稀土诱导子对红豆杉细胞生长及产生10-去乙酰巴卡亭Ⅲ的影响

目的:研究稀土诱导子对云南红豆杉细胞生长及产生10-去乙酰巴卡亭Ⅲ的影响.方法:在培养12d后分别向培养基中添加不同浓度的硝酸铈、硝酸铈铵和硝酸镧诱导子,经过培养对云南红豆杉细胞生长量进行统计,用HPLC法测定细胞中10-去乙酰巴卡亭Ⅲ的含量.结果:培养基中添加0.1mmol/L硝酸铈、0.01mmol/L硝酸铈铵和0.01mmol/L的硝酸镧时,10-去乙酰巴卡亭Ⅲ含量是不添加时的2.3倍、4.1倍和2.6倍,含量分别为0.05446%、0.09767%和0.061 87%.结论:该研究为云南红豆杉细胞培养生产10-去乙酰巴卡亭Ⅲ提供理论依据.     

高效液相色谱法测定云南红豆杉细胞培养物中10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ的含量

目的：建立云南红豆杉细胞培养物中10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ含量的测定方法。方法：样品经干燥研细后采用甲醇浸提、乙酸乙酯萃取,测定同一批细胞培养物中10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ含量,采用Spherisorb C185μm柱,流动相甲醇-乙腈-水（42∶13∶45）,流速1.0ml/min,检测波长为234nm。结果：云南红豆杉细胞培养物中10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ含量10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ含量为0.023 47%,平均回收率为100.6%,变异系数（RSD）为2.2%。结论：该方法能准确、快速测定云南红豆杉细胞培养物中10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ含量,为探讨10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ在细胞培养物中的代谢研究提供测定方法。     

红豆杉细胞聚集体悬浮培养生产紫杉醇

建立了中国红豆杉(Taxuschinensis)细胞聚集体两步法悬浮培养生产紫杉醇的培养体系.红豆杉细胞于含LH1g/L,NAA0.1mg/L,2,4-D0.5mg/L及6-BA0.8mg/L的细胞聚集体形成的培养基中生长并形成聚集体,10d后转入生产培养,较大细胞聚集体的生物量比和紫杉醇产量分别较对照组提高了53.7%和82.1%;提高细胞聚集体的生物量比能显著增加紫杉醇产量.四种基本培养基中B5最适合诱导细胞聚集体的形成.生长培养12d后细胞悬浮培养物按1∶1(体积比)直接转入生产培养对细胞生长、细胞聚集体和紫杉醇形成最有利.在100μmol/L茉莉酸甲酯作为诱导子下本体系紫杉醇产量较对照组提高了一倍.     

从云南红豆杉细胞培养物中分离鉴定10-去乙酰巴卡亭Ⅲ

目的：从云南红豆杉（Taxus yunnanensis）细胞培养物中提取、分离和纯化10-去乙酰巴卡亭Ⅲ（10-deacetylbaccatinm,10-DABⅢ）。方法：采用固液分离、有机溶剂萃取、硅胶柱层析、重结晶等方法从细胞培养物中提取分离得到10-DABⅢ,并用波谱解析（1HNMR,13CNMR）对其结构进行了鉴定。结果：建立了从红豆杉细胞培养物中提取、分离和纯化10-DABⅢ的方法,证明与从天然红豆杉植物中得到的10—DABⅢ为同一化合物。结论：本方法简便、成本低,可用于红豆杉细胞培养物中10-DABⅢ的提取、分离。     

Chitosan对红豆杉PAL及Taxol合成的影响

研究了Ｃｈｉｔｏｓａｎ（聚氨基葡糖）对红豆杉悬浮培养细胞ＰＡＬ（苯丙氨酸解氨酶）活性及Ｔａｘｏｌ（紫杉醇）生物合成的影响．种胚来源的红豆杉细胞培养在改良ＭＳ液体培养基中,于培养的第１８ｄ添加不同浓度的Ｃｈｉｔｏｓａｎ．Ｃｈｉｔｏｓａｎ浓度为１００～１０００ｍｇ·Ｌ－１时对红豆杉细胞ＰＡＬ活性有明显的诱导作用,且诱导作用随浓度的增加而增强,在诱导作用下ＰＡＬ活性在１６ｈ达到峰值;Ｃｈｉｔｏｓａｎ浓度在１００ｍｇ·Ｌ－１时对红豆杉细胞的生长基本无抑制作用,增产效果最显著（约为对照组的１０倍）,Ｃｈｉｔｏｓａｎ可作为Ｔａｘｏｌ合成的诱导子．     

