高产谷氨酸菌S9114的选育及生产实绩

以天津短杆菌（Ｂｒｅｖ．ｔｉａｎｊｉｎ）Ｔ６－１３出发，经紫外线、亚硝基胍用原生质体等诱变处理，选育出Ｓ９１１４菌株，具有耐高糖、耐高谷氨酸，不利用谷氨酸和产酸率高的特性。摇瓶产酸最高达９６．９ｇ／Ｌ，比原出发菌提高５０％。经工艺条件优化，在２０ｍ３发酵罐最高产酸９２．３ｇ／Ｌ（转化率５６．５％）。在６０ｍ３发酵罐连续１０批平均产酸８２．１ｇ／Ｌ，转化率４８．７４％、在１５００升发酵罐进行高生物素添加青霉素流加糖的工艺实验，最高产酸达９８．７ｇ／Ｌ，转化率５２．２％，周期２６小时。     

谷氨酸高产菌TG-866的选育及发酵罐试验

以TG—3菌为亲株,经紫外线、硫酸二乙酯的复合诱变,定向选育抗单氟乙酸、耐高糖、耐高谷氨酸、以谷氨酸为唯一碳源不长和以琥珀酸为唯一碳源生长良好的突变株,选育出TG—866谷氨酸高产菌.在实验室的摇瓶试验中,连续4批达到平均产酸8.37%,平均转化率55.1%。在500L发酵罐上以淀粉水解糖为原料,取得了连续5批产酸7.5％以上,转化率50％以上的成绩。     

多菌种固态发酵饲料中赖氨酸发酵的探讨

赖氨酸产生菌SK—F1—08应用于以酒精糟、白酒糟、碎玉米、啤酒糟等为原料生成的“多菌种混合同态发酵”生物饲料中,在2．5％营养液F协同作用下,该饲料赖氨酸产酸率平均为3．08％,最高可达到4．98％。     

衣康酸小试发酵条件研究

对衣康酸产生菌（ＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓＴｅｒｒｅｕｓＮＲＲＬ１９６０）在不同条件下的小试发酵进行了探讨。通过反复试验，确立了衣康酸最佳斜面培养基、发酵培养基和发酵条件。摇瓶培养７２ｈｒ后，残糖可降至０．１％Ａ右；产酸率平均为４８．６ｇ／Ｌ；对糖的转化率平均为５４．９％。     

合成环十五内酯脂肪酶产生菌的筛选及酶活对转化的影响

从富含油脂的土壤中筛选到6株产脂肪酶的菌株,其所产脂肪酶在环己烷溶剂中具有催化15-羟基十五烷酸甲酯关环生成环十五内酯的活性,其中GXU08的转化率最高为17％．另外,研究了GXU08的脂肪酶水解活力对转化率的影响．结果表明：转化率随脂肪酶活力的增加而增大,但增大到一定程度时转化率不随酶活的增加而增大;继续加入酶粉进行反应,转化率又有所增加．     

弱化H+-ATPase的德氏乳杆菌乳酸亚种的生理特性研究

以德氏乳杆菌乳酸亚种（L5）为出发菌株,以新霉素为选择 "压力",获得了弱化H+-ATPase变异菌株5M1、5M6和5B1。与出发菌株L5（对照）相比,各变异株的H+-ATPase活力分别下降51.3%、27.7%和34.3％。对变异株5M1、5M6和5B1的形态及其生理特性研究表明,变异株的细胞较菌株L5细长。L5的ATP含量为0.63×10-18mol/个,明显低于变异菌株;变异株5M6和5B1的ATP含量分别为1.18×10-18mol/个和1.38×10-18mol/个;变异株5M1的ATP含量最高,约为1.60×10-18mol/个。当各菌株在MRS培养基中37℃培养12h后,变异株表现出较高的谷氨酸到γ-氨基丁酸的转化率,其中变异株5M6最高,为16.73%,变异株5M1和5B1谷氨酸转化率居中,分别为15.6%和15.4%,出发菌株L5的谷氨酸转化率最低,为13.91%。与出发菌株L5相比,变异株5M6、5M1和5B1的H+-ATPase活性下降导致其耐酸性和耐盐性降低。     

