发根农杆菌介导云南萝芙木的遗传转化

用发根农杆菌A4分别感染云南萝芙木幼嫩的真叶和茎段,诱导出毛状根,并对毛状根进行了离体培养, PCR检测转基因毛状根和HPLC检测毛状根中利血平的含量．结果表明:这两种外植体的转化频率及诱导出的毛状根差异极大,幼嫩的真叶叶片比茎段更适合作转化外植体用．PCR检测结果表明,诱导毛状根的基因rolB和 rolC整合到云南萝芙木基因组中,HPLC含量检测表明毛状根中利血平的含量比自然根中利血平的含量有显著的增加,因此可以作为利血平来源生产的有效途径之一．     

丹参毛状根诱导条件的优化

以发根农杆菌C58C1，A4，R1601为试验菌株，叶片、叶柄、茎段为外植体，研究了菌液浓度、共培养时间和乙酰丁香酮（AS）等因素对丹参毛状根转化频率的影响，并用PCR对诱导出的毛状根进行了阳性鉴定．试验结果表明：菌株和外植体类型对丹参毛状根诱导率存在着显著的差异；最佳共培养时间为3—4d，乙酰丁香酮（AS）浓度为400μmol／L有利于促进毛状根的产生．为进一步利用基因工程技术进行中药丹参的品质改良奠定了基础．     

盾叶薯蓣毛状根的诱导与薯蓣皂甙元的生产

报道盾叶薯蓣形成毛状根诱导的方法及不同毛状根系间生长速率与薯蓣皂甙元含量的差异．结果表明,盾叶薯蓣的幼叶和茎段难被R1601、A4和LBA9402等发根农杆菌菌株诱导出毛状根,但愈伤组织则比较容易;34%的被R1601菌株感染、并在添加200μmol／L乙酰丁香酮的共培养基上培养3d的愈伤可以在30d内形成毛状根;不同的毛状根系在生长速率与薯蓣皂甙元含量方面存在显著差异．     

怀牛膝毛状根诱导及培养体系的建立

以牛膝叶片为外植体,研究了不同发根农杆菌、培养基、乙酰丁香酮(AS)对毛状根诱导率及其生长的影响.结果表明,发根农杆菌不同菌种对牛膝叶片转化率有显著影响,3个供试菌种中ATCC15834菌株诱导率最高;在1/2MS无激素固体培养基上毛状根的诱导率及生长状况均优于MS培养基;100μmol·L-1 AS可以有效提高毛状根诱导率.毛状根从叶片形态学下端中脉切口处形成的愈伤组织上产生,能在无外源激素的培养基上自主生长.PCR扩增结果显示发根农杆菌Ri质粒的rolB基因已在牛膝毛状根基因组中插入、整合并得到表达.建立了牛膝毛状根诱导培养体系,为利用毛状根大规模生产药用成分奠定了基础.     

大花萱草不同外植体初代培养的比较研究

选用大花萱草新品种"baltimore oriole”的叶片、根段、茎尖、花茎、花托、花瓣和子房7种外植体,对愈伤组织的诱导进行研究.结果表明:茎尖外植体诱导从生芽效果最好,不受时间限制,但是污染率很高,且损坏花苗;花茎、花托、花瓣和子房取材受时间限制,花茎的愈伤组织诱导率较高,花托、子房愈伤组织诱导率较低,花瓣难以诱导出愈伤组织;叶片和根段取材方便但是难以诱导出愈伤组织.从茎尖和花茎诱导出的丛生芽及愈伤组织,转入继代培养基后获得了新生芽,而花托和子房诱导的愈伤组织干枯死亡.因此,大花萱草较适宜的外植体材料为茎尖和花茎.     

罗勒毛状根培养体系的优化

为寻找最佳罗勒毛状根培养体系优化方案,用四种发根农杆菌A4,R1601,C58C1,15834诱导药用植物罗勒外植体产生毛状根.实验从外植体、菌株、侵染时间、共培养四个因素优化罗勒毛状根培养体系.结果表明,用发根农杆菌R1601诱导罗勒叶片,预培养时间48h、共培养时间48h、侵染时间6min时,出根效果最好;用1/2MS液体培养基继代培养30d最佳.     

怀牛膝愈伤组织诱导及分化的研究

对怀牛膝叶片和茎段愈伤组织的诱导及分化进行了研究.结果表明:KT 0.5 mg/L+2,4-D 1.5 mg/L对叶片愈伤组织的诱导效果最好,KT 0.5 mg/L+NAA 1.5 mg/L对茎段愈伤组织的诱导效果最好,出愈率均达100%;KT 0.5 mg/L+NAA 1.5 mg/L有利于叶片形成的愈伤组织分化为根,6-BA 0.5 mg/L+NAA 1.5 mg/L则有利于茎段形成的愈伤组织分化为芽.     

温郁金组织培养高效再生及毛状根诱导体系初探

温郁金为浙江省道地药材"浙八味"之一,含有抗癌药用成分β-榄香烯等.从温郁金块根上端0.1—0.2 cm处剪取长1—1.5 cm的芽尖作为外植体,利用0.1%升汞消毒10 min,在丛生芽培养基MS+6-BA 2 mg/L+IAA 1 mg/L+ZT 1 mg/L+Cef 500 mg/L上能高效获得丛生芽,芽的再生率可达100%.丛生芽经切割后置于生根培养基MS+6-BA 0.5 mg/L+IAA 0.5 mg/L上形成带根的完整植株.此外,利用发根农杆菌K599侵染温郁金组培苗的茎段、块根和根茎段,均成功诱导出毛状根;其中,根茎段毛状根的诱导率可达75%.研究结果为快速大量繁殖和培育脱毒的温郁金以及利用毛状根工厂化生长温郁金药用成分提供了基础.     

