禽流感病毒通用型荧光定量PCR检测试剂盒比对结果分析

对6种禽流感病毒通用型荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction),PCR检测试剂盒进行比对与科学评价,为实验室采购提供依据。利用禽流感病毒H5、H7、H9亚型标准品,鸡新城疫活疫苗与传染性支气管炎活疫苗对市售的6种品牌(分别记为A、B、C、D、E、F)禽流感病毒通用型荧光定量PCR检测试剂盒灵敏性与特异性进行了比对,并对97份临床样品进行了检测,筛选出禽流感病毒通用型最佳检测试剂盒。结果表明:A厂家试剂盒最低可检出1:100倍稀释的H7亚型标准品浓度,B厂家试剂盒最低可检出1:1倍稀释的H7亚型标准品浓度,C厂家试剂盒最低可检出1:10倍稀释的H7亚型标准品浓度,D厂家试剂盒最低可检出1:10倍稀释的H7亚型标准品浓度,E厂家试剂盒最低可检出1:1 000倍稀释的H7亚型标准品浓度, F厂家试剂盒最低可检出1:10倍稀释的H7亚型标准品浓度,6种试剂盒特异性均良好。综上,E厂家试剂盒优于其他厂家试剂盒,可以作为动物疫病检测实验室在实施监测任务中的首要选择。     

酶联免疫吸附法检测哈密瓜(WMV—2)种子及幼苗的带毒研究

本文采用微量板间接酶联免疫吸附法检测西瓜花叶病毒获得成功。此方法灵敏度高,特异性强,能够检测病毒提纯液的最低浓度为40毫微克/毫升,也能检测出稀释40000倍病叶澄清液中的病毒,灵敏度比琼腊双扩散高1000倍以上。间接酶联免疫吸附法也能检测出单粒哈密瓜种子及单株幼苗的西瓜花叶病毒,测得种子带毒率为22％,幼苗带毒率为20％。此法快速简便,适合大量种子及幼苗标样的检测,尤其对于田间幼苗的隐症带毒及流行研究更有实际意义。     

厦门大学研制出甲型流感病毒快速检测试剂

日前,厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心研制出甲型流感病毒快速检测试剂．检出本次甲型H1N1流感流行病毒株的灵敏度比普通快速检测试剂高10倍至100倍。     

对分析化学实验中两个问题的讨论

在定性分析中,常用灵敏度来评价某种鉴定反应的灵敏性。灵敏度在数值上表示为检出限量和最低浓度,检出限量和最低浓度不能根据理论推算,而是由实验确定的。但是,在现行的定性分析教科书中,确定溶液中鉴定反应最低浓度的方法不太合理。 例如:在分析化学实验教材中,确定NH_4SCN鉴定Fe~(3+)的反应的灵敏度时,是把Fe~(3+)浓度为10毫克/毫升的酸性试液不断地稀释,配制成一系列浓度的Fe~(3+)试液,然后分别用饱和的NH_4SCN溶液进行鉴定,根据颜色的变化来确定该鉴定反应的灵敏度。当取一滴     

微量超氧化物歧化酶邻苯三酚/Vc测活法

在Vc终止剂法的基础上 ,邻苯三酚的加入量由终浓度2mmol/L降低为0.05mmol/L ,并提高反应溶液的 pH值至8.6 ,从而提高了SOD活力测定的灵敏度。使用本方法在SOD样品最大加入量1mL时 ,最低可检测到3.3×10-8 mol/(s·mL)SOD ,比Vc终止剂法灵敏度提高4倍。     

电量法测定微量水的卡尔·费休电解液的实验研究

电量法测定微量水时，卡尔·费休试剂配制的电解液的组成对微量水的测定具有重要意义。本文研究了卡尔·费休试剂中碘、二氧化硫和电解液中甲酰胺的浓度对反应速率的影响。并得到了卡尔·费休试剂配制的电解液中碘、二氧化硫、甲酰胺和乙二醇的最佳浓度范围。按最佳配方得到的阴极液和阳极液用于微量水的测定，相对标准偏差为±２％。     

