抗体在自组装单分子膜上的共价键固定化及其传感性能研究

在单晶金片电极上制备了巯基十一酸[SH(CH2)10COOH]自组装单分子膜,利用1-乙基3-(3-二甲氨基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基硫代琥珀酰亚胺(NHS),将抗体(纯化羊抗小鼠IgG)以共价键形式固定在金电极上,分别测定了裸金电极、自组装单分子膜电极、抗体膜电极的电位响应,最后根据抗原、抗体反应前后电极电位的变化,对游离抗原进行检测,电极检测下限可达0．5／μg／L,检测范围为0．5～12μg／L．     

基于聚邻苯二胺和金-普鲁士蓝纳米复合物的电位型免疫传感器

利用电聚合方法制备聚邻苯二胺修饰碳糊电极（CPE／POPD ）,在CPE／POPD上电沉积金‐普鲁士蓝纳米复合材料（Au‐PB）,制得CPE／POPD／Au‐PB修饰电极,将羊抗小鼠IgG（抗体,Ab）通过Au‐NH‐键固定在修饰电极上,从而制得免疫传感器（CPE／POPD／Au‐PB／Ab）．利用CPE／POPD／Au‐PB／Ab对小鼠IgG （抗原,Ag ）进行检测,结果表明,在4×10－4～1．0×104μg／L质量浓度范围内,电极电势与Ag浓度呈现良好线性关系,检测下限达到1．14×10－4μg／L ,响应时间为3 min ,灵敏度为－8．51 mV／dec‐ade ．所制备的免疫传感器具有灵敏度高、响应速度快、检测范围宽、重现性好等优良性能．     

酸性红-CTMAB-TX体系与DNA作用的共振光散射光谱的研究及分析应用

研究了脱氧核糖核酸（DNA）与阴离子染料酸性红（FA）及阳离子表面活性剂溴化十六烷基三甲铵（CTMAB）和非离子型表面活性剂Triton X-100（TX）作用的共振光散射光谱的特征考察了各种影响因素，在优化条件下确立了共振光散射强度与鱼精DNA和小牛胸腺DNA以及变性后的鱼精DNA和小牛胸腺DNA浓度之间的关系，相应的线性范围分别为0.026-7．00mg／L；0．025-7.00mg／L；0．032-6．00mg／L；0．031-8．00mg／L，相关系数为0．9991；0.9996；09981；0.9996，检出限为7．0μg／L；6．0μg／L；11．0μg／L；12．5μg／L，基于共振光散射的增强，建立了一种测定DNA的新方法．图4，表3，参7．     

HPLC法测定水产品中欧索林酸残留量

研究了鱼类养殖中残留在鱼体内的欧索林酸的高效液相色谱（HPLC）检测方法．样品中欧索林酸在酸性条件下用乙腈提取，采用液液分配方法净化除去共存提取干扰物质后，用带有荧光检测器的高效液相色谱仪检测．方法的检测限为1.0μg／kg，线性范围2．5—50．0μg／L，相关系数r=0．9995，添加1．0，6．0和10．0μg／kg浓度水平，平均回收率分别为94.0％、83.7％和82．6％，相对标准偏差分别为5．1％、5．8％和2．5％．该方法具有高灵敏度、简单、快速和低成本等特点，适用于检验机构检测和食品加工企业产品控制．     

基于氧化锌-壳聚糖-纳米金复合杂化膜修饰的过氧化氢生物传感器的研究

将氧化锌（ZnO）-壳聚糖（CHIT）-纳米金（nano—Au）形成复合杂化膜包埋血红蛋白（Hb）,制备了无电子媒介体的第三代电流型生物传感器．该传感器对过氧化氢（H2O2）的还原显示出较好的电催化活性,固定在电极上的Hb在0．1mo／／L磷酸盐缓冲溶液（PBS）中对过氧化氢响应灵敏度高,检测范围宽（3．9×10^-6～1．907×10^-72mol／L）,检测下限低（1．53×10^-6mol／L（信噪比S／N=3））,并且表现出良好的稳定性和高选择性．     

