大鼠胚胎视网膜内RGNTF及其受体的免疫组织化学定位

我们已从顶盖脑组织提取液中分离出30kD分子量的蛋白质,并证明它对新生大鼠视网膜神经节细胞具有维持存活、促进生长的作用,将其命名为视网膜节细胞神经诱向因子(RGNTF)。在此基础上我们又制备了抗RGNTF单克隆抗体和RGNTF抗独特型单克隆抗体。本文用以上两种抗体,对大鼠胚胎视网膜进行免疫组织化学反应,观察RGNTF及其受体在视网膜的分布,为探讨RGNTF对发生中视网膜节细胞的功能意义提供形态学依据。     

视网膜神经节细胞诱向因子(RGNTF)分子克隆及其cDNA序列分析

1991年周明华等分离、鉴定的30kuRGNTF新蛋白,具有维持和促进视网膜神经节细胞存活、生长的效应;经原位杂交在初生大鼠的上丘浅、深部发现有RGNTFmRNA阳性神经元;继而制备了RGNTF的单抗和抗独特性单抗,观察RGNTF在大鼠胚胎、幼鼠及成体鼠的定位分布.为能进一步研究RGNTF的功能,正进行该因子的基因克隆研究.本实验取50只新生大鼠上丘脑组织(湿重1g),分离提纯mRNA,反转录合成cDNA,装上EcoRI接头再克隆到λgtll载     

抗β肾上腺素能药物单克隆抗体的分子解剖学

本文为巴斯德研究院生物工程研究所Johan Hoebeke教授应邀为本刊撰写的专题综述。Hoebeke教授是国际上研究β肾上腺素能受体的权威领头人。本文总结了他十年间的研究成果。作者介绍了用一株抗β肾上腺素能受体单克隆抗体对β肾上腺素能受体进行分子解剖学研究的系列结果。值得注意的是作者发现抗独特型抗体的作用不像Jerne等人所描述的那样是起“分子模拟”作用,抗独特型抗体/独特型抗体或配体/β肾上腺素能受体之间的相互作用首先要发生一种“构像诱导”效应。这为研究抗独特型抗体和药物的分子作用机制开辟了新的方向。     

人早期胎盘绒毛中多巴胺和去甲肾上腺素受体的免疫组织化学定位

许多研究表明:人早期胎盘是一个复杂的神经内分泌器官.我们已观察到人早期胎盘中不仅存在多种调节肽,而且存在5-羟色胺(5-HT),多巴胺(DA)和去甲肾上腺素(NE)等多种单胺类神经递质;它们在胚泡着床和早期妊娠的维持中起着重要的作用.但有关人早期胎盘绒毛中单胺类神经递质受体的研究,迄今未见报道.作者最近已成功地制备了DA和NE抗独特型抗体,并证实它们分别对DA和NE受体具有特异性免疫反应.本实验用以上两种抗独特型抗体的免疫组织化学法,探讨了DA和NE受体在人早期胎盘绒毛中的分布,为研究该两种神经递质在胎盘中的作用及其机理提供形态学依据.1 材料与方法1.1 试剂兔DA和NE抗独特型抗体(Anti-idiotypic antibody)均为中国科学院动物研究所本实验室自制;过氧化物酶-抗过氧化物酶复合物(PAP),由第四军医大学组织胚胎教研室提供.1.2 胎盘绒毛石蜡切片的制备由人工流产胚胎取得新鲜的胎盘绒毛(7～8周)6例(由北京市海淀医院计划生育门诊室提供),立即用生理盐水洗去血液,剪成小块,然后用Bouin液固定;石蜡包埋,制成5～7μm的连续切片.     

抗人绒毛膜促性腺激素独特型抗体的制备

内影像型抗独特型抗体(Anti-Id)具有与抗原相同或相似的抗体结合部位,它们可能具有与抗原相似的空间结构和免疫原性。由激素抗体产生的内影像型Anti-Id有激素相似的生物活性,因此利用Anti-Id研究激素和受体的结构与功能意义深远。近年来,用Anti-Id免疫动物在病毒、细菌、寄生虫抗感染免疫研究中初见成效,Anti-Id可望发展成新型的免疫疫苗而取代传统的菌体疫苗及减毒疫苗。     

