地黄不同种质资源产量和指标成分HPLC测定比较

采用HPLC法和SPSS差异分析法,测定比较了地黄9个品系（种）的产量和梓醇、毛蕊花糖苷含量并做出了评价.结果表明,不同种质地黄样品的产量及指标成分的含量差异明显,为繁育推广和新品种选育提供了技术支撑.     

拟南芥AtHHR2基因的功能初步研究

为了研究拟南芥Highly Homologous RING domain 2基因(At5g43200)在盐胁迫逆境的功能,通过DNA及RNA水平鉴定了该基因的T-DNA插入突变体athhr2,并通过根瘤农杆菌介导法进行遗传转化,筛选获得了athhr2/ATHHR2互补转基因株系.对突变体、互补转基因株系及野生型进行盐胁迫处理,对其萌发率、脯氨酸及叶绿素水平进行检测,发现盐处理后缺失突变体的萌发率降低,脯氨酸和叶绿素含量低于野生型,互补株系的萌发率、脯氨酸和叶绿素含量均高于野生型.以上结果证明AtHHR2基因在拟南芥的盐胁迫响应中起正调控作用.     

怀地黄不同品种根部特征和有效成分含量比较

以怀地黄6个栽培品种为材料,初步探讨了怀地黄不同品种的根部性状和品质性状.在相同的栽培条件下,测量了怀地黄6个主流栽培品种的块根外观性状,利用石蜡切片法观察并测量不同品种块根的解剖结构,微量元素和梓醇含量的测定分别用荧光光度计和高效液相色谱法.结果表明怀地黄不同品种梓醇含量、单株块根鲜重和块根中木质部的面积都有明显差异,梓醇含量和块根中木质部的比例呈显著正相关.     

大豆滞绿突变体的T-DNA插入位点分析

通过农杆菌介导的子叶节转化法获得的大豆T-DNA插入突变体ls-1是一个滞绿突变体,该突变体同时表现出花器官异常和种子败育的表型.通过染色体步移的方法分析发现T-DNA插到大豆基因组的7号染色体上,对测序获得的插入位点序列进行了PCR验证.进一步通过半定量RT-PCR和生物信息学分析,推测突变体表型的产生可能由于T-DNA插入编码S1型核酸内切酶的基因Glyma.07G191100和编码线粒体中交替型NAD(P)H脱氢酶的基因Glyma.07G191200之间,使二者表达受到影响造成的.该研究为后续的基因功能研究奠定了基础.     

怀地黄SRAP分子标记体系的建立与DNA指纹图谱的构建

以怀地黄DNA为模板,进行SRAP反应条件的优化及DNA指纹图谱构建,优化的反应体系为:25μL的体积中,模板DNA 20 ng,Mg2+浓度2.5 mmol.L-1,上下游引物各0.36μmol.L-1,dNTPs 0.30 mmol.L-1,Taq DNA酶2.0 U.构建了怀地黄23个品种的DNA指纹图谱,为怀地黄品种鉴定、遗传多样性分析、分子标记辅助育种和质量综合评价等研究奠定了基础.     

地黄毛状根的培养研究

发根农杆菌是一种革兰氏阴性菌,能侵染大多数的双子叶植物,诱发被感染植物的受伤部位长出毛状根.本实验用发根农杆菌感染地黄外植体诱导其产生毛状根,并加以培养,为今后选择合适的培养方式,大规模培养毛状根来生产地黄的次生物质奠定基础.     

怀地黄不同品种块根显微结构与糖分含量的比较研究

采用石蜡切片和分光光度计对不同品种怀地黄块根的显微结构和糖分含量进行了研究,并用SPSS 10.0软件分析了两者之间的相关性.结果表明,怀地黄不同品种块根的显微结构差异明显,且还原糖含量的差异达到了显著水平.块根中还原糖含量、总糖含量均与块根各解剖结构特征呈正相关关系.     

古法炮制地黄与市售地黄成分的比较

通过高效液相色谱(HPLC)指纹图谱技术来研究古法炮制生、熟地黄药材与当前市售生、熟地黄的品质差异,为地黄药材质量标准的完善以及炮制方法的研究提供参考.样品采用甲醇提取,使用Welchrom C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),乙腈-0.1%(体积分数)磷酸水溶液梯度洗脱,多波长紫外检测器检测,流速1.0mL/min,进样量20μL,柱温35℃.分别对生、熟地黄的HPLC指纹图谱的共有峰面积进行比对.古法炮制地黄与市售地黄所含成分有显著差异,古法竹刀切片制生地黄与古法酒蒸炮制熟地黄,其主要成分梓醇、毛蕊花糖苷含量普遍高于市售生、熟地黄;而5-羟甲基糠醛的含量远低于市售品.     

绿色木霉LTR-2的ATMT插入突变及5,6-二氢-6-戊基-2H-吡喃-2-酮高产菌株的筛选

通过土壤杆菌介导的T-DNA转化方法,利用土壤杆菌菌株携带的Ti质粒,对绿色木霉LTR-2进行插入突变,获得木霉LTR-2突变体共400株。以串珠镰孢菌为指示菌,采用抑菌圈方法,从中筛选吡喃酮高产突变体6株,PCR和探针杂交证实,T-DNA序列已经插入到木霉LTR-2基因组。经GC-MS分析发现,其中一株突变体T-54在PDA培养基上产生的吡喃酮含量较高,在分生孢子中的含量达到了2.62 mg/g,比出发菌株提高9倍。     

油菜突变体库构建与激素反应基因克隆分析

以优质高产的油菜品种1244W6为材料,采用浸花蕾方法,将含有激活标记和Basta筛选标记质粒pSKI015的农杆菌进行转化,成功构建了油菜激活标记突变体库.通过Basta筛选,结果共获得约30 000个转基因株系(T1代).将部分转基因株系种子(T2代)培养在不含任何激素、或含有不同浓度植物激素的营养液中,结果筛选出激素反应突变体63个,长下胚轴和短下胚轴突变体分别为15和13个.采用TAIL-PCR技术,克隆了W1016激素反应突变体T-DNA插入位点基因组旁邻序列.     