Fenton试剂和UV-Fenton试剂深度处理垃圾渗滤液

研究了Fenton试剂和紫外光(UV)＿Fenton试剂联合深度处理垃圾渗滤液的最佳工艺条件,并对它们的处理效果进行比较,结果表明,最佳工艺条件是:H2O2量相当于COD耗氧值的1.5倍(即H2O2为0.96g/L)、pH值为3、FeSO4·7H2O的浓度为3.6×10-4mol/L(即100mg/L)、反应时间120min。在最佳工艺条件下,UV＿Fenton试剂联合处理渗滤液COD去除率达71.5%,比Fenton试剂单独处理时COD去除率提高了13%。     

白杨素衍生物通过抑制细胞凋亡保护谷氨酸诱导的神经细胞的损伤

研究白杨素衍生物对谷氨酸诱导的神经细胞损伤的保护作用.以谷氨酸构建体外培养SH-SY5Y神经细胞损伤的模型,选择噻唑蓝(MTT)法测定细胞存活率;使用酶标仪,对细胞培养液中过氧化氢酶的活性和超氧化物歧化酶的活性进行检测,并对丙二醛的含量及总抗氧化能力的高低进行检测;使用Annexin V/PI的方法染色,流式细胞术对细胞凋亡率进行检测.结果:不同浓度药物(50、100、200、400μmol/L)处理可显著提高细胞存活比例,药物浓度为200μmol/L时细胞存活比例最高,过氧化氢酶、超氧化物歧化酶的活性也最高,丙二醛的含量最低,总抗氧化达到最大水平.药物浓度为100、200μmol/L,其凋亡率降低到11.39％、5.02％,较模型组的凋亡率28.06％降低了2-5倍多.白杨素衍生物对谷氨酸诱导的SH-SY5 Y神经细胞拥有效果明显的保护作用,它的作用机制或是通过抑制细胞凋亡进而达到保护作用.     

胰升血糖素样肽-1受体激动剂高通量筛选细胞模型研究

为建立GLP-1受体激动剂的高通量筛选方法,将GLP-1受体质粒和报告基因质粒(3×CRE/3×MRE/SRE-LUC/pGL3)按照1∶5的比例共转染到CHO细胞中,建立GLP-1受体激动剂筛选细胞株。利用GLP-1内源激动剂探索和优化每孔细胞接种密度、荧光素酶表达时间、Bright-GloTM试剂用量、DMSO浓度等筛选条件,建立可靠的筛选方法。当细胞数目为4×104个/孔,激动剂孵育时间为8 h,Bright-GloTM试剂4倍稀释,每孔DMSO终质量分数小于1%时,系统Z′-因子为0.75。利用此模型对中药提取物库进行检测,发现有5个样品显示出活性。结果表明,该模型能够用于GLP-1受体激动剂的高通量筛选。     

乳苣水提取物诱导肺癌细胞H1299和A549的凋亡

为探讨乳苣水提取物对体外培养的肺癌细胞H1299和A549的影响,用不同浓度的乳苣水提取物分别作用于H1299和A549细胞,从细胞形态(显微镜观察)、细胞增殖活力(cck8法)、细胞凋亡(AnexinⅤ-FITC/PI染色)、线粒体膜电位(JC-1染色)几个方面检测乳苣水提取物对H1299和A549细胞的影响.当处理浓度达到1.2 mg/mL,作用细胞48 h后,细胞出现明显皱缩的凋亡形态学特征,与对照组相比处理组细胞增殖活力显著下降(P0.05).进一步用流式细胞仪检测发现浓度达到1.2 mg/mL的处理组细胞凋亡率显著提高,同时检测到细胞的膜电位都明显下降,呈剂量依赖关系.这些结果表明乳苣可以通过诱导H1299和A549细胞凋亡从而抑制其生长和增殖,是一种潜在的预防和抑制肿瘤生长的药食两用植物.     