免疫多样性的遗传基础(Ⅱ)——T细胞受体及其多样性

T细胞受体是T细胞表达于细胞膜的抗原受体(图1)。因为提取困难(膜型,量少),T细胞受体的研究远远落后于抗体。其实体为何物,曾经长期不明。1982年后,才有了突破。首先,制成抗T细胞受体的单克隆抗体,通过免疫沉淀法第一次取得了T细胞受体。继而分子遗传学家利用削减法(subtraction method)得到编码T细胞受体的cDNA,又从cDNA的核苷酸序列译出T细胞受体的     

GnRH受体在文昌鱼神经系统、哈氏窝和性腺的免疫组织化学定位

用ＧｎＲＨ抗独特型抗体和ＡＰＡ免疫组织化学方法,对ＧｎＲＨ受体在文昌鱼神经系统（脑和神经管）、哈氏窝和性腺的免疫活性进行了定位。发现在文昌鱼脑和神经管内的神经细胞和神经纤维,以及性腺发育不同时期的哈氏窝上皮细胞均存在ＧｎＲＨ受体免疫活性。同时,还发现不同发育时期性腺（卵巢和精巢）中也存在ＧｎＲＨ受体。这些发现为ＧｎＲＨ受体介导脑和哈氏窝之间的信息传递与调节,以及了解文昌鱼生殖内分泌调控轴－脑－哈氏     

单克隆抗体制备的一种特异电融合方法研究

常规制备单克隆抗体(McAb),一般采用的都是非特异融合方法,这就导致(1)分泌特异性抗体的杂交瘤阳性率不高、筛选工作量大;(2)不易得到高亲和力的McAb。近年来,Lo等和Wojchowski等发展了生物素-抗生物素-抗体-抗原介导的特异电融合,克服了上述缺点。然而,该方法较繁琐,不宜推广应用。我们用双功能连接剂将抗原直接挂到骨髓瘤细     

抗Ⅱ型脊髓灰质炎病毒的单克隆抗体

自Khler和Milstein于1975年建立了分泌特异性抗体的淋巴细胞杂交瘤技术以来,这一新的技术在许多方面得到了应用,很多新的单克隆抗体被陆续建立起来.但是,尚未有抗人肠道病毒单克隆抗体的研究报告.为了在国内发展杂交瘤技术。并在国际上弥补这方面的     

《重组抗体》

重组抗体技术使制备人源化抗体和人源抗体成为可能，而这是其他常规的多克隆或单克隆抗体制备方法所不可能做到的．本书共分为22章，介绍了4个方面的技术：抗体库技术，包括组合抗体库、噬菌体抗体库、细菌和酵母展示的抗体库、核糖体展示的抗体库及其抗体库的筛选技术；重组抗体基因的改造和表达，包括抗体亲和力成熟、抗体人源化改造和稳定性改造，以及抗体基因在原核.     

人和猪SRBC受体的比较研究

以兔抗猪SRBC受体抗血清IgG为配基制备的亲和层析柱分离人血清受体(样品1)和猪血清受体(样品2)以及以兔抗人SRBC受体抗血清IgG为配基制备的亲和层析柱分离人血清受体(样品3)和猪血清受体(样品4)四种样品,它们都能提高因45℃     

甲型流感病毒H7N9血凝素单克隆抗体的制备及保护性研究

以H7N9甲型流感病毒(A/Shanghai/2/2013)全病毒灭活疫苗原液为免疫原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗甲型流感病毒H7N9血凝素(HA)的单克隆抗体.通过ELISA和血凝抑制(HI)试验初步筛选单克隆抗体,筛选后的Ig G类单克隆抗体用中和试验检测其中和活性.将有中和活性的单抗通过小鼠体内法大量制备腹水,腹水经亲和层析柱纯化后进行特异性及稳定性检测.同时在小鼠模型中进行了HA单克隆抗体抵抗同源流感病毒感染的预防性和治疗性实验,通过观察小鼠的症状并统计小鼠的存活率、体重变化和肺部病毒滴度等指标发现单抗6A3在预防性和治疗性实验中都可以有效地抵抗H7N9流感病毒的感染.显著降低肺部病毒滴度,对小鼠提供100%的保护.甲型流感病毒H7N9血凝素单克隆抗体的成功制备为进一步研究H7N9流感病毒血凝素的抗原表位及治疗诊断试剂的开发奠定了基础.     