原子荧光光谱法测定汞、铅、锑的研究

建立了巯基葡聚糖凝胶分离富集-氢化物发生原子荧光法，用于测定汞、铅、锑的含量．采用微波消解样品，以巯基葡聚糖凝胶在不同的pH条件下分离富集汞、铅、锑，再以不同浓度的HCl洗脱后氢化物发生原子荧光光谱法测定含量．汞、铅、锑的线性检测范围分别为0～80，0～150，0～200／μg／L，方法检出限分别为0．05，0．30，0．25μg／L，样品加标回收率汞为99．0％～105．5％、铅为98．0％～101．5％、锑为99．8％～100．6％．本方法具有基体干扰小，灵敏度高，检出限低，线性范围宽的特点，应用于实际样品的测定，结果满意．     

血尿酸水平与慢性心力衰竭患者预后的临床观察

目的观察慢性心衰患者血尿酸浓度，为临床判断慢性心衰疗效及预后提供帮助。方法（1）检测70例心功能Ⅰ～Ⅱ级，50例心功能Ⅲ级，73例心功能Ⅳ级患者血尿酸浓度，对其比较；（2）对193例心功能Ⅰ-Ⅳ级病因分别为冠心病、扩张性心肌病、高血压心脏病、风心病组患者观测其预后；（3）对例慢性心力衰竭患者治疗前后血尿酸浓度比较。结果（1）心功能Ⅰ～Ⅱ级组血尿酸浓度（209±29）μmol／L,HI级组血尿酸浓度（448．05±54）μmol／L，Ⅳ级组血尿酸浓度（526．11±102．8）μmol／l，心功能Ⅰ-Ⅱ级组分别与Ⅲ级组、Ⅳ级组间比较差异有统计学意义（P〈O．05），Ⅲ级组与Ⅳ级组间差异有统计学意义（P〈0．05）；（2）心功能Ⅰ-Ⅱ级组治疗前（209±29）μmol／L，治疗后（178±36）μmol／L，差异无统计学意义（P〉0．05），Ⅲ级组治疗前后分别为（448．05±54）μmol／L、（276±98）μmol／L，Ⅳ级组治疗前后分别为（526．11±102．8）μmol／L、（324±106）μmol／L，Ⅲ级组与Ⅳ级组治疗前后差异有统计学意义（P〈0．05）。结论心衰越严重血尿酸浓度越高，预后越差。心功能改善后血清尿酸浓度明显下降，动态检测血清尿酸浓度是判断心衰的预后的一个有意义的生化指标。     

石墨烯在金电极上固定方法的选择及免疫传感器的构建

分别利用重氮化法、滴涂法、非共价键合法及偶联法将石墨烯固定于电极表面,并对所得到的修饰电极进行电化学表征,分析结果显示重氮化法制备的石墨烯修饰电极性能更稳定,信号更灵敏,所以将其用于免疫传感器的制备.首先在金电极上制备对氨基苯硫酚和苯硫酚的混合自组装单分子膜(MSAM),再利用重氮化法将石墨烯固定在MSAM修饰电极表面,然后在其表面电沉积纳米金,最后通过金-氨键固定抗体(羊抗小鼠IgG),并对小鼠IgG进行了初步检测,线性范围为0.001～400μg/L,检测下限达到0.0014μg/L.结果表明,该传感器具有检测范围宽、灵敏度高的优良性能,在临床检验中具有广阔的应用前景.     

液相色谱－串联质谱法测定饮用水中的丙烯酰胺

建立了用液相色谱－串联质谱法测定饮用水中丙烯酰胺的方法。该法使用Cole-ParmerPTFE滤膜过滤样品,采用AcquityHSST3（1．8μm,2．1X50mm）柱分离,以0．1％甲酸和甲醇为流动相（体积比95：5）分离。采用UPLC／MS／MS电喷雾电离正离子模式（ESI＋）,多反应检测（MRM）,以外标法定量分析。该方法在0．10μg／L到0．60μg／L有良好线性范围。最低检测下限（LOD）0．10μg／L。加标回收率范围为88．9％-106．7％。相对标准偏差均低于8.2％。方法适用与水中丙烯酰胺的测定,具有灵敏度高、重现性好的特点,在水质监测中有重要作用。     