PSTN系统中串口通信的实现

在实际应用系统中,有些设备没有封装TCP/IP协议,从而它们与计算机通讯只能采用RS-232串口进行.在讨论Mscomrm32.ocx控件的主要属性和主要事件基础上,通过一个实际通讯工程--市话停开系统(PSTN)为例子,阐明了在Delphi环境下如何利用微软的Mscomm32.ocx控件来设计进行通信程序的具体方法,同时还给出了实现此串口通信功能的整体程序设计框架和关键程序代码,最后还讨论了在设计通信控制程序中应考虑的问题.     

植物基因差异表达的研究方法及进展

对目前在植物基因差异表达研究领域主要采用的消减杂交,DDRT-PCR,cDNA-RDA,cDNA-AFLP,SSH,基因芯片和SAGE等研究方法的原理、特点、研究进展以及发展趋势进行了综述.这些方法各有特点,可根据研究工作的需要选择合适的研究方法.     

Differential gene expression profile in ischemic myocardium of Wistar rats with acute myocardial infarction

To determine the differential genes in ischemic myocardium of Wistar rats with acute myocardial infarction （AMI）, we constructed two differential gene expression profiles. AMI model was generated by Iigation of the left anterior descending coronary artery in Wistar rats. Total RNA was extracted from the normal and the ischemic heart tissues under the IigaUon point at the 8th day after the operation. Differential gene expression profiles of the two samples were constructed by using long serial analysis of gene expression （LongSAGE）. Real time fluorescence quantitative PCR （Q-PCR） was used to confirm the expression changes of partial target genes. The main results were as follows： a total of 15966 tags were screened from the normal and the ischemic LongSAGE maps, and 9646 tags in the normal tissue and 9563 tags in the ischemic tissue were obtained. Among them, 7665 novel tags were identified by NCBI BLAST search. In the ischemic tissue, 142 genes significantly changed compared to those in the normal tissue （P〈0.05）. These differentially expressed genes may play important roles in the pathways of oxidation and phosphorylation, ATP synthesis and glycolysis and so on. Partial genes identified by the LongSAGE were confirmed by Q-PCR. The results show that AMI causes a series of gene expression changes in the regulation of the pathways related to energy metabolism.     

Fluorescent detection of coenzyme A by analyte-induced aggregation of a cationic conjugated polymer

A new cationic conjugated polymer was designed and synthesized to optically discriminate coenzyme A(CoA) among structurally similar biomolecules, ATP, ADP and AMP. The analyte-induced aggregation of the conjugated polymer by π-stacking between their main chains leads to the fluorescence quenching. Except for the similar adenosine and phosphate moieties as those in ATP, ADP and AMP, the CoA molecule also includes a long side chain that is favorable for hydrophobic interactions. Thus, CoA can form a complex with oppositely charged conjugated polymer by cooperative electrostatic and hydrophobic interactions, whereas ATP, ADP and AMP form the complexes with oppositely charged conjugated polymer mainly by electrostatic interactions. The increase of the ion strength of the assay solution screens the electrostatic attractions, and the remaining hydrophobic interactions dominate the formation of PFP-PTF/CoA complex. At this case, the quenching efficiency of PFP-PTF by CoA is much higher than that by ATP, ADP and AMP, which impart the PFP-PTF to sense CoA from these interferencing species.     

掺杂Li对MnxCu1-xO稀磁半导体电学性质的影响

系统地研究了Li掺杂MnxCu1-xO稀磁半导体样品的制备。采用固相反应法,通过改变掺杂浓度、制备工艺等方法获取不同的样品,通过比较、拟合Nyquist图,找出最佳的掺杂方法,并利用交流阻抗谱法分析样品的结构及其电学性质。     

一种改进的多用户检测算法

针对串行干扰消除算法和并行干扰消除算法的不足,提出一种将串行干扰消除检测算法和部分并行干扰消除检测算法的基本思想结合起来的新的干扰消除多用户检测算法.该算法相对于串行干扰消除算法和并行干扰消除算法性能在某些方面有所改进:克服了串行干扰消除算法时延大、不能实时实现的缺点,并对功率分布均匀时系统的误码率性能有所改善;改善了并行干扰消除算法在系统中没有严格功率控制时的误码率特性;同时具有合理的计算复杂度和简单的实现结构等特点.理论分析和仿真结果都验证该算法具有较好的性能.     