谷氨酸生产菌的选育

研究代谢调节突变株的选育方法．以北京棒杆菌Q-72为出发菌株,经紫外线诱变,筛选能在以琥珀酸为唯一碳源的培养基上生长良好的菌株,强化CO2固定反应．突变株UH62的产酸率和转化率分别比出发菌株提高1．45％和9．1％．     

浮萍热裂解处理及其在微生物燃料电池中的产电性能研究

以浮萍为生物质能原料,采用酸式热裂解进行预处理,考察了处理液在微生物燃料电池(MFC)中的产电性能.结果表明:浮萍热裂解最佳预处理条件为:反应温度160℃,反应时间80 min,草酸投加量3%(质量分数).该条件下每克浮萍的还原糖产量为0.272 g,浮萍固体消化率可达到55%.当采用稀释10倍的热裂解液时,MFC的最大功率密度为521 mW·m~(-2),总内阻最小值为145.9Ω,库仑效率(CE)最大值为12.1%.浮萍酸式热裂解液浓度的增加,对MFC输出的最大电压影响不大,化学需氧量(COD)的去除率均可达到91%以上,最终pH值在7.7～8.0.三维荧光光谱分析结果表明:水中的多种有机物均得到了有效的降解.在稀释20,10和5倍酸热裂解液条件下,厌氧醋菌属(Acetoanaerobium)相对丰度分别为30.1%,42.2%和33.8%.牦牛瘤胃菌属(Proteiniclasticum)在稀释20倍时相对丰度最高,为19.5%;在稀释5倍酸热裂解液条件下,产乙酸嗜蛋白质菌属(Proteiniphilum)相对丰度最高达到16.0%.     

克拉维酸高产菌的选育

在克拉维酸高产菌的选育过程中,应用解除终产物结构类似物作为选择压力,能有效地除去低效价菌株,提高高产菌株的检出率,较传统筛选法优越.试验表明,以带棒链霉菌Strep tomycesclavuligerusCCRC11518(效价为382.4×10-6g/mL)为出发菌,经紫外线诱变,筛选到一株抗20×10-3g/mL的舒巴坦钠突变株my51,my51菌株产克拉维酸的效价达到834.7×10-6g/mL,比出发菌提高了1.18倍.该菌株连续传代7代,克拉维酸的效价保持稳定.     

2-酮基-D-葡萄糖酸产生菌Ac9抗噬菌体菌株的选育

以2-酮基-D-葡萄糖酸产生菌Ac9为出发菌株,采用紫外线诱变与添加噬菌体进行筛选相结合的方法,获得了两株抗性菌株Au4-2和Af3.在种子培养基中含有噬菌体的条件下,31℃,摇瓶培养24 h,抗性菌株Au4-2与Af3的菌体生长光密度值OD650×20分别为0.74,0.55.镜检显示菌体量多,呈短杆状;而对照菌株Ac9的菌体光密度值则为0.14,镜检显示菌体量少,呈球状.在发酵培养基中添加噬菌体的条件下,31℃,摇瓶培养72 h,抗性菌株Au4-2与Af3 产酸分别可达15.45 g/100 mL,14.55 g/100 mL;而对照菌株则几乎没有产酸.     