怀地黄不同品种花粉形态的扫描电镜观察

利用扫描电镜观察了14个品种怀地黄[Rehmannia glutinosa f.hueichingens-is(Chan et Sehih)Hsiao]的花粉形态.结果表明:花粉均为单粒花粉,呈长圆形至长矩圆形,大小为40.2~46.9μm,具3个萌发孔,网状纹饰,网眼明显;根据花粉形状可将其分为3类:(1)长方形或近长方形(2)椭圆形或近椭圆形(3)梭形.研究表明,花粉特征,特别是花粉的形态特征,在怀地黄不同品种间具有的可见变异,它们在分类学上的价值应予以关注.     

怀地黄试管苗脱毒技术研究

对怀地黄试管苗的脱毒技术进行了研究.结果发现:以MS为基本培养基并附加适宜浓度细胞分裂素(6-BA0.5 mg.L-1或KT0.5 mg.L-1)时,茎尖成苗率最高(75%),出愈率较低(20%);切离的茎尖大小为0.2~0.5 mm时,既能保证较高的脱毒率又可保证较高的成苗率;两次切离茎尖并与热处理相结合,试管苗的脱毒率最高(96%~100%),建立了一种有效的怀地黄脱毒方法和技术.     

PP333对怀地黄种质离体保存的影响

研究了PP333对怀地黄"85-5"脱毒苗离体保存的影响.结果表明:适宜浓度PP333(1~2 mg.L-1,单位下同)可以延缓脱毒苗的生长速度,延长其保存时间,减少其继代次数;高浓度PP333(4~8)对其生长产生毒害作用,不利于种质保存.适宜怀地黄脱毒苗离体保存的培养基为MS+NAA0.02+6-BA0.2+PP3331,在该培养基上保存180 d后,存活率达68%,恢复培养时生长正常,成活率达100%.     

地黄属资源植物中梓醇的分布及积累动态

采用液质联用（HPLC-UV-MS）法对同地栽培的地黄属各物种中梓醇的分布及积累规律进行了检测.研究发现地黄属6种植物都含有丰富的梓醇成分，茄叶地黄、高地黄和裂叶地黄梓醇含量较高，接近于地黄中梓醇的含量.并发现地黄属植物块根中梓醇含量高峰在入冬前的成年期，而地上部分梓醇含量高峰在越冬后的开花结实期.在各物种内，地上部分梓醇含量通常高于地下部分，粗壮和木质化程度低的块根中高于纤细和木质化程度高的块根中.探讨了地黄属资源植物的应用前景和梓醇分布和积累规律的形成原因.     

高效热不对称交互式PCR技术克隆地黄基因

利用高效热不对称交互式PCR(hiTAIL-PCR)技术从地黄基因组中扩增出3个DNA片段,经过电泳检测、回收、纯化和测序获得2个片段的碱基序列.其中一个由578个bp组成,包含一个453bp的开放阅读框(ORF),编码151个氨基酸,与一些已知纤维素合酶基因在DNA水平和氨基酸水平的同源性分别高达81%~91%和83%~99%,而且推测蛋白质具有纤维素合酶的结构域;另一个由385个bp组成,没有ORF,不编码蛋白质,但是,预测其包含启动子元件.这些结果表明使用hiTAIL-PCR技术可以克隆地黄基因,克隆的基因将为地黄基因分子作用机制和分子育种研究奠定基础.     

怀地黄85-5品种内遗传多样性的RAPD和ISSR分析

采用CTAB法提取了怀地黄85-5品种16个单株的基因组DNA,使用紫外分析和琼脂糖凝胶电泳检测其纯度和大小,利用RAPD及ISSR分析其品种内遗传多样性.从24个RAPD引物和43个ISSR引物中分别筛选出具有稳定多态性条带的RAPD引物3个和ISSR引物2个,分别对16个单株基因组DNA进行PCR扩增.3个RAPD引物共扩增出7条带,其中多态性条带为4个,多态性比率为57.14%.2个ISSR引物共扩增出17条带,其中多态性条带为11个,多态性比率为64.7%.结果表明,怀地黄85-5品种内存在遗传差异,但遗传多样性比地黄品种间的低.     

地黄块根水提液对地黄种子萌发及幼苗生长的影响

目的:了解地黄块根浸提液(Rehmannia glutinosa root extracts,RRE)对地黄种子萌发及幼苗生长的化感效应,寻找地黄连作障碍原因及减轻连作障碍的途径.方法:采用培养试验法,用不同浓度的RRE处理地黄种子,观察种子萌发和幼苗生长并测定相关生理指标,结果:当RRE质量浓度为0.006 5g·mL-1时,种子的发芽率、发芽势、发芽指数、活力指数与对照差异极显著,根长、苗高和根长/苗高与对照差异显著,具有量效关系,浓度越高抑制效应越强;当质量浓度0.052 0g·mL-1时,则抑制种子的萌发.结论:地黄块根汁液存在化感物质,土壤中的地黄块根分泌物及根系溃烂腐解所释放的化感物质是抑制地黄种子萌发和幼苗生长的主要原因,也是导致地黄连年种植减产绝收的原因.