抗CD20嵌合Fab′片段对B淋巴瘤细胞的生长抑制作用

利用PCR方法从抗CD20ScFv表达载体上扩增重链可变区(VH)、轻链可变区(VL)基因,然后将VH,VL基因重组到Fab′表达载体中,构建成抗CD20嵌合抗体Fab′片段表达载体pYZFcd20.用pYZFcd20转化大肠杆菌16C9,在16C9菌中分泌表达可溶性抗CD20Fab′片段,经分离纯化获得具有CD20抗原特异结合活性的嵌合抗CD20抗体Fab′片段.竞争性免疫荧光抑制实验表明,抗CD20Fab′片段能竞争性抑制亲本鼠源性抗CD20单克隆抗体HI47和Daudi细胞CD20结合.MTT法测定结果显示,抗CD20Fab′对Daudi细胞生长具有抑制作用.     

单克隆抗体与重症肌无力

重症肌无力——肌群逐渐衰弱和容易疲劳的疾病——现已弄清是一种自身免疫性疾病.关于该疾病是否由抗体引起,人们一直争论不休.最近,加利福尼亚索克研究所的约翰·林德斯托姆等人找到了比较满意的答案.他们制备了一组相应的单克隆抗体,用它们来鉴别患者血清中存在的抗体类型. 神经通过释放微量的化学物质     

第三代抗体及其在寄生虫学中的应用

以基因工程抗体为代表的第三代抗体具有多克隆抗体(第一代抗体)和普通单克隆抗体(第二代抗体)所无法比拟的优越性,在寄生虫学中展示了其诱人的应用前景。     

单克隆抗体的促进作用的机制

单克隆抗体在免疫学测定中的应用已日趋广泛。最近观察到一种单克隆抗体结合于相应的抗原后,可能增强另一种单克隆抗体对同一抗原的结合。此种作用称为单克隆抗体的促进作用,前一种单克隆抗体称为促进抗体。现已提出二种观点来解释单克隆抗体的促进作用。一种观点认为,促进抗体结合于相应的抗原后,抗原发生构象改变(allosteric change),使另一     

人体细胞产生的抗癌抗体

米尔斯坦(C.Milstein)制出的单克隆抗体(单系抗体),给治疗癌症带来了希望。但这种抗体注入人体后,会因为是一种异物而被排斥的问题却未解决。最近剑桥大学的路德维希癌症研究所和医学研究会临床肿瘤室的西科拉(K.Sikora)和他的同事们     

中国小麦花叶病毒RNA2外壳蛋白通读区及19 ku富半胱氨酸基因的克隆、表达及其编码蛋白定位

应用RT-PCR扩增中国小麦花叶病毒(CWMV)外壳蛋白通读区(readthrough, RT) 5′端(RTn)和3′端(RTc)及19 ku的富含半胱氨酸蛋白基因, 分别克隆并在E. Coli中表达, 表达蛋白粗提纯后免疫小鼠, 制备相应的抗血清和单克隆抗体. 用各种抗体检测小麦病叶汁液中RTn, RTc和19 ku蛋白. 结果表明, RTn和RTc分布在病叶细胞中的CWMV病毒粒子表面, 而19 ku蛋白则均匀分布于细胞质中.     

苯二氮受体在发育中和成体大鼠脊髓的分布

苯二氮(艹卓)类(benzodidzepines BZ)是一类抗焦虑药物,它通过机体内苯二氮(艹卓)受体(BZ-R)的介导起作用.虽然Huntley等(1990)和Vitoricd等(1990)报道过苯二氮(艹卓)受体在脑内的分布及年龄性变化,但是在脊髓内的分布情况迄今尚无报道.本文用苯二氮(艹卓)受体单克隆抗体的免疫组织化学反应,观察了苯二氮(艹卓)受体在不同年龄组大鼠脊髓的分布,为进一步探讨此受体在脊髓内的生理和药理的作用机理提供形态学依据.     

抗人乳腺癌单克隆抗体BG_6的制备与鉴定

本文报道一株用新的联合免疫方案制备得到的抗人乳腺癌单克隆抗体BG_6(简称单抗BG_6)及其初步鉴定结果。用乳腺癌患者转移淋巴结单细胞悬液对BALB/c小鼠进行初次免疫,3周后改用人乳腺癌细胞系MCF-