利用微生物转化丙烯腈生产丙烯酸的研究

从长期受工业污水污染的河水、污泥中分离到４７株能以丙烯腈或丙腈为唯一碳、氮源或氮源生长的菌株．经高压液相色谱（ＨＰＬＣ）测试发现有５株菌在以０．１５ｍｏｌ／Ｌ丙烯腈为底物的转化反应中，产物除丙烯酸外几乎无副产物．探索了菌株６－１３的基本培养特性及其酶促反应条件．在选定条件下．通过分批补加丙烯腈，连续反应４ｈ，反应液中累积丙烯酸０．５２６ｍｏｌ／Ｌ，未检出丙烯酰胺，丙烯腈转化率高于９６％，丙烯酸由红外光谱和质谱确证．     

抗番茄青枯病内生拮抗细菌的筛选及室内防效测定

从健康番茄体内分离到了93株内生细菌。采用含菌平板抑菌圈测定法，筛选出了3株对番茄青枯菌具有较强拮抗力的细菌菌株ZB—1、ZB-2和ZB-6。温室盆栽防病试验结果表明，内生细菌菌株ZB-6对植株进行预处理后，番茄青枯病防病效果可达63—65％，说明该菌株对番茄青枯病发生具有较好预防效果。     

灵芝富锌特性的研究

研究了三种不同灵芝菌在平板培养和液态培养时的耐锌特性，从中选出一株较耐锌的韩芝菌种，对影响韩芝液态培养富锌的影响因素进行了探讨。当培养基初始ｐＨ５．５，装液量为１２５ｍｌ／２５０ｍｌ三角瓶，培养时间１３天，锌富集率最高达到４０．１％。     

利用优选的微卫星标记建立常用大小鼠品系的遗传监测体系

摘要 目的 利用微卫星位点在不同近交系小鼠、大鼠中可能具有的多态性,分别筛选出可以一次性区别5种常用近交系小鼠和3种常用近交系大鼠的微卫星引物组合,为近交系小鼠和大鼠的遗传监测分析提供高效的微卫星位点与简易可靠的鉴定条件。 方法 通过查询相关数据库以及文献报道,按照已有明确的微卫星实验数据记录为原则,进行比对和筛选,组成了小鼠37 个和大鼠24个微卫星位点库。 通过PCR扩增和5%琼脂糖电泳鉴定,优化筛选出可以区分单一品系和所有品系的微卫星位点组合。 结果 小鼠优选出11个位点可用于5种常用近交系的鉴定,并建立了1个包含6个微卫星位点的库可用于5种小鼠品系的遗传监测;大鼠优选出6个微卫星位点,可用于3种常用近交系的监测。 结论 成功建立了一套可以区分常用5种小鼠和3种大鼠品系的微卫星监测方法。     

利用原生质体融合技术筛选红霉素优良菌株

以红霉素高产菌HE-08-6及低产优组分菌HA-08-20为出发菌株,其原生质体经紫外诱变后在适宜条件下进行融合,再生培养后挑取融合子89株,经筛选得到3株具有二亲本优良性状的高产菌株HEA-08-01,HEA-08-02,HEA-08-03.其化学效价较出发菌株HA-08-20提高约25%,产品的红霉素A组分含量较出发菌株HE-08-6提高约26%.传代培养证明该菌株具有一定的遗传稳定性,在50L-Fus智能发酵罐上连续3批发酵结果表明,该优良菌种在提高红霉素产品质量及效价上取得较大进展,具有推广应用价值.     

从大口黑鲈胃、肠道中分离的部分好氧菌的研究

从大口黑鲈（Microptens salmoides)胃、肠道中分离到24个好氧菌株。经过自动微生物鉴定系统（VITEK－AMS－60和VITEK－AMS－CC2）鉴定结果是：真菌只有1个菌株（茁芽毛孢酵母Tri-chosporon pullulans)；细菌有23个菌株，其中革兰氏阳性菌只有1个菌株（干燥棒状杆菌Corynebacterium xerosis)，1个非发酵性菌株（食酸假单胞菌Pseudomonas acidovorans)，其余21个菌株均是革兰氏阴性菌；革兰氏阴性菌中，支气管败血性鲍特氏菌（Bordetella bronchiseptica)5个，尿放线杆菌（Actinobacillus ureae)4个，粘黄杆菌（Flavobacterium gleum)4个，产吲哚黄杆菌（F.indologenes)3个，恶臭假单胞菌（P.putida)3个，泡囊假单胞菌（P.vesicularis)2个。24个菌株中5个水解淀粉，5个水解牛奶；在22种药物敏感试验中，恶臭假单胞菌肠14菌株和支气管败血性鲍特氏菌肠17菌株分别对17种药物有耐药性；24个菌株中，对氨苄青霉素、先锋V（头孢唑啉）、青霉素G不敏感的菌分别有23株、23株、22株。     

