免疫沉淀法分离纯化感染细胞中的甲肝病毒RNA

本研究采用抗血清（多抗血清）沉淀甲肝病毒,并用盐酸胍酸性酚,氯仿一步法分离纯化病毒ＲＮＡ．此方法能排除非病毒ＲＮＡ的污染,操作简单,要求条件较低,ＲＮＡ的纯度和完整性都较好     

双链RNA技术在果树病毒研究中的应用

含ＲＮＡ基因组的植物病毒在复制时会产生双链ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）。本文介绍了用ＣＦ－１１纤维素粉提取ｄｓＲＮＡ的步骤,并列举了ｄｓＲＮＡ在果树病毒研究中的应用,其主要应用有：１）果树病毒病及病原鉴定;２）病毒分化株系的鉴定;３）以ｄｓＲＮＡ为中介对病毒核酸序列进行测定;４）探针制备和ｃＤＮＡ克隆的获得;５）用于检测病毒卫星ＲＮＡ和亚基因组ＲＮＡ;６）侵染性测定和制备抗血清等方面的研究。     

水稻条叶枯病毒云南分离物（RStV.Y）的纯化与理化特性分析

采用改进的水稻病毒纯化方法，以２００ｇ／Ｌ的蔗糖垫替代蔗糖密度梯度，从ＲＳｔＶ感染的水稻叶片中制备了病毒颗粒，电镜观察显示，ＲＳｔＶ为细丝状和分枝状结构，变性琼脂糖凝胶电泳分析分离纯化的病毒总ＲＮＡ得到４个大小不 同的病毒ＲＮＡ。     

侵染马铃薯的一种短杆状病毒的分离鉴定

从马铃薯“紫花白”叶片中分离到一种短杆状病毒,病毒粒体直径为１９±１．９ｎｍ,长度在１８０～２２０ｎｍ之间,ＯＤ２６０／２８０比值为１．２３,病毒核酸为ｓｓＲＮＡ,单一组分．用提纯的病毒免疫家兔,制备抗血清,微量沉淀法表明此病毒与ＰＬＲＶ,ＰＶＸ,ＰＶＹ,ＰＶＳ,ＴＭＶ均无血清学关系．病毒分离物可摩擦接种茄科,苋科、藜科植物,并在不同指示植物上引起不同的症状,但只在普通烟上产生系统感染．电镜观察和ＤＡＳ－ＥＬＬＳＡ检测证实此病毒可摩擦回接马铃薯“紫花白”,但不引起明显症状．病毒的稀释限点为１０－４～１０－５,体外存活期为６ｄ,致死温度为８０～８５℃．与目前已报道的侵染马铃薯的各种杆状ＲＮＡ病毒比较分析证明,此病毒是侵染马铃薯的一种新病毒,命名为马铃薯短杆状病毒（Ｐｏｔａｔｏｒｏｄ－ｓｈａｐｅｄＶｉｒｕｓ,ＰＲＶ）．     

植物抗病毒基因工程的研究进展

本文对近年来植物抗病毒基因工程的发展作一简介,介绍了利用病毒外壳蛋白基因,病毒卫星 ＲＮＡ,弱病毒全长ｃＤＮＡ,反义ＲＮＡ,核酶,抗体基因和干扰素基因,毒蛋白基因,病毒上基他基因以及植物上抗性基因等方法．     

用复制酶基因cDNA探针检测表达病毒外壳蛋白基因马…

利用马铃薯卷叶病毒（ＰＬＲＶ）复制酶基因３＇端长约６００ｂｐ的ｃＤＮＡ，用缺口平移方法进行＾３２Ｐ同位素标记，制备成ｃＤＮＡ探针，通过核酸斑点杂交，对提纯的马铃薯卷叶病毒（ＰＬＲＶ）、病毒ＲＮＡ、ＰＬＲＶ感染的马铃薯汁液，表达ＰＬＲＶ ＣＰ基因的马铃薯叶片及块茎芽进行了检测。结果表明，＾３２Ｐ标记的复制酶基因ｃＤＮＡ探针特异性强、灵敏度高。可测得提纯病毒的最低含量为４０８ｎｇ／ｍｌ，病毒ＲＮＡ最低     

茶卷蛾质型多角体病毒基因组特性的研究

茶卷蛾质型多角体病毒核酸（ＨｍＣＰＶＲＮＡ）用热酚法从提纯的病毒多角体中提取。紫外吸收光谱测定最高最低的吸收值分别在２６０ｎｍ和２３０ｎｍ处。经测定其Ｔｍ值为７９℃，在３％聚丙烯酰胺凝胶中，经电泳ＨｍＣＰＶＲＮＡ可分离得到１０条基因片段，各片段大小为０．３４×１０６～２．５５×１０６，总分子量为１５．１５×１０６，其ＰＡＧＥ图型与ＣＰＶ属代表种ＢｍＣＰＶＲＮＡ有较大差异，试验表明ＨｍＣＰＶ与ＢｍＣＰＶ属不同ＰＡＧＥ型。     

