毛白杨成熟叶片基因组DNA提取方法的比较研究

比较了4种毛白杨成熟叶片DNA的提取方法,结果表明,SDS法的提取效果优于CTAB法.其中,SDS-II法步骤较少,操作简便,不易造成实验误差,OD260/280值为1.87,提取的DNA片段长度在20kb左右,提取得率为42μg/g,为4种方法中最高.ISSR-PCR实验的效果表明,SDS-II法提取的DNA可以做为ISSR分子标记的模板DNA.     

一种直接用于PCR分析的风沙土微生物总DNA提取方法

以风沙土为材料,直接提取土壤微生物DNA.采用SDS—溶菌酶—CTAB—蛋白酶K和液氮反复冻融法裂解细胞得到DNA粗提液,以PEG对其纯化.结果表明,SDS—溶菌酶—CTAB—蛋白酶K和液氮反复冻融法裂解细胞可获得大片段的DNA,提高DNA产率.每克干土的DNA提取量为0.586～1.311μg.所提DNA片段在23Kb以上.PEG可有助于去除DNA中腐植酸,DNA不作回收纯化即可作为模板进行16SrDNAPCR扩增.SDS—溶菌酶—CTAB—蛋白酶K和液氮反复冻融裂解细胞、PEG纯化DNA的方法组合是一种简便的适合风沙土微生物总DNA的提取方法.     

细菌基因组DNA提取方法简化的研究

DNA提取是生物学领域最基础的操作,是科研和生产中常用的方法。但是液氮的使用、操作过程的繁琐限制了该技术乃至其他生命科学技术的推广和发展。本文研究了不同方法提取细菌DNA的效果,简少了DNA提取步骤,为核酸提取方法的简化提供了思路。     

建兰DNA的快速提取

用SDS高盐提取介质简便快速提取建兰(Cymbidiumensifolium)嫩叶DNA.提得的DNA分子大小约为48kb,A260/A280=1.77～1.86,DNA得率为每g鲜叶410～1145μg.提取的DNA无需经RNase处理,可直接用于限制性内切酶酶切和随机扩增多态DNA反应.     

高质量冬青卫矛DNA提取方法

为了从富含多酚和多糖的冬青卫矛叶片中分离高质量基因组DNA,比较了SDS法、CTAB法、高盐低pH值法及改良的CTAB法等提取DNA的方法,获得了一种以CTAB法为基础的分离高质量完整DNA的简便、快速方法。结果表明,使用该方法从冬青卫矛叶片中分离得到高纯度、高产量的DNA,A260/A280为1.84,1 g鲜叶的DNA产量为213.5μg,表明该方法可有效地从富含多酚和多糖的药用植物组织中提取高质量DNA。     

基于RAPD分析用的佛手DNA的提取

对佛手DNA提取过程从不同方面进行了改良、优化，筛选出较理想的佛手DNA提取方法：每eppen—dorf管鲜样品取量为0．1g～0．25g，700μL提取缓冲液，加提取液前用液氮研磨，Vc(抗坏血酸)添加量为ω(Vc／鲜样)=0．1．该方法分离出DNA的A260／A280大于1．9，符合佛手RAPD(随机扩增多态DNA)分析要求，在佛手遗传多态性分析和品种分子鉴定中具有良好的应用前景。     

适于转基因大白菜检测的DNA高效提取方法

介绍了一种简单、快速的DNA提取方法.该方法运用改装的自动螺丝批对经液氮冷冻的大白菜叶片快速研磨,并用本实验改良的CTAB法提取大白菜总DNA.只用氯仿/异戊醇抽提一次,不需RNase处理,就可以获得适于PCR检测的DNA,且PCR结果稳定,目的带清晰.     

一种快速制备毕赤酵母表达系统P CR鉴定模板DNA的方法

文章研究了简便高效获取毕赤酵母表达系统PCR鉴定模板DNA的提取方法,采用酶消化和物理冻熔结合的方法,提取的酵母基因组DNA直接PCR扩增检测质量。结果表明,该方法提取酵母基因组DNA具有质量高、成本低、耗时短、操作简单等优点。     

试剂盒法提取蓖麻基因组DNA的条件优化

利用DNA提取试剂盒提取蓖麻叶片DNA,对其过程进行改良优化,从而获得一种快速、简便的提取蓖麻高质量基因组DNA的方法.在原试剂盒的操作基础上,对乙醇是否冰预冷、消化时间、洗脱液用量、材料用量等条件进行了优化,并对所提取的基因组DNA的浓度、纯度进行了检测.优化后的方法提取到了较高质量的蓖麻基因组DNA.     

适用于SSR分析的半粒水稻干种子DNA快速提取

 为了寻找操作简便、耗时短、成本低,适用于简单重复序列(SSR)分析的水稻基因组DNA快速提取方法,以水稻沈农265的半粒干种子为材料,采用SDS提取液进行一步裂解,并将RNA去除操作融入抽提过程,SDS浓度为0.5%(W/V),水浴10min,氯仿/异戊醇抽提,简单快速地获得了高质量水稻基因组DNA。经琼脂糖凝胶电泳检测,DNA纯度较高,完整性较好,能够满足SSR扩增模板的需求。该方法可大大缩短水稻种子DNA提取时间,为SSR标记在水稻种子遗传多样性分析、分子标记辅助选择等方面的应用奠定基础。     

蚂蚁DNA提取方法的研究

针对不同体型的蚂蚁,提出了一套实用的总DNA提取方法.该方法依照虫体大小,分别采用冰冻固定后捣碎和剪刀剪碎两种方法破碎虫体,使材料利用充分,提高了提取效率.探讨了组织匀浆、DNA沉淀及溶解等实验中常见问题.结果表明,采用盐析法提取DNA,较传统的酚-氯仿抽提法简单、高效.     

