一株茶树内生放线菌的分离鉴定及抗菌活性测定

从茶树内生真菌芒果球座菌(Guignardia mangiferae)的菌落表面分离获得1株放线菌菌株BF-01,通过形态学观察和16S rDNA序列分析及抗菌活性测定,初步鉴定该菌株为卡伍尔链霉菌(Streptomycescavourensis).对其代谢产物进行了抑菌活性的初步研究,发现该菌发酵产物对除1株木霉外的7株茶树内生真菌及6株植物病原真菌均表现出不同程度的抑制作用.其发酵液氯仿萃取物对供试的5种病原细菌、1种白假丝酵母菌有较明显的抑制作用,对2种植物病原真菌的孢子萌发也有较强的抑制作用,表明菌株BF-01及其代谢产物具有广谱的抑菌活性.     

胜红蓟内生真菌转化柠檬烯产物的抑菌活性

为考察入侵植物胜红蓟内生真菌转化柠檬烯产物的抑菌活性,以柠檬烯二醇作为标品对照,采用薄层色谱法筛选具有转化柠檬烯能力的胜红蓟内生真菌.通过气相色谱-质谱法对菌株的转化产物进行分析,并对其生物转化柠檬烯发酵液乙酸乙酯粗提物的抑菌活性进行研究.从22株胜红蓟内生真菌中共筛选得到14株具有转化柠檬烯能力的菌株,其中,有6个菌株的柠檬烯转化乙酸乙酯粗提物中含有柠檬烯-1,2-二醇;菌株Diaporthe phaseolorum(wl01)的柠檬烯转化产物中,柠檬烯-1,2-二醇的质量浓度最高(3.43 mg·mL^-1);菌株Alternaria alternata(wp06)生物转化柠檬烯发酵液的乙酸乙酯提取物对柑橘意大利青霉类致病菌有一定的抑制效果,对意大利青霉的抑菌效果为(40.03±3.58)%.     

乌头内生真菌YLAC-3抗菌活性及其鉴定

为了筛选产乌头碱的内生真菌,采用组织分离法从白喉乌头根中分离内生真菌,用纸片扩散法检测内生真菌对4种指示菌的抑菌作用,通过薄层层析法（TLC）和高效液相色谱法（HPLC）检测真菌次生代谢产物中乌头碱,最后基于真菌形态特征和rRNA基因内转录间隔区（ITS）序列分析对菌株进行鉴定.结果显示：从白喉乌头根部共分离得到20株具有抑菌活性的内生真菌,其中菌株YLAC-3发酵液对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念球菌均有较强的抑菌活性,且其发酵液中发现类似于乌头碱的化合物.说明菌株YLAC-3发酵液有较为广泛的抑菌活性,它可能产生乌头碱.菌株YLAC-3菌落、菌丝体和分生孢子的形态特征类似于曲霉菌属,与已报道的塔宾曲霉菌ITS序列（KP196359）的相似度为99%.初步鉴定该菌株为曲霉菌属有效发表种Aspergillus tubingensis的一个菌株.     

七叶树内生真菌的分离及活性研究

利用组织培养法,从秦岭紫柏山七叶树茎段中分离得到45株内生真菌,通过真菌形态特征和ITS序列分析,将其鉴定到7个属如链格孢属(Alternaria)、鬼伞属(Coprinellus)、枝孢属(Cladosporium)及颈点霉属(Phoma)等。采用紫外-可见分光光度法、高效液相(HPLC)及质谱(MS)方法检测表明,菌株SL-6的代谢产物中存在七叶皂苷类化合物。抑菌活性试验显示,菌株SL-6的发酵液对胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)、油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)及棉花黄萎病菌(Verticillium dahliae)植物病原菌表现出较强的抑制活性。     

茶树油脂内生真菌检测及产油脂性状研究

通过培养、染色、显微观察及生化提取与分析,对茶树产油脂内生真菌种类及产油脂性状进行了研究.结果表明:茶树内生真菌中大多数菌株能产生油脂类代谢产物,其产油脂真菌资源较丰富;产油真菌菌株所占比例与真菌种类相关,高产油真菌集中存在于拟茎点霉属(Phomopsis)及镰刀菌属(Fusarium)菌株中,供试的青霉菌各菌株均不产生油脂.茶树内生真菌油脂为棕黄色黏稠液体,具芳香气味,茶叶提取液可促进内生真菌油脂的合成.     