中蜂囊状幼虫病病毒部分结构蛋白基因的克隆及序列分析

根据小ＲＮＡ 病毒科（ Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ） 中病毒ＲＮＡ 所具有的结构特征, 采用ｍＲＮＡｃａｐｔｕｒｅ ｋｉｔ 提取纯化中蜂囊状幼虫病病毒（Ｃｈｉｎｅｓｅｓｃａｂｒｏｏｄ ｖｉｒｕｓ ＣＳＢＶ） 的ＲＮＡ, 并以之为ｃＤＮＡ合成的模板． 依据小ＲＮＡ病毒科中的脊髓灰质炎病毒结构蛋白基因序列设计了一对引物ＶＰ５和ＶＰ３ , 通过ＰＣＲ 扩增获得预期大小约为１ １００ ｂｐ的ＤＮＡ 片段, 将此片段克隆到ｐＧＥＭＴｅａｓｙ载体上并直接测序． 序列分析表明, 该片段为中蜂囊状幼虫病病毒部分结构蛋白基因, 与意蜂幼虫囊状病病毒结构蛋白基因序列的同源性为８６－８ ％ , 与之对应氨基酸序列的同源性高达９３－４ ％ ． 该病毒株为一种新型的蜜蜂囊状幼虫病病毒株     

用复制酶基因cDNA探针检测表达病毒外壳蛋白基因马铃薯中的PLRV

利用马铃薯卷叶病毒（ＰＬＲＶ）复制酶基因３′端长约６００ｂｐ的ｃＤＮＡ，用缺口平移方法进行３２Ｐ同位素标记，制备成ｃＤＮＡ探针，通过核酸斑点杂交，对提纯的马铃薯卷叶病毒（ＰＬＲＶ）、病毒ＲＮＡ、ＰＬＲＶ感染的马铃薯汁液，表达ＰＬＲＶＣＰ基因的马铃薯叶片及块茎芽进行了检测．结果表明，３２Ｐ标记的复制酶基因ｃＤＮＡ探针特异性强、灵敏度高．可测得提纯病毒的最低含量为４０８ｎｇ／ｍｌ，病毒ＲＮＡ最低量为２７．８ｐｇ／ｍｌ，未转ＣＰ基因接种ＰＬＲＶ的马铃薯叶片提取液的最高稀释度为１３７５．接种ＰＬＲＶ的转ＣＰ基因的抗性马铃薯块茎芽和叶片提取液的最高稀释度为０～１／１５．此探针和只转入病毒外壳蛋白基因，不接种ＰＬＲＶ的转基因马铃薯汁液不发生反应．表明，探针只与ＰＬＲＶ基因组ＲＮＡ特异反应，而不与外壳蛋白基因及其ｍＲＮＡ反应，从而为表达ＣＰ基因的转基因马铃薯中ＰＬＲＶ的检测和抗病性鉴定建立了一种可靠的灵敏的分子生物学技术．此项技术已用于转ＣＰ基因马铃薯Ｄｅｓｉｒｅ，Ｆａｖｏｒｉｔａ，乌盟６０１和虎头的抗病性鉴定     

水分胁迫下不同抗旱性小麦品种核酸代谢的差异

抗旱和不抗旱小麦品种在渗透势为－０．０２５ＭＰａ和－０．０５ＭＰａ ＰＥＧ溶液中根际胁迫３天和５天，叶片的ＤＮＡ、ＲＮＡ含量均呈下降趋势，但抗旱品种７３－１１下降幅度比敏感品种晋２１４８小。ＲＮＡ电泳结果表明：２３ｓＲＮＡ、１８ｓＲＮＡ、１６ｓＲＮＡ以及小分子量ＲＮＡ的含量均下降，２个品种的下降差异不明显，但在峰形上有区别。ＤＮＡ电泳结果表明，ＤＮＡ各组分含量在水分胁迫下也表现为下降趋势，且２个品     

猪垂体Poly（A）~＋RNA的制备及其体外翻译

本文用ＬｉＣｌ沉淀法提取了猪垂体总ＲＮＡ，经。ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）－ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ柱亲和层析，分离纯化了猪垂体Ｐｏｌｙ（Ａ）＋ＲＮＡ．用自制的兔网织红细胞体外翻译体系鉴定，表明该Ｐｏｌｙ／（Ａ）＋ＲＮＡ具有较高的翻译活性．ＳＤＳ－ＰＡＯＥ，放射自显影分析翻译产物提示，在制各的猪垂体Ｐｏｌｙ（Ａ）＋ＲＮＡ中，编码猪生长激素前体的ｍＲＮＡ占有较高的比例．     