不同诱导子对曼地亚红豆杉内生真菌产紫杉醇的影响

从曼地亚红豆杉树皮中分离得到1株链格孢属(Alternaria sp.)内生真菌MF5。初期马铃薯葡萄糖(PD)培养基液体培养结果显示,MF5的发酵产物中检测到的紫杉醇质量浓度约为0.58 mg/L。为了提高MF5发酵产物中紫杉醇含量,考察添加CuSO_4、茉莉酸甲酯(MeJA)、赤霉素(GA_3)和红豆杉浸出液对MF5产紫杉醇的影响。结果表明:添加4%红豆杉浸出液,对MF5进行发酵培养,发酵产物中紫杉醇质量浓度为(2.47±0.07) mg/L;在此基础上,添加CuSO_4、MeJA、GA_3 3种诱导子也能够提高MF5产紫杉醇的能力,且同时添加3种诱导子时,MF5发酵物中紫杉醇含量最高,达到(12.58±0.80) mg/L。本研究证实了3种诱导子和红豆杉浸出液均可促进内生真菌代谢产生紫杉醇,为后续真菌发酵法生产紫杉醇打下基础。     

云南红豆杉细胞培养和紫杉醇生产

研究了在固体和液体培养条件下云南红豆杉 (Taxusyunnanensis)细胞系TY6生长和紫杉醇积累的动态及培养基中无机氮源形式对其生长的紫杉醇形成的影响 .结果表明 ,在固体和液体培养条件下 ,云南红豆杉细胞的生长和紫杉醇积累动态相似 ,但液体培养时细胞生长周期缩短了 7d,紫杉醇含量降低了 1倍 ;新形成的细胞需要经过一段时间生长后才有较高的紫杉醇合成能力 ;培养基中硝态氮浓度高有利于细胞生长 ,铵态氮浓度高有利于紫杉醇形成 ;在培养第 1 2d时用铵态氮培养基更换硝态氮培养基可使悬浮细胞的紫杉醇产量达到 8.5mg·L- 1 ,比对照高 1 .6倍     

曼地亚红豆杉愈伤组织诱导和继代培养研究

以曼地亚红豆杉(Taxusmedia var.hickss)嫩茎和嫩叶为外植体,进行愈伤组织诱导和继代培养研究。愈伤组织诱导以MS为基本培养基,继代培养以MS和B5为基本培养基,分别添加不同浓度和组合的细胞分裂素(6-BA、TDZ、KT、2-ip)、生长素类激素(NAA、2,4-D),和水解乳蛋白、活性碳等抗褐化试剂,考察其对愈伤组织诱导和继代培养的影响。结果表明,曼地亚红豆杉嫩茎有很强的分生能力,比嫩叶更易于诱导愈伤;在培养基MS TDZ0.002mg/L NAA1.0mg/L、MS TDZ0.002mg/L 2,4-D1.0mg/L、MS TDZ0.002mg/L NAA1.0mg/L 2,4-D1.0mg/L和MS KT1.0mg/L 2,4-D1.0mg/L NAA1.0mg/L上,嫩茎愈伤的诱导率达100%,生长迅速,品质良好,利于继代培养;培养基B5 KT1.0mg/L 2,4-D2.0mg/L NAA1.0mg/L适用于愈伤继代,每30d增殖倍数5.2倍;培养基中添加活性碳500mg/L、维生素C 1000mg/L或水解乳蛋白1000mg/L对抑制材料褐化有一定的效果。     

中国红豆杉悬浮细胞固定化培养生产紫杉醇

对海藻酸钠包埋法固定中国红豆杉悬浮细胞的条件进行研究,建立了一套合适的固定化操作条件,即海藻酸钠浓度为３０ｇ／Ｌ,聚乙烯醇（ＰＶＡ）浓度为８０ｇ／Ｌ,ＣａＣｌ２浓度为２０ｇ／Ｌ,包埋密度为０．２ｋｇ／Ｌ,接种密度为０．１ｋｇ／Ｌ．在此基础上,对中国红豆杉细胞固定化培养的培养基进行了优化,结果表明,从红豆杉树皮中分离出的真菌培养物作为诱导物能限制细胞生长,且明显促进紫杉醇合成,并诱导紫杉醇分泌到培养液中．在培养基中适量地添加前体亦能提高紫杉醇的产量．对红豆杉细胞固定化培养中紫杉醇合成与分泌进行了动力学研究．     