固化液对α-磷酸钙-磷酸四钙骨水泥强度的影响

用磷酸氢二钠（SPDD）和／或柠檬酸配制了不同pH值的固化液，在1300℃煅烧β-磷酸三钙制备了α-磷酸三钙（α—TCP），在1420℃煅烧等摩尔混合的二水磷酸氢钙和碳酸钙制备了磷酸四钙（TeCP）．制备骨水泥样品时固化液与固相的比（L／P）为0．25～0．45mL／g．测量了骨水泥的抗压强度和孔隙率，考察了L／P和固化液组成对水泥抗压强度的影响．结果表明：抗压强度随固化液pH值降低而增大，抗压强度达到最大值有一个最优的L／P．在L／P=0．30mL／g and pH=5的条件下，抗压强度达到21．69MP．     

石墨烯修饰离子液体电极制备癌胚抗原免疫传感器

以离子液体1-丁基-3甲基咪唑六氟磷酸盐为黏合剂制备了碳糊电极.利用石墨烯和金纳米修饰碳糊电极,通过金纳米的吸附能力将癌胚抗体修饰到电极表面制成免疫传感器,用于癌胚抗原的灵敏测定.利用循环伏安法对传感器进行了表征.结果表明,修饰电极显著地促进了电子在电极表面的传递速度,提高了方法的检测灵敏度.在优化条件下,峰电流变化值与癌胚抗原的浓度在0.5～5.0μg/L和5.0～120.0μg/L范围内呈良好的线性关系.信噪比等于3时,癌胚抗原的检出限为0.05μg/L.新方法被应用于人血清样品分析.     

基于聚邻苯二胺复合膜电位型免疫传感器的制备

首先利用循环伏安法制备聚邻苯二胺(POPD)修饰碳糊电极(CPE/POPD),然后在CPE/POPD上电沉积普鲁士蓝(PB) 和纳米金(GNPs),制备CPE/POPD/PB-GNPs电极,最后将羊抗小鼠IgG通过金-氨键固定在CPE/POPD/ PB-GNPs上,从而制得一种免疫传感器(CPE/POPD/PB-GNPs/Ab).用循环伏安法和电化学交流阻抗技术对电极的修饰过程进行表征.利用所制备的免疫传感器对溶液中的小鼠IgG进行检测,结果表明,在2.0×10-5 μg/L和1.0×04 μg/L 2种浓度下,免疫传感器均得到了很稳定的电位响应信号,响应时间不超过3 min.所制备的免疫传感器具有灵敏度高、响应速度快、检测范围宽、成本低廉等突出优点.     

基于石墨烯-壳聚糖/纳米金的酪蛋白电化学免疫传感器

将石墨烯和壳聚糖的复合物滴涂到玻碳电极表面,利用壳聚糖对纳米金的吸附将其修饰到上述电极,以纳米金对抗体的良好亲和力将酪蛋白抗体修饰到电极表面制成免疫传感器,利用循环伏安法对传感器进行表征.结果表明,石墨烯和纳米金有效地促进了电子的传递速度,提高了检测灵敏度.在优化条件下,响应电流与酪蛋白浓度的对数在10～10 000μg/L范围内呈良好的线性关系,检出限为2μg/L(S/N=3).     

优化甲硫氨酸补料策略提高重组毕赤酵母G12-CBS合成S-腺苷甲硫氨酸

重组毕赤酵母G12-CBS经代谢工程改造,可高效表达重组S-腺苷甲硫氨酸(SAM)合成酶,并弱化了SAM转化途径的关键酶β-胱硫醚合成酶,是一株优良的SAM高产菌。为了利用G12-CBS高效合成SAM,需对前体(甲硫氨酸)的补料策略进行优化。首先在摇瓶中考察了不同甲硫氨酸(L-Methionine,L-Met)添加量对于G12-CBS的影响,发现每24hL-Met补加量超过3mg/mL时,会影响重组菌生长和SAM合成。在15L发酵罐中优化L-Met的补料速率,当外源补料速率为0.4g/(L·h)时SAM产量最高,分别比补料速率为0.2g/(L·h)和0.6g/(L·h)时提高22.2%和31.8%,达到13.01g/L,比出发菌最高产量提高54%。代谢物及酶活测定的结果表明,较低的L-Met补料速率(0.2g/(L·h))导致前体供应不足而影响SAM合成,过高的补料速率(0.6g/(L·h))可能会抑制三羧酸循环,并且影响氮源的摄取和利用,从而导致菌体生长和产物合成受到抑制。     