产黄酮马齿苋内生真菌的筛选及代谢产物抑菌效果初步研究

从马齿苋植株中分离内生真菌,提取其代谢产物,以黄酮类化合物显色反应和紫外光谱特征对内生真菌代谢产物进行初步鉴定,筛选得到产黄酮内生真菌AG-10,使用ITS1、ITS4通用引物,扩增菌株AG-10的18S rDNA序列,结合菌落和分生孢子形态特征,对菌株AG-10进行分类鉴定,并采用滤纸片法研究AG-10的代谢产物抑菌效果;菌株AG-10鉴定结果为镰刀菌(Fusarium sp.),其代谢产物可抑制金黄色葡萄球菌和大肠杆菌,最小抑菌质量浓度分别为1.0 mg/mL和2.0 mg/mL。研究结果证实了马齿苋中存在有可能产黄酮类化合物的内生真菌,为利用微生物产黄酮类化合物提供参考。     

红树林内生真菌的分离及代谢产物生物活性的初步研究

从8种红树林植物中共分离出85株内生真菌,经鉴定发现其主要类群为无孢类群(Mycelia sterilia),短梗霉属Aureobasidium spp.和盘长孢属Gloeosporium spp.,分别占菌株总数的50.6%、18.0%、14.6%。对这85株内生真菌的代谢产物生物活性研究发现:其菌丝和发酵液提取物对试验细菌表现出较好的抗性:对大肠杆菌有抗性的菌株比例分别为22.4%、21.2%、金黄色葡萄球菌为12.9%、14.1%,枯草芽胞杆菌为20.0%、36.5%;其发酵液提取物对酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae、白色念珠菌Candida albicans、新月弯孢霉Curvular-ia lunata等试验真菌均有较好的抗性,抗性菌株占菌株总数的比例分别为25.9%,23.5%,28.2%,而菌丝提取物均未表现出抗性;有8株(占菌株总数的9.0%)可产生抑制小麦发芽和芽生长的代谢物,具有除草剂活性;通过本实验建立的全细胞定向筛选模型发现:有14个菌株的代谢产物对耐药性大肠杆菌具有拮抗活性,占菌株总数的16.5%。以上结果表明:红树林内生真菌蕴含丰富的生物活性物质,在新型药物先导物和除草剂的开发方面都表现出潜在的应用前景。     

濒危肉叶金腰内生真菌Cladosporiumsp.J6次级代谢产物研究

研究濒危藏药肉叶金腰内生真菌Cladosporium sp.J6次级代谢产物。采用硅胶、LH-20凝胶、C-18反相硅胶及HPLC等柱色谱技术对Cladosporium sp.J6的次级代谢产物进行研究;采用波谱分析及与文献比对等方法进行化合物结构鉴定;结果从肉叶金腰内生真菌Cladosporium sp.J6的发酵提取物中分离得到5个化合物,分别鉴定为alternariol(1)、alternariol 5-O-methyl ether(2)、β-咔啉(3)、尿嘧啶(4)和尿嘧啶核苷(5)。关于金腰属植物内生真菌次级代谢产物研究是首次报道。     

女贞（Ligustrun lucidum Ait）内生真菌抑菌活性及发酵条件初探

从女贞茎、叶中分离到21株内生真菌,分别用PDA,YPD和NHK培养基摇瓶发酵培养后获得各菌株发酵液,以E.Coli,B.Subtilis作为测试菌株,寻找最优化产次生代谢产物的发酵条件,综合抑菌活性分析后得出,女贞内生真菌液体培养的最适碳源是蔗糖和淀粉,最适氮源是胰蛋白胨,摇瓶速度为120r/min,瓶装量为70ml/250ml,最适pH7.0,培养时间12天.     

添加前体对2株真菌次级代谢产物及其生物活性的影响

为探究添加前体物质对红树植物杨叶肖槿(Thespesia populnea)来源内生真菌Talaromyces sp.YX-001和Penicillium sp.YX-002次级代谢产物及其生物活性的影响,选取马铃薯葡萄糖液体(Potato Dextrose Broth,PDB)培养基和察氏(Czapek''s)培养基,分别在其中添加2种前体物质(甲戊二羟酸和酪氨酸),采用12孔板对菌株进行微量发酵培养。通过分析菌株次级代谢产物的产量、HPLC指纹图谱、乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制活性、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除活性和卤虫致死活性,探究添加前体物质前后菌株次级代谢产物的化学多样性和生物活性的变化情况。结果表明：添加2种前体物质均可使菌株次级代谢产物的产量和化学多样性增加,但生物活性的变化有所不同。酸性环境可能会促进菌株中具有较好DPPH自由基清除活性的次级代谢产物的合成,但其具体机制还有待进一步研究。本研究为深入研究杨叶肖槿内生真菌Talaromyces sp.YX-001和Penicillium sp.YX-002的次级代谢产物奠定了基础。     

Biological and chemical diversity of cytotoxin-producing symbiotic marine fungi in intertidal zone of Dalian