两种红豆杉植物的愈伤组织培养及褐化抑制

在DPS系统均匀设计的基础上,对曼地亚红豆杉(Taxus m edia)和南方红豆杉(Taxus chinensisvar.mairei)的茎和叶进行愈伤组织培养,并探讨愈伤组织褐化的抑制.结果表明:两种植物茎形成愈伤组织能力均强于叶;同一种红豆杉植物愈伤组织诱导率与其直径存在一元线性回归关系;B5培养基添加0.3 mg/L 6-BA和2.9mg/L NAA(曼地亚红豆杉)、0.1 mg/L 6-BA和1.7 mg/L NAA(南方红豆杉)为最适合愈伤组织诱导和生长的培养基;南方红豆杉茎和叶产生愈伤组织平均时间分别少于曼地亚红豆杉茎和叶,其茎和叶愈伤组织平均直径显著大于曼地亚红豆杉;培养基添加0.01~0.2 mg/L抗坏血酸(Vc)能较为有效抑制愈伤组织褐化.     

前体和诱导子对紫杉醇合成影响的优化研究

用响应面方法对红豆杉细胞培养生产紫杉醇的几种前体及诱导子进行了优化，首先，用部分因素实验对苯丙氨酸，脱落酸，硝酸银，苯甲酸钠，醋酸钠，壳聚糖，甘氨酸对紫杉醇含量的影响进行评价，并找出其中主要影响因子壳聚糖，硝酸银和脱落酸；其次，用最速上升法逼近最大响应区，最后用中心组合设计和响应面分析确定主要影响因子的最适浓度，经优化后的紫杉醇体积质量达到60．5mg/L，较优化前提高1倍，利用以上结果进行5L反应器放大培养，紫杉醇体积质量达54．6mg/L。     

番茄花药培养愈伤组织诱导及不定芽形成的研究

为了建立番茄花药愈伤组织诱导及分化的实验体系,通过花药离体培养并设计不同的试验处理,以6个番茄品种的花药为试材,研究了植物生长调节剂、蔗糖浓度、硝酸银浓度、基因型和培养基对番茄花药培养愈伤组织诱导率及不定芽形成的影响.结果表明:培养基中添加1.0mg/L的2,4-D和0.5mg/L的KT,里格尔87-5和石番9号愈伤组织诱导率都达最高;培养基中加入30g/L的蔗糖,里格尔87-5的愈伤组织诱导率达20.24%;培养基中加入10μmol/L的硝酸银,花药组织褐化率较对照降低了70.59%,当浓度超过50μmol/L,褐化率增高,出愈率略有降低;不同基因型愈伤组织发生率明显不同,相同培养条件下,里格尔87-5的诱导率高达21.43%,而粉B二号的诱导率仅有0.46%;培养基中加入175g/L的马铃薯汁、0.1%的活性炭,6个材料的愈伤组织平均诱导率较对照分别降低了35.14%、95.48%.番茄花药愈伤组织在MS+6-BA 2mg/L+ZT 0.5mg/L+IAA 0.1mg/L培养基上可再分化成不定芽,不定芽诱导率达15.15%.     

根皮苷和GA3对南方红豆杉愈伤组织和细胞悬浮培养物生长的影响

在B5Ⅲ即B5＋2,4－D 3mg/L＋KT0．1mg/L phe0.1mol/L的培养基上附加0．5mg/L的根皮苷可以促进南方红豆杉愈伤组织的生长,在B5Ⅲ＋GA3（2．2－3．2mg/L),B5Ⅲ 根皮苷0．5mg/L最佳,对于附加不同浓度的GA3的培养基而言,最适应度为2．6mg/L。     

红豆杉细胞培养生产紫杉醇的研究进展

综述了近年来红豆杉细胞培养生产紫杉醇的研究进展, 包括红豆杉细胞培养生产紫杉醇的代谢调节、无机盐、植物生长调节因子、糖分及其它因素对红豆杉细胞生长和紫杉醇生产的影响等.着重介绍了前体饲喂、添加抑制剂和添加诱导子对红豆杉细胞生长及紫杉醇生产的影响.     