新型乙肝压电免疫传感器的研制

通过自组装半胱胺在压电石英金电极上,用缩合剂(EDC和NHS)将羧基化碳纳米管和乙肝表面抗体连接到半胱胺膜,构建乙肝表面抗原的一种新的生物压电免疫传感器。传感器的灵敏度为17.268 Hz/(μg/mL),线性范围为0.05μg/mL-15μg/mL,并能实时检测。     

高灵敏电位型风疹疫苗免疫传感器的研究

通过纳米金双层膜将抗风疹血清共价固定在铂电极上,从而制成高灵敏电位型风疹疫苗免疫传感器.通过抗原-抗体反应前后的电位差值考察了电极表面的电化学特性,并对该免疫传感器的性能进行了详细的研究.该传感器对风疹疫苗的检测的线性范围是3.6×10-8～1.0×10-6g/mL,检出限为1.8×10-8g/mL,线性相关系数为0.996 1.     

雏鸡感染柔嫩艾美耳球虫后血清IgG含量的动态变化

为研究柔嫩艾美耳球虫感染雏鸡后,雏鸡血清IgG含量的变化,用8×10^5个柔嫩艾美耳球虫卵囊感染10日龄雏鸡,用饱和硫酸铵盐析法分别提取感染前和感染后第1,2,3,4,5,6,7,8,12,15天鸡血清中的IgG,Sephadex G-25凝胶过滤层析,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）,对纯化的IgG做纯度鉴定,结果表明,盐析产品纯度较高。通过紫外吸收法测定其含量,感染前IgG含量是（1.07±0.05）g/L,对照组感染后第4天（14日龄）达到峰值（1.90±0.07）g/L,感染组在感染后第6天（16日龄）达到最高值（2.31±0.07）g/L,感染后第12天（22日龄）对照组和感染组降到最低值,分别是（1.35±0.17）g/L和（1.32±0.05）g/L,感染后第5天（15日龄）差异显著（P〈0.05）,第6,7天（16,17日龄）两组差异极显著（P〈0.01）,其它天差异不显著（P〉0.05）。     

石墨烯修饰金电极的制备及其同时测定多巴胺和尿酸

将Hummers法合成的新鲜石墨烯滴涂于金电极表面,制备了石墨烯修饰金电极（Gr/AuE）。用循环伏安法研究了Gr/AuE的电化学性能,及多巴胺和尿酸在该修饰电极上的电化学行为。结果表明：该修饰电极对多巴胺和尿酸都有电催化氧化作用且能在抗坏血酸存在条件下同时测定多巴胺和尿酸。在抗坏血酸存在下差分脉冲伏安法（DPV）氧化峰电流与多巴胺和尿酸的浓度分别在1.0～1000μmol/L和30～1000μmol/L范围内呈现良好的线性关系,检出限分别为0.67μmol/L和6.0μmol/L.     

聚对氨基苯甲酸/TiO2-石墨烯修饰玻碳电极同时测定扑热息痛和色氨酸

采用滴涂法和电聚合法制备聚对氨基苯甲酸/TiO2-石墨烯修饰玻碳电极.用循环伏安法和差分脉冲伏安法研究扑热息痛和色氨酸在修饰电极上的电化学行为,据此建立一种扑热息痛和色氨酸同时测定的电化学方法.实验结果表明,该修饰电极对于扑热息痛和色氨酸的电化学反应具有良好的催化性能.利用差分脉冲伏安法测定,扑热息痛和色氨酸在1.0～530μmol/L浓度范围内与氧化峰电流呈良好的线性关系,相关系数分别为0.990和0.993.信噪比为3时,扑热息痛和色氨酸检出限分别为0.4μmol/L和0.1μmol/L.将该方法用于实际样品分析,回收率为95.2%～105.8%.