的部分植株与亲本进行酯酶同工酶及可溶性蛋白质,分析高冰草遗传物质在杂种后代的遗传和表达,结果证明高冰草遗传物质在杂种中稳定存在并正常表达.粗蛋白含量的测定表明,杂种F1及F2代蛋白质含量为17.49%～20.18%,介于亲本小麦(15.14%)与高冰草(25.58%)之间.氨基酸分析发现,杂种F2代种子的几种必需氨基酸,包括缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、组氨酸和精氨酸,显著高于普通小麦.     

小麦与高冰草体细胞杂种F_2代Ⅱ.同工酶和蛋白质分析

比较了小麦与高冰草杂种Ｆ２代不同穗行和株系的部分植株与亲本进行酯酶同工酶及可溶性蛋白质,分析高冰草遗传物质在杂种后代的遗传和表达,结果证明高冰草遗传物质在杂种中稳定存在并正常表达．粗蛋白含量的测定表明,杂种Ｆ１及Ｆ２代蛋白质含量为１７．４９％～２０．１８％,介于亲本小麦（１５．１４％）与高冰草（２５．５８％）之间．氨基酸分析发现,杂种Ｆ２代种子的几种必需氨基酸,包括缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、组氨酸和精氨酸,显著高于普通小麦．     

小麦与高冰草体细胞杂种F2代：Ⅱ.同工酶和蛋白质分析

比较了小麦与高冰草杂种Ｆ２代不同穗行和株系的部分植株与亲本进行酯酶同工酶及可溶性蛋白质,分析高冰草遗传物质在杂种后代的遗传和表达,结果证明高冰草遗传物质在杂种中稳定存在并正常表达。粘粘白含量的测定表明,杂种Ｈ１及Ｆ２代蛋白质含量为１７．４９％～２０．１８％,介于亲本小麦（１５．１４％）与高冰草（２５．５８％）之间。氨基酸分析发现,杂种Ｆ２代种子的几种必需基酸,包括缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、     

普通小麦与高冰草不对称体细胞杂种F2代：Ⅰ表型与性状 …

普通小麦济南１７７原生质体和经紫外线照射的高冰草原生质体用ＰＥＧ法诱导融合,形成杂种植株,但未能正常结实。杂种植株经子房诱导产生可育Ｆ０代;将Ｆ０代产生的４粒种子播种后产生Ｆ１代植株,对由其产生的Ｆ２代４个株系进行田间观察和室内考种。分析表明,Ｆ２代植株的表现型及产量性状均明显优于亲本小麦。田间穗行,株系表型稳定,具有抗寒、茎杆硬、抗倒伏等优良性状。在分蘖数、单株粒重衣千粒重等产量性状上亦有明显优     

小麦与高冰草不对称体细胞杂种F5代部分株系的花粉母细胞染色体观察分析

普通小麦（Triticum aestivum L.)济南177原生质体（受体）和经紫外线照射的高冰草（Agropyron elongatum)原生质体（供体）用PEG法诱导融合，形成外形偏向小麦的不对称体细胞杂种及后代，经过田间繁育，现已到F5代，在对F1至F4代杂种植株完成各项分析的基础上，对对F5代不同株系（Ⅱ-2，8-1，Ⅱ-Ⅰ-8）的花粉母细胞染色体进行观察和分析，结果表明，杂种花粉母细胞在减数分裂时基本正常，88％以上的细胞染色体数目在20－21对之间，并且绝大多数染色体可以正常配对形成二价体，少数细胞存在小染色体，数目多为1－2个，且大部分以配对形式存在，由此可见，杂种在遗传上基本是稳定的，且杂种的表型及遗传在较短的世代就基本稳定，但个别杂种花粉母细胞中也存在减数分裂异常现象，如不均等分离，落后染色体，染色体桥、多着丝粒体，易位环及多价体等。     

青苗碱谷与高冰草的体细胞杂交及杂种性质鉴定

将高冰草（Agropyrom elongahan Host Nevski）原生质体用强度为380μW／cm^2的紫外线分别照射0s、30s、1min、2min后作为融合供体;而未经射线处理的青苗碱谷（Setaria italica Beaur）原生质体作为融合受体,利用PEG方法诱导融合．对再生克隆进行形态学和染色体观察,并用同工酶、RAPD、5SrDNA间隔序列和叶绿体微卫星DNA（SSR）进行杂种性质鉴定．结果证明融合产物具有双亲基因组,高频率地形成了体细胞杂种。     