In this study, the biological and chemical diversity of 8 symbiotic marine fungal strains, with strong cytotoxicity against brine shrimp larvae, were investigated by nucleotide sequencing, morphology and cluster analysis of HPTLC fingerprint. These strains were identified by ITS rDNA sequencing, phylogenic analysis, and morphology to be Hypocrea lixii, Chaetomium globosum, Aspergillus fumigatus, Asp. clavatus and Alternaria sp. Their differences in secondary metabolites were shown by cluster analysis of digitalized colors of HPTLC spots, a newly developed method, which produced a similar dendrogram with that of ITS cluster analysis. Furthermore, this method can fully display intraspecific differences and even the remarkable difference in Aspergillus strains which goes beyond the boundary between genera. Their biological-chemical diversity may be the basis of their potent cytotoxicity and implies their potential in producing diversified antitumor or pesticidal constituents.     

硒矿区土壤中真菌的分离培养及抗肿瘤活性筛选

利用单菌落挑选与划线培养技术,从硒矿区土壤样品中分离纯化真菌。通过摇床发酵培养,提取制备发酵样品。采用MTT法,用MDA-MB-231细胞、Hela细胞、SMMC-7721细胞测试发酵样品的抗肿瘤活性。从采自湖北恩施全球唯一独立硒矿床区的6个不同土样中分离真菌73株。其中,对人宫颈癌Hela细胞的IC_(50)小于90μg/m L的菌株32株,对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的IC_(50)小于90μg/m L的菌株13株,对人肝癌SMMC-7721细胞的IC_(50)小于90μg/m L的菌株9株。这些活性菌株为筛选抗肿瘤天然产物提供了良好的药源菌株。     

A saponin-detoxifying enzyme mediates suppression of plant defences

Plant disease resistance can be conferred by constitutive features such as structural barriers or preformed antimicrobial secondary metabolites. Additional defence mechanisms are activated in response to pathogen attack and include localized cell death (the hypersensitive response). Pathogens use different strategies to counter constitutive and induced plant defences, including degradation of preformed antimicrobial compounds and the production of molecules that suppress induced plant defences. Here we present evidence for a two-component process in which a fungal pathogen subverts the preformed antimicrobial compounds of its host and uses them to interfere with induced defence responses. Antimicrobial saponins are first hydrolysed by a fungal saponin-detoxifying enzyme. The degradation product of this hydrolysis then suppresses induced defence responses by interfering with fundamental signal transduction processes leading to disease resistance.     

四种华重楼内生细菌的初步研究

从华重楼（Paris polyphylla var Chinensis）的新鲜块茎中分离得到107株内生菌．对这107株菌进行了液体培养,经初步检测鉴定,有6株菌产生薯蓣皂甙或其类似物等甾体皂甙,对其中4株菌的形态学和理化特征进行了研究,确定这4株菌分别属于德克斯氏菌属（Derxia sp）、芽孢杆菌属（Bacillus sp）、动性球菌属（Planococcus sp）、肠杆菌属（Enterobacter sp）.     

离体大鼠肠内菌群对知母甾体皂苷代谢研究

目的：观察大鼠肠内菌对知母主要活性成分甾体皂苷的代谢及对相应代谢产物进行鉴定。方法：离体培养大鼠肠道菌群,用LC/MS/MS法检测离体肠内菌对甾体皂苷样品的代谢产物。灌胃给予大鼠甾体皂苷样品15 mg.kg-1,于给药后不同时间采集尿样及粪样,用LC/MS/MS法检测甾体皂苷样品的代谢产物。对主要代谢物M1进行结构鉴定。用合成的方法制备代谢物M1标准品进行LC/MS/MS法分析并与大鼠离体和在体样品对比。结果：甾体皂苷样品容易被大鼠消化道菌群代谢,代谢速率很快,其主要代谢产物为代谢物M1,随着代谢时间的延长,代谢物M1的量逐渐增多,而甾体皂苷样品的量则下降迅速。结论：甾体皂苷可被大鼠肠内菌迅速代谢。     

两株丝状真菌N3、N9的分类鉴定

从一酸奶样品中分离到两株丝状真菌N3、N9,通过形态学观察、ITS序列测定及其系统发育分析,初步确定了N3、N9菌株的分类地位以及与其近缘种之间的生物系统学关系.实验结果表明N3、N9菌株在PDA培养基上形成典型绒状茵落,菌丝体上具有担子茵所特有的锁状联合结构.ITS序列测定及系统发育分析表明N3菌株与灰白侧耳(Pleurotus spodoleucus)同源性最高,N9菌株与佛罗里达侧耳(Pleurotus floridanus)同源性最高.     