杂交捕获抑制聚腺苷二磷酸核糖聚合酶基因的体外翻译

体外转录载体ｐＳＰ７２—Ｃ１２和ｐＳＰ７２—Ｃ１．４分别经ＸｂａⅠ和ＸｈｏⅠ酶切线性化后，用ＳＰ６ＲＮＡ聚合酶与Ｔ７ＲＮＡ聚合酶进行体外转录得到编码人聚腺苷二磷酸核糖聚合酶基因的ｍＲＮＡ全序列（３．７ｋｂ）及与其５’端编码区的起始密码子ＡＵＧ上游区域互补的反义ＲＮＡ片段（１．４ｋｂ）。等摩尔数的正、反义ＲＮＡ通过酚相乳浊杂交技术进行分子杂交。在网织红细胞裂解物体外翻译系统中，正义ＲＮＡ能正常地翻译出蛋白质；而反义ＲＮＡ与正义ＲＮＡ杂交可阻断翻译的进行。     

植物病毒增殖的数值研究与转基因植株的抗病毒机理

通过计算机模拟病毒增殖过程并结合对基因组ＲＮＡ高级结构的预测,对烟草花叶病毒增殖中的负链特异终止现象给解释。     

香蕉花叶病病原病毒及其卫星RNA的研究

进一步证明,我国华南地区香蕉叶病的病原病毒种类主要是由黄瓜花叶病毒引,在广西部分地区发现有烟草叶病毒的新株系感染香蕉。分离得到ＣＭＶ的卫星ＲＮＡ。     

电镜原位杂交对淡水三角头涡虫中期染色体RNA的研究

本文用ＲＮａｓｅ－ｇｏｌｄ标记法定位了淡水三角头涡虫中期染色体内ＲＮＡ，发现ＲＮＡ在染色单体切面内部及边缘均有分布。此外，以玉米１８ｓｒＲＮＡ的ｃＤＮＡ和水稻５ｓｒＲＮＡ的ＤＮＡ为探针，经电镜原位杂交后观察了涡虫１８ｓｒＲＮＡ（也包括４５ｓｐｒｅ－ｒＲＮＡ）及５ｓｒＲＮＡ在中期染色单体切面上的分布特点，证明涡虫染色单体边缘及内部ＲＮＡ的两个来源是核仁核糖体ＲＮＡ和核基质内的５ｓｒＲＮＡ。     

植物病毒增殖的超循环理论与抗病毒植物基因工程

考虑了两个典型的植物病毒ＴＭＶ和ＰＶＹ,从病毒基因组的复制,翻译和组装各个环节的反应方程出发得到了病毒增殖的动力学方程。这组方程是Ｅｉｇｉｎ超循环理论在病毒ＲＮＡ增殖系统中的应用和发展。     

ClSnoRNA,水稻中的一种新的核仁小分子RNA

通过计算机分析国际分子生物学数据库和ｃＤＮＡ序列分析等方法，在水稻中发现一种新的核仁小分子ＲＮＡ：ＣｌＳｎｏＲＮＡ。该ＲＮＡ具有ｂｏｘＣ，ｂｏｘＤ和末端碱基配对区等典型的核仁小分子ＲＮＡ结构特征；并有１４个核苷酸与水稻１８ｓｒＲＮＡ中一段保守序列互补。     

逆转录聚合酶链式反应中dsRNA模板的快速制备

应用ＲＴ－ＰＣＲ技术检测草鱼出血病病毒。建立了一种快速，简易而可靠的ｄｓＲＮＡ模板的制备方法。应用该方法制备模板进行ＲＴ－ＰＣＲ扩增，可以有效地检测出病鱼组织及病毒感染的培养细胞裂解液中的草鱼出血病病毒，且全过程只需３－４ｈ，大大缩短了检测时间。     

有效制备核糖核酸的方法研究

核糖核酸的制备和分析受多种因素的影响．因此，在特定条件下制备高纯度和完整性好的ＲＮＡ的方法研究至关重要．本文以大白鼠肝为材料，研究ＲＮＡ的制备方法，建立了有效的ＲＮＡ制备方法．用紫外分光光度计和变性电泳分析所制备的ＲＮＡ，发现其纯度Ａ２６０Ａ２８０＝１．７～２．０，２８ＳｒＲＮＡ与１８ＳｒＲＮＡ的带宽比为２１．本方法具有节约节时，重复性好，产量较高，无ＤＮＡ污染等优点．这为ｃＤＮＡ合成，基因表达和调控等研究奠定了基础．     

葡萄卷叶病病毒双链RNA(dsRNA)提纯分析研究*

以传统的检测方法为对照经过一系列的筛选后,在国内首次将病毒的ｄｓＲＮＡ检测分析引入果树无病毒苗的检测方法之中,确立了葡萄病ｄｓＲＮＡ的提取步骤,包括试剂选择、浓度的设定、操作方法的确立,与国外文献相比有多方面的改进,使其更加简单、实用,并在实际的应用当中取得成功。在确立方法的基础上对生产中广泛发生的葡萄卷叶病病毒（ＧＬＲｖ）进行检测并确立检测标准,为今后葡萄病毒病的诊断检测奠定了良好的基础。