小麦与高冰草体细胞杂种F5代麦谷蛋白及SDS沉降值分析

通过对普通小麦与高冰草体细胞杂种F5代 175个株系的麦谷蛋白及SDS沉降值分析 ,发现杂种F5代有 10种不同的麦谷蛋白组成 ,并出现了 1Ax1,1Ax2 ,1Bx13,1By16 ,1By8,1Dx5等 6种不存在于亲本小麦中的高分子量麦谷蛋白亚基及 1Bx13 1By16 ,1Bx7 1By8,1Dx5 1Dy12等 3种新亚基组合 ,部分杂种中出现了高冰草的麦谷蛋白特征谱带 ;杂种株系的SDS沉降值表现出较大的差异 ,其中一些杂种的SDS沉降值明显高于亲本普通小麦 .结果表明 ,通过体细胞杂交有可能将野生禾草的优良性状引入普通小麦 ,创造出多种不同组成及组合的新种质 ,为小麦品质育种开辟新途径     

BYDVCP基因转化小麦原生质体及转基因植株再生

用原生质体融合技术与ＰＥＧ介导的直接转基因方法相结合，使高频率分裂的小麦济南１７７悬浮细胞系原生质体与具有分化能力的小麦济南１７７胚性愈伤组织原生质体融合，形成具有分裂和分化能力的融合细胞；同时，利用ＰＥＧ对原生质体的直接转基因作用，将带有抗病基因的质粒Ｐ＾ｐｐ１５与带有抗性选择标记基因的质粒Ｐ＾ＢｌＡｅｔＳＮ导入融合细胞中。经抗性筛选获得抗潮霉素的阳性克隆并再生植株。对再生植株作ＰＣＲ检测表明，     

耐盐新型小麦品种

麦科作物与不同属植物无法杂交的世界难题,在困扰国际育种专家20多年后,最近在山东大学被攻克。这一研究项目,是采用细胞融合技术将小麦与原产澳洲的高冰草融合杂交,所产生的小麦新品种具有大量独特品质。据测算,杂交小麦的耐盐性达0. 7％,可以在盐度较高的土地上种植,使中国在大面积的荒芜盐碱地上建设新粮仓成为可     

高冰草在低山干旱区的适应性研究初报

<正>高冰草系禾本科冰草属多年生丛生草本植物,耐盐碱,生物产量高,原生长在澳大利亚。我国山东滨海地区最先引种高冰草,用来改造盐碱土。石河子紫泥泉绵羊研究所草原站,新疆农垦科学院水土所从91年开始在紫泥泉种羊场春秋放牧场上试种高冰草。旨在研究利用高冰草改良干旱草场,并建立优良高产人工草场的可能性。 一、自然条件 试验地海拔1150米,年降水量249毫米,蒸发量1558.9毫米,无霜期145天。土层瘠薄,土壤为粟钙土。自然植被组成主要以博     

用膜片钳技术测定植物原生质体膜电位

使用膜片钳测量了石防风、烟草及小麦原生质体的膜电位，并与常规膜电位方法做了比较．结果表明，膜片钳法测得的原生质体膜电位为内负外正，低于－５０ｍＶ；常规的插入法测得的为内正外负，大于＋１０ｍＶ．与插入法测得的完整细胞膜电位（低于－１００ｍＶ）相比，膜片钳法测得的原生质体膜电位更为接近．两种方法在原生质体膜电位测量上的差别，可能与原生质体受损的程度不同有关．     

BYDV CP基因转化小麦原生质体及转基因植株再生

用原生质体融合技术与ＰＥＧ介导的直接转基因方法相结合，使高频率分裂的小麦济南１７７悬浮细胞系原生质体与具有分化能力的小麦济南１７７胚性意伤组织原生质体融合，形成具有分裂和分化能力的融合细胞；同时，利用ＰＥＧ对原生质体的直接转基因作用，将带有抗病毒基因（ＢＹＤＶＣＹｇｅｎｅ）的质粒Ｐｐｐ１５与带有抗性选择标记基因的质粒严ＰＢｌＡｃｔＳＮ导入融合细胞中．经抗性筛选获得抗潮霉素（Ｈｍ）的阳性克隆并再生植株．对再生植株作ＰＣＲ检测表明，ＣＰ基因已整合到转化植株的基因组中并稳定表达．     