酸苯酚萃取总RNA方法的改进

目前提取总ＲＮＡ普遍使用的是酸苯酚萃取法（或称硫氰酸胍法）．此法所提取的ＲＮＡ中存有少量基因组ＤＮＡ的污染．为了克服这一缺点,我们对酸苯酚提取ＲＮＡ的方法进行了改进．即先用酸苯酚萃取,然后用蛋白酶Ｋ消化,再次酸苯酚萃取．用改进的方法提取的ＲＮＡ无基因组ＤＮＡ的污染     

一种快速提取质粒DNA鉴别重组克隆的方法

依据快检缓冲液筛选重组子克隆的方法,结合碱裂解法提取质粒DNA的原理,经过试验摸索,应用了快检缓冲液直接裂解菌液,电泳后筛选重组质粒的方法,避免了提取质粒鉴定等繁琐步骤,其结果与菌液PCR、质粒酶切鉴定结果一致,可快速筛选出重组克隆.     

大草履虫总DNA的提取方法比较

快速而稳定地提取大草履虫的基因组DNA是进行后续分子生物学研究的前提.文章通过比较传统SDS法、CTABⅠ法和CTABⅡ法等提取大草履虫DNA的效果,进一步优化提取方法,获得快速稳定地提取大草履虫基因组DNA的方法.结果表明:用CTAB I法提取的DNA浓度低,杂质较多;CTABII提取的DNA电泳时检测不出条带;而SDS法提取的DNA在电泳时带型较整齐,无降解,且DNA的得率和纯度较高,但仍有蛋白质污染.针对蛋白质的去除,用SDS-蛋白酶K法和SDS-NaAc法来提取DNA,经过试验发现这2种方法都能够很好地去除蛋白质,所获DNA样品的纯度和得率都能用于进一步分子试验,而SDS-NaAc法更经济适用.     

体外培养瘤胃微生物总DNA的提取与纯化

主要目的是寻找一种能最大限度获取所有类型的瘤胃微生物大片段DNA的提取方法,为后期分子生物学技术研究瘤胃微生物奠定基础。采用液氮冻融+溶菌酶+CTAB和SDS相结合的方法处理瘤胃样品并充分破壁,再采用酚/氯仿/异戊醇抽提、异丙醇沉淀获得DNA粗提物,经过试剂盒纯化后得到瘤胃微生物DNA样品。经特异性引物PCR检测,本方法所提取的DNA包含细菌、古细菌、真菌及原虫四类微生物信息。因此,采用该方法提取的DNA可用于后期实时定量PCR或DGGE等研究。     

中国榛属植物DNA提取与SSR初步分析

为了探讨适合中国榛属植物基因组DNA的提取方法,分析榛属植物的遗传多样性,本实验以榛属植物的叶片为试材,通过对Doyle和Doyle方法的改良,摸索出适于中国榛属植物基因组DNA提取的方法,并以核酸产量、纯度、片断分布情况等指标来评价,获得高质量基因组DNA;同时应用4对欧榛SSR引物对中国榛属植物进行了跨种转移,并对具有商业潜力的平榛、毛榛和川榛3个种的遗传多样性进行了初步评价,4对引物从3个种的29个样本中扩增出33个等位基因,位点拥有的等位基因数量在6~12个之间,位点平均等位基因数为8.38.上述结果表明SSR是用于榛属种间育种、品种鉴定以及种间遗传图构建的有力工具.     

棉花DNA的提取及其SSR分子标记体系的建立

针对棉花富含酚类、多糖等次生物质的特点,建立了一种简便、快速的提取高纯度棉花基因组DNA的方法。同时建立了适合棉花SSR标记的体系和实验方案,并对所构建的QTL定位群体进行了SSR-PCR检测,得到了清晰的多态性SSR标记,为SSR分子标记技术在棉花育种中的应用打下了基础。     

红碱淖遗鸥血液基因组DNA提取方法的比较研究

采用酚-氯仿法和改良Miller盐析法从红碱淖遗鸥冷冻血液样品中提取基因组DNA,以筛选遗鸥冷冻血液DNA的最佳提取方法.结果显示：酚-氯仿法琼脂糖凝胶电泳DNA样品亮度和清晰度较高,条带较粗,纯度较高;而改良Miller盐析法提取基因组DNA,获得率较低,并且难以去除杂质;酚-氯仿法提取时,酶解16 h比酶解10 h的DNA提取效果好,说明在一定时间范围内,延长酶解时间可有效地提高DNA提取效果.上述结果提示,酚-氯仿法对遗鸥冷冻血液基因组DNA提取的效果优于改良Miller盐析法.     

红壤中微生物总DNA的分离与纯化

采用2种不同的土壤DNA直接提取方法,提取了4种不同类型红壤的微生物总DNA,并对提取的DNA用Sephadex G-200离心层析法进行了纯化。结果表明:2种方法都可以从红壤中提取到分子量大于10kb的DNA的片段,不同提取方法获得的DNA的产量存在较大差异。方法二用冻融进行预处理再结合SDS和溶菌酶的化学裂解方法,是效果较好的DNA抽提方法。其提取DNA产量高,重复性好,适合于土壤少量样品的DNA提取。Sephadex G-200离心层析法能较好地去除土壤中的有机物杂质,DNA溶液由原来的黄褐色变得澄清透明,且不会使提取的DNA断裂或损失,是一种较好的土壤微生物总DNA纯化方法。