硅对南方红豆杉愈伤组织诱导及增殖培养的影响

以南方红豆杉叶片为外植体,进行愈伤组织诱导、增殖试验。在已经筛选出的最适诱导培养基中,添加不同浓度的硅进行诱导及增殖培养试验,以确定培养基中的最佳硅浓度。结果表明:适度增加硅浓度,可明显提高南方红豆杉愈伤组织的诱导和增殖,并能改善愈伤组织的生长状态,增加愈伤组织增殖生长量。     

紫杉醇生物合成与营养物质消耗的相关性

为利用现代生物技术生产紫杉醇,研究细胞悬浮培养过程中紫杉醇的生物合成,研究了细胞生长与培养液中主要营养物质的消耗情况。在Gamborg'sB5培养液中加入诱导子,对本实验室诱导筛选出的东北红豆杉B10细胞进行悬浮培养。结果发现,在诱导子的作用下,细胞内紫杉醇的含量在4d内大幅度提高,其中主要是促进了紫杉醇的两种前体化合物向紫杉醇的转化;细胞内高含量紫杉醇影响细胞的生长,可以采用两段培养法来提高紫杉醇的产量;同时,培养液中蔗糖、氮、磷、钾、镁等主要营养物质的消耗与紫杉醇的生物合成也存在密切的联系。     

雨生红球藻的培养及虾青素累积条件的探讨

探讨了雨生红球藻(Haematoccuspluvialis) 712株的适宜培养条件及藻体诱导累积虾青素的培养基条件.重点研究了温度、pH和光照条件对雨生红球藻营养生长的影响,以及NaNO3 、Fe2 + 盐和乙酸钠浓度对雨生红球藻诱导累积虾青素含量的影响.结果表明,2 4℃、10 0 0～15 0 0lx连续光照,pH8.0左右的生长条件适合雨生红球藻游动细胞增殖,使平均生长速率达到0 .2 5 2d-1.通过正交试验表明缺氮培养基对于雨生红球藻细胞累积虾青素最为有利,虾青素含量达到6 .72 μg·mL-1,而FeSO4和乙酸钠浓度对虾青素的累积无显著性的影响     

厚朴组织培养与高产细胞系建立的研究

对来自厚朴种源试验林的10个不同基因型材料开展组织培养和高产细胞系,结果表明：基本培养基、激素种类与配比、外植体的取材部位等因素对厚朴愈伤组织的诱导率、生化、褐化均有显影响。B5＋2，4-D 4mg/L NAA 1mg/L培养基的诱导率达到100％；而采用B5＋BA 1.0-2.0mg/L NAA 1.0MG/l的培养基，愈伤组织的增殖率最高，褐化率最低；140、54两个基因型的细胞增殖最快，是其它基因型细胞均值的2．12倍；不同的基因型、培养基、培养时间所产生愈伤组织细胞的厚朴酚类含量不同，以140基因型的细胞系在B5＋BA 2.0mg/L NAA 1.0mg/L的培养基上培养60d为最优。     

云南小叶种茶树叶片和茎段愈伤组织诱导及继代培养

为探究不同消毒方法对茶苗发芽率及消毒效果的影响,以云南小叶种茶树"十里香"种子为试验材料,采用种子萌发的无菌试管苗叶片及茎段为外植体,研究不同培养基类型、激素种类及浓度对愈伤组织诱导、增殖的影响。结果表明:4%次氯酸钠10 min+75%酒精30 s的消毒效果最好,污染率最低;叶片愈伤组织诱导培养基和叶片愈伤组织继代培养基的适宜配方均为B5培养基+0.5 mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)+0.1 mg/L激动素(KT);茎段愈伤组织诱导培养基和茎段愈伤组织继代培养基适宜配方均为MS培养基+1.5 mg/L 6-苄氨基嘌呤(6-BA)+0.2 mg/L萘乙酸(NAA)。研究结果为云南小叶种茶树组织培养及遗传转化体系的建立提供了科学依据。     

蝴蝶兰的离体培养与快繁技术研究

将蝴蝶兰花梗腋芽作为外植体,接种于添加不同浓度激素配比的MS培养基上进行离体培养。实验结果表明,不管是已开花的花梗还是未开花的花梗,其腋芽均能诱导产生不定芽,其适宜的培养基配方为MS 6-BA 5.0mg/L;利用诱导产生的不定芽的茎尖进行茎尖培养,可得到大量的原球茎状体,其适宜的培养基为MS 6-BA 3.0mg/L 10％椰乳 5％马铃薯,其诱导率为65％;原球茎状体进行增殖培养的适宜培养基为KC 5％椰乳 10％马铃薯,其增殖倍数为24.2。