抗药标记酿酒酵母菌株间原生质体融合的研究

酵母属中的一些种是生产单细胞蛋白的主要菌株,通过遗传工程选育高赖氨酸酵母有重要的理论意义和价值,采用100mg/ml蜗牛酶制备亲株的原生质体,在35%聚乙二醇(MW6000)的作用下,成功地获得了酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的株间融合重组子,融合频率为10~(-8)-10~(-7),经过五代的移接验证,融合子稳定,融合子抗药性产生叠加效应,个体形态发生了变化,DNA含量加倍,赖氨酸含量有所提高.     

Isolation and identification of a novel coronavirus from wild bird

A novel coronavirus strain was isolated from laryngotracheal swab of wild partridge and designated as partridge/GD/S14/2003 (S14). Its whole genomic sequence was obtained (GenBank Accession number: AY646283) through RT-PCR amplification, cloning, nucleotide sequencing, and analysis by the DNASTAR program. To investigate the origin of the virus, we further analyzed the nucleotide sequences of the main structural proteins, and compared those with other available virus isolates. Our results showed that the highest nucleotide homologies between the S1 gene of S14 strain and those of nephrogenic-type strains JX1-99 and TJ2-96 were 94.6% and 93.4%, respectively. In addition, a relatively high genetic identity, 85% and 84.3%, respectively, was detected between S1 gene of S14 and those of strains QXIBV and LX4. The results suggested that the S14 strain may be originated from or related to nephrogenic-type and proventriculus-type infectious bronchitis virus (IBV). The highest nucleotide homology between the S2 gene of S14 strain and those of QXIBV and LX4 was 85% and 84.3%, respectively and all of them belonged to group II coronaviruses. The highest nucleotide homology between the M gene of S14 strain and those of strains SAIB20 and GD6-98 was 90.6% and 90.2%, respectively by which S14 belonged to group III. Although they displayed high level of genetic identity in S1 and S2 gene, there was lower homology of M coding sequences between S14 and BJ, and between S14 and QXIBV strains. Phylogenetic analysis of N gene indicated that group I strains might evolve from RNA recombination between strain H52 and Gray; while group II strains from strain H120 and D1466. S14 strain had the highest N gene homology with strain QXIBV which was 95.7%, thus classified as a group III member. Strains SAIB20 and GD6-98 which were closely related to the M gene of S14 strain belonged to group I and IV, respectively. A possible role of partridge S14 strain may play in the process of coronavirus evolution is discussed.     

养禽场周围水环境中磺胺类抗性菌、抗性基因分布

为进行养禽场周围水环境中磺胺类抗性菌、抗性基因分布的研究,从3家养禽场多个区域水环境中分离的56株大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli),应用肉汤微量稀释法分析磺胺类药物敏感性,应用PCR方法检测磺胺类药物抗性基因。结果有18株(32.14%)磺胺类抗性菌,对利福平的耐受性最弱,对氯霉素的耐受能性最强;共检测到64个抗性基因,三个养禽场分别为:19(29.69%)、29(45.31%)、16(25.00%);分别为sul1 18(28.12%)、sul2 13(20.32%)、sul3 7(10.94%)、Int1 18(28.12%)、Int2 8(12.50%)。含一种抗性基因的菌株为1株、含2种抗性基因的菌株为1株、含三种抗性基因的菌株为6株、含四种抗性基因的菌株为5株、含五种抗性基因的菌株为4株,而1株无抗生素抗性的菌株检出抗性基因。结果表明在养禽场场内检测到抗性基因和抗性菌株数量较高、养禽场周围水环境中存在磺胺类抗性菌株,且具有多重抗性,可能对生态环境的产生一定的不良影响。