影响小麦原生质体培养因素的研究

小麦胚性愈伤组织酶解５小时后，原生质体产率可达６．３×１０６ｇ．ｆｗ－１，酶种类和浓度对小麦原生质体的产率有影响小麦原生质体对不同浓度渗透剂的适应范围较广，在添加０．３ｍｏｌ·Ｌ－１０．７ｍｏｌ·Ｌ－１甘露醇、山梨醇的培养基上，存活率超过５０％所试培养基中，ＫＭ８Ｐ效果最好，实验表明可能与含丰富的附加成分有关除高浓度精胺外，小麦原生质体的存活率随腐胺、精胺浓度的增加而上升，但对原生质体的分裂频率影响不大在上述最佳条件下，小麦原生质体在培养３５天后出现第一次分裂，２０天后统计分裂频率为２５．６％，３个月后植板率为２８％，并形成较多的愈伤组织     

普通小麦与玉米的体细胞杂交再生完整植株

从小麦济南177制备得到两种原生质体，一种来源于具有一定分化能力的愈伤组织但其分裂能力较低；一种来源于生长迅速的悬浮细胞但不能分化，将二种原生质体混合，共同作为受体与经过紫外线（UV）照射的玉米（Zea mays L)原生质体在PEG诱导下融合，培养后获得再生克隆并进一步分化为植株，而它们单独与玉米原生质体融合均不能再生植株，通过染色体、同工酶及5SrDNA分析及生长习性分析证明再生植株均为体细胞杂种。     

单倍体小麦与簇毛麦的不对称体细胞杂交

以小麦杂２４－２（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ ａｅｓｔｉｖｕｍ,ｃｖ．２４－２）花药来源的愈伤组织分离原生质体作受体;簇毛麦（Ｈａｙｎａｌｄｉａ ｖｉｌｌｏｓａ）幼胚来源的愈伤组织原生质体经２２０μＷ／ｃｍ＾２紫外线照射３０ｓ作供体,作ＰＥＧ法诱导融合,最后获得再生愈伤组织。以融合再生的４个最先长大的细胞系进行染色体,同工酶和ＲＡＰＤ分析。结果表明,这些细胞系均为体细胞杂种,ＲＡＰＤ技术可作为小麦体细胞杂种     

普通小麦与冰草属植物直链淀粉含量的分析

通过对３个典型的普通小麦品种Ｆｕｋｕｈｏ，Ｃｈｉｎｅｓｅ ｓｐｒｉｎｇ，Ｓｉｇｍａ－ｗｈｅａｔ和３个不同遗传类型的冰草性属植物Ｚ１５００，Ｚ１５２４，Ｚ５９３的直链淀粉含量的分析，结果发现：不同小麦品种的直链淀粉含量差异不明显；不同遗传类型的冰草属植物其直链淀粉含量存在显著差异，四倍体冰草的直链淀粉含量接近于普通小麦，整个冰草属植物的直链淀粉含量普遍高于普通小麦。     

单倍体小麦与簇毛麦的不对称体细胞杂交

以小麦杂２４２（Ｔｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｖｕｍ,ｃｖ．２４２）花药来源的愈伤组织分离原生质体作受体;簇毛麦（Ｈａｙｎａｌｄｉａｖｉｌｏｓａ）幼胚来源的愈伤组织原生质体经２２０μＷ／ｃｍ２紫外线照射３０ｓ作供体,用ＰＥＧ法诱导融合,最后获得再生愈伤组织．对融合再生的４个最先长大的细胞系进行染色体,同工酶和ＲＡＰＤ分析．结果表明,这些细胞系均为体细胞杂种,ＲＡＰＤ技术可作为小麦体细胞杂种早期鉴定的有效方法     

用膜片钳技术测定植物原生质体膜电位

使用膜片钳测量了石防风，烟草及小麦原生质体的膜电位，并与常规膜电位方法做了比较，结果表明，膜片钳法测得的原生质体膜电位为内负外正，低于－５０ｍＶ，常规的插入法测得的为正外负，大于＋１０ｍＶ，与插入法测得的完整细胞膜电位（低于－１００ｍＶ）相比，膜片钳法测得的原生质体膜民位更为接近，两种方法在原生质体膜电位测量上的差别，可能与原生质体受损的程度不同有关。