长春花转化毛状根诱导及培养条件的优化

用A4和R10002种发根农杆菌菌株分别感染长春花的愈伤组织、真叶叶片、叶柄及根，诱导出毛状根。研究了不同外植体、不同菌株以及外植体预培养时间、与发根农杆菌共培养时间、乙酰丁香酮（As)等条件对转化频率的影响，其结果为：A4转化频率高于R1000，真叶叶片转化频率最高，最佳预培养时间为2-3d；最佳共培养时间2－3d；以100mg/mL的As同时加入共培养基中转化频率高达86．25％。不同种类的培养基以及碳源、氮源对毛状根生长也有较大的影响。     

红叶李组织培养快繁技术

通过培养红叶李的不同外植体，建立适宜的组织培养条件和快繁技术，为红叶李的组培繁殖提供技术参考。采用MS为基本培养基，添加不同浓度的激素，以茎尖、腋芽、茎段和叶片作为外植体进行培养。结果表明：茎尖和腋芽既能诱导芽的生长又能诱导愈伤组织，且诱导效果较好，而茎段仅能诱导产生愈伤组织，叶片的诱导效果不明显。BA1．0mg／L 2，4-D0．5～2．0mg／L组合的诱导效果最佳，单芽在BA1．0mg／L IBA0．5～2．0mg／L培养基中继代培养都能诱导产生丛芽，诱导率达70％。     

商陆发状根生长动力学的研究

发根农杆菌株1334感染商陆无菌苗的子叶,获得发状根,经PCR检测扩增出了560bp的rolC基因的目的片断,采用液体振荡培养对发状根的生长势及不同理化因子对其的影响进行了研究,在MS培养液,pH=8,添加激素0.1mg/LIAA的条件下发根最大生长量达到了8.3795g.     

发根农杆菌A4转化黄瓜获得发状根再生植株

研究以黄瓜栽培品种津研四号为试材,比较了培养基中添激素对自然生根及发状根诱导的影响。无菌苗子叶及下胚轴经发根农杆菌Ａ４侵染后２周诱导出发状根,发状根在无激素的ＭＳ筛选培养基上能够自主生长,在附加ＢＡ２．０ｍｇ／Ｌ,ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ的筛选分化培养基上分化出不定芽,ＧＵＳ染色表明转化植株呈阳性反应。     

发根农杆菌转化胀果甘草的研究

利用发根农杆菌R1601对药用植物胀果甘草(Glycyrrhiza inflat Bat)进行转化,诱导其产生发根.在发根诱导过程中,分别用不同菌液浓度、不同浸染时间对胀果甘草子叶、胚轴进行转化处理,统计、比较各条件下的发根率,为发根进行液体悬浮培养以及随后的规模性培养提供数据基础.结果表明,用稀释2倍的茵液浸染子叶8 min时,发根诱导率最高,为56.49%.     

芦柑子叶培养中过氧化物酶活性及其同工酶的变化

以芦柑子叶为外植体，对脱分化产生愈伤组织至再分化产生器官的发育过程中过氧化物酶活性及同工酶谱变化的研究结果表明，再分化过程的酶活性高于脱分化过程，根分化过程的酶活性高于芽分化过程。同工酶分析揭示出１０条酶带，其中由子叶经愈伤组织到分化出芽的过程中先后出现了９条酶带，带５（Ｒ＿ｆ＝０．１６７）为这一过程所特有；由子叶经愈伤组织到分化出根的过程中也先后出现了９条酶带，带６（Ｒ＿ｆ＝０．２２５）为该过程所特有。     

提高毛状根中次生代谢产物含量的方法与技术

毛状根培养是生产植物次生代谢产物的新途径、新方法.如何提高毛状根中次生代谢产物的产量,成为毛状根培养研究的一个新热点.概述了在利用毛状根生产植物次生代谢产物过程中,通过改变培养条件以及应用生物技术来提高毛状根中次生代谢产物含量的研究方法和技术,为进一步培养毛状根生产次生代谢产物提供可参考的价值.     

发根农杆菌A4对荞麦的遗传转化

用发根农杆菌Ａ４对荞麦的下胚轴和子叶进行离体转化,得到ＲｉＴ－ＤＮＡ表达的发状根。不同的培养环境对发状根的和生长有一定的影响,表现为发状根在液体培养基上比在固体培养基上生长更为迅速,且在培养基中含一定浓度的Ｃｕ＾２＋有助于发状根的形成。     

颠茄发根培养系统的建立

用种子萌发获得颠茄无菌苗,用发根农杆菌A4侵染颠茄无菌苗真叶,所有感染了的叶片都从伤口处产生发根．在无激素培养基中,发根表现出高频侧向分支、生长迅速、失去向地性的典型形态特征．PCR检测表明rolB、rolC确实整合到颠茄发根基因组中,用MS液体培养基发酵培养35 d,3个发根单克隆中发根生物量最大增长率达7．5倍,T6单克隆莨菪碱含量最高(5．61 mg／g),与种植在田间的颠茄植株的根相比,提高7倍;T2单克隆东莨菪碱含量最高,提高9倍多(2．35 mg／ g)．本研究揭示了rol基因足以诱导获得生长迅速和次生代谢产物积累的发根．表明颠茄转基因发根的发酵培养不失为生产托品烷类生物碱的一条好途径．