涠洲岛珊瑚礁海洋真菌的分离鉴定及其抗MRSA活性筛选

本研究从广西涠洲岛礁栖珊瑚、海绵和海藻等样品中挖掘海洋真菌资源,旨在筛选发现潜在的具有抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）活性的菌株。研究首先采用稀释分离法从采集的珊瑚、海绵和海藻等样品中分离纯化出真菌,基于内转录间隔区（ITS）序列和系统发育树分析对菌种进行鉴定;然后采用大米培养基对分离得到的单一菌株进行小量发酵,利用乙酸乙酯提取浓缩获得提取物;最后采用薄层色谱（TLC）、高效液相色谱（HPLC-DAD）等方法分析菌株提取物中代谢产物的丰富度,并采用滤纸片琼脂扩散法对菌株粗提物进行抗MRSA活性初步筛选。结果从样品中分离获得40株海洋真菌,以曲霉属（Aspergillus）和木霉属（Trichoderma）为主,其中A.terreus MF01、A.flavus MF07、T.asperellum HP01、Fusarium equiseti HP08和A.unguis HP17等菌株具有丰富的代谢产物及抗MRSA活性。本研究发现的菌株MF01、MF07、HP01、HP08和HP17具有潜在的抗MRSA活性,为后续开展活性代谢产物研究提供基础资料。     

植物生长调节剂对黄芪愈伤组织中次生代谢物质含量的影响

以膜荚黄芪幼叶为外植体,运用正交设计研究2,4-D、6-BA和NAA等3种植物生长调节剂组合对愈伤组织生产黄芪黄酮和黄芪皂苷的影响．结果表明对黄芪黄酮合成的影响顺序是：NAA〉6-BA〉2,4-D;对黄芪皂苷合成的影响顺序是：2,4-D〉6-BA〉NAA．生产黄芪黄酮和黄芪皂苷的最佳培养基分别为;MS＋2,4-D（0．5mg·L^-1）＋6-BA（1．0mg·L^-1）＋NAA（2．0mg·L^-1和MS＋2,4-D（2．0mg·L^-1）＋6-BA（2．0mg·L^-1）＋NAA（1．0mg·L^-1）．细胞伸长有利于愈伤组织中次生代谢物质的合成．     

一株南海珊瑚细菌L-4抗肿瘤活性次生

 在研究珊瑚微生物混合共培养时发现：在混合培养中南海珊瑚内生细菌L-4对真菌的次生代谢产物明显产生影响,甚至产生此二微生物单独培养时所不产生的物质。对L-4发酵液进行次生代谢产物研究,从中分离纯化得到8个单体化合物,通过现代波谱分析（MS、NMR等）和物理常数对照等手段确定其结构依次为：环（色-丙）二肽（1）、环（甘-酪）二肽（2）、环（丙-酪）二肽（3）、环（缬-酪）二肽（4）、环（甘-苯丙）二肽（5）、环（甘-脯）二肽（6）、环（丙-缬）二肽（7）、环（甘-丙）二肽（8）均为环二肽类物质,且均首次从南海珊瑚内生细菌中分离得到,对进一步研究其可能的代谢机制具有重要意义。     

粘细菌代谢产物对乳腺癌细胞抗性的作用

粘细菌是一类具有丰富代谢产物的药源微生物,有潜在的新药开发价值。乳腺癌是多发于女性的一种恶性肿瘤,目前尚不能较好的控制,使用具有新作用机理的新型药物治疗可能提供其良好的解决方案。本研究对内蒙古鄂尔多斯地区土壤样品中分离到的七株粘细菌进行鉴定并对其代谢产物进行抗人乳腺癌MCF-7细胞检测,为研发高效安全的新型抗肿瘤活性物质奠定基础。采用兔粪诱导法、大肠杆菌划线法、大肠杆菌点种法、纤维素诱导法对采集的土样进行粘细菌的分离,通过形态学结合分子生物学手段鉴定纯化的粘细菌菌株。采用CCK-8法对粘细菌产生的代谢产物进行MCF-7细胞毒性检测,并对其抗肿瘤活性进行评价。经鉴定,E44属珊瑚球菌属珊瑚状珊瑚球菌（Corallococcus coralloides）,E603、E1201、E1202为粘球菌属变绿粘球菌（Myxococcus virescens）,E701、E703、E705为粘球菌属橙色粘球菌（Myxococcus fulvus）,其代谢产物均对人乳腺癌MCF-7细胞株具有抑制作用,最高肿瘤细胞抑制率在70.45%-106.29%之间,其中Myxococcus fulvus E701代谢产物对肿瘤细胞的抑制效果最强。本次实验分离的七株粘细菌菌株对人乳腺癌MCF-7细胞株均有明显的抑制效果,该研究为今后菌株活性物质的分离鉴定及作用机理研究奠定了基础。