筛选p53靶向药物的细胞模型的构建

为了筛选可以恢复肿瘤细胞中p53功能的小分子,作者用表达野生型p53的人类直肠癌细胞HCT116建立了一株能够应答激活p53信号通路的荧光素酶报告基因的稳定细胞系,同时用表达野生型p53的人类骨肉瘤细胞U2-OS建立了一株能够应答激活p53信号通路的mCherry红色荧光蛋白报告基因的稳定细胞系.为了检测筛选p53靶向药物的有效性,利用三种已知的以p53为靶点的小分子药物(cisplatin,doxorubicin以及Nutlin-3)处理这两种稳定细胞系,结果显示p53信号通路在这两个稳定细胞系中均能够被激活.为了探索小分子RNA作为恢复p53功能的靶标药物,并进一步验证这两种细胞模型用于药物筛选的可行性,分别检测了MDM2和MDMX的5个不同shRNA.通过比较HCT116稳定细胞的荧光素酶活性和U2-OS稳定细胞中荧光蛋白的荧光强度,我们筛选出了有效沉默MDM2或MDMX的shRNA.数据表明,这两种细胞模型不仅可用作筛选激活p53的小分子化合物的平台,而且可用于筛选激活p53信号通路的小分子RNA.     

用十六烷基三甲基溴化铵从发酵液中提取透明质酸

用十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）沉淀法从透明质酸（HA）发酵液中提取透明质酸。考察了该方法中稀释倍数、pH、盐浓度和CTAB的体积分数等因素对HA提取效率的影响。结果表明,在将发酵液稀释至4.5倍、调节pH=6.5和加入发酵液体积的12%的CTAB溶液的条件下, HA收率可高达97.0 %。与乙醇法所得透明质酸沉淀的纯度和收率相比,CTAB法得到的透明质酸的收率提高了2.1%,杂蛋白降低了2.4%。与氯代十六烷基三甲基吡啶法相比,CTAB法的成本比CPC法的少45.2%。     

蔗糖对悬浮培养肉苁蓉细胞的生长及苯乙醇苷合成的影响

通过研究悬浮培养肉苁蓉细胞生长、蔗糖消耗的关系,结果表明蔗糖是限制细胞生长的主要因素.在不同的蔗糖浓度下,比较肉苁蓉细胞干重和主要活性成分苯乙醇苷的合成情况,在30g/L的蔗糖浓度下最有利于肉苁蓉细胞的生长,最大生物量达10.84 g/L,苯乙醇苷最高含量可达干重的16.32%,产量为1296.04mg/L.     

粗毛栓菌atp9基因的克隆、表达及序列分析

ATP合酶是生物体内能量代谢的关键酶,参与多种氧化磷酸化和光合磷酸化反应.atp9基因是ATP合酶的重要组成部分,其编码了ATP合酶A亚基上第9亚单位,与呼吸作用和光合作用密切相关.本研究利用atp9基因在进化过程中高度保守的特点,据已知近缘真菌基因序列,设计并合成了一对引物,以粗毛栓菌mRNA反转录得到的cDNA第一链为模板,PCR扩增得到atp9基因完整序列,并连接于原核表达载体pET32a(+)上.测序与序列分析表明:该克隆片段全长222 bp,共编码73个氨基酸,翻译的蛋白质分子量是7.35 kDa.转化大肠杆菌后经IPTG诱导,可高效表达外源融合蛋白,分子量大小与预测结果一致.经过同源比对和进化树分析,该克隆基因编码的氨基酸序列与可可丛枝病菌(Crinipellis perniciosa)和瓣环栓菌(Trametes cingulata strain ATCC 26747)中相对应的氨基酸序列相似度最高.本实验为未来进一步研究粗毛栓菌atp9基因和其蛋白功能,阐明其调控和作用机制奠定了基础.