克氏原螯虾外部形态和各器官系统的解剖

本文研究了克氏原螯虾外部形态和内部解剖结构,为甲壳动物学实验提供指导．     

克氏原螯虾受精卵结构观察

观察了克氏原螯虾受精卵的结构.取固定好的克氏原螯虾受精卵进行冷冻切片,苏木精-伊红染色,镜检,拍照.结果表明,克氏原螯虾受精卵属于中黄卵,细胞质被排挤到受精卵一侧,位于受精卵表面.受精卵有致密的中心区,由此向周围发散出呈指状突起的卵黄柱,卵黄柱内充满大小不等的卵黄颗粒.克氏原螯虾受精卵的结构可以通过冷冻切片观察.     

克氏原螯虾营养与饲料的研究进展

克氏原螯虾(Procambarus clarkii)是我国重要的水产养殖品种之一,具有较高的经济价值和营养价值。综述近几年克氏原螯虾蛋白质、脂质、维生素、微量元素等营养素需求及饲料开发研究进展,为全面、深入开展克氏原螯虾营养需求研究,高效环保饲料开发及其产业化提供重要的科学依据。     

克氏原螯虾生态法工厂化繁育生产技术规程

充分利用自然生态资源,开展克氏原螯虾工厂化繁育研究。研究规定了克氏原螯虾工厂化繁育的产地环境条件、亲虾选择要求、亲虾选配和暂养、稚虾孵化、稚虾培育、虾苗捕获和运输等要点。     

3种中草药对克氏原螯虾抗菌活性的影响

将陈皮、甘草、淫羊藿3种中草药粉碎过筛后,再用醇提法分别提取其有效成分,将其制备出的浓缩液按质量分数5%的比例添加于基础饲料中制成颗粒药饵投喂克氏原螯虾,以基础饲料为对照组,研究3种中草药对克氏原螯虾抗菌活性的影响。结果表明,3种中草药能有效地抑制大肠杆菌、嗜水气单胞菌、金黄色葡萄球菌、溶壁微球菌。其中,甘草、成皮和淫羊藿对4种细菌的平均抑菌率达到59.14%、47.53%和48.65%。实验证明,甘草、陈皮和淫羊藿这3种中草药均能不同程度地激活克氏原螯虾的免疫力,可以作为免疫增强剂应用于克氏原螯虾的生产。     

水体中吡啶对克氏原螯虾触角电位影响

运用电生理学方法,观察吡啶对克氏原螯虾(Procambaras clarkii)触角电位(antennary potential)的影响.实验结果表明:吡啶对克氏原螯虾的触角电位发放有明显的抑制作用,使电位时程和幅值降低,时相性电位减少渐至消失,放电频率下降.触角电位受抑制的程度随吡啶浓度升高而增大.从表示触角电位发放频率变化与时间关系的直线回归方程可知,其b值大小与吡啶浓度有关,吡啶浓度越大,b值则越小.吡啶对克氏原螯虾的触角电位的抑制作用与螯虾的体重有关,而与螯虾的性别无关.     

克氏原螯虾不同组织微量金属元素富集能力研究

采用微波消解-原子吸收法作为分析手段,对克氏原螯虾的肌肉、内脏、鳃3个部位的3种微量金属元素含量进行测定,分析研究了克氏原螯虾不同部位对微量金属元素的富集能力的差异。结果表明:肌肉对Mg的富集能力最大,内脏对Mn的富集能力最大,鳃对Cu的富集能力最大。本研究为合理开发克氏原螯虾的食用功能提供了科学依据。     

克氏原螯虾8种代谢物对其引诱效果研究

克氏原螯虾Procambarus clarkii能够识别水中信息素进行求偶，明确其信息素的有效组分能为克氏原螯虾绿色治理提供理论依据。本文采用Y型水迷宫测试鸟苷-5′-单磷酸二钠、鸟苷-5′-二磷酸二钠、鸟苷-5′-三磷酸二钠、N-乙酰-L-亮氨酸、己酸孕酮、乙炔雌二醇、胆红素和4-巯基尿苷等8种化合物对克氏原螯虾选择行为的影响，筛选具有引诱作用的乙炔雌二醇和己酸孕酮进行浓度测试。结果表明：雄性克氏原螯虾对4-巯基尿苷、胆红素、N-乙酰-L-亮氨酸、鸟苷-5′-三磷酸二钠、鸟苷-5′-二磷酸二钠、鸟苷-5′-单磷酸二钠的选择反应率接近50%,选择系数在±0.15之间，引诱效果不显著(P>0.05);对乙炔雌二醇和己酸孕酮选择反应率高，分别为64.10%、63.24%,选择系数为0.28、0.26,且表现出性别上的显著差异。对雄虾，乙炔雌二醇的最低有效引诱阈值是10μmol/L,己酸孕酮的最低有效引诱阈值是100μmol/L,而雌虾对这2种化合物不敏感。因此，己酸孕酮和乙炔雌二醇对雄性克氏原螯虾具有明显的引诱效果，却对雌鳌虾无明显反应，表明己酸孕酮和乙炔雌二醇是克氏原螯虾性信息素的...     

克氏原螯虾在洞穴和角落生境下生长差异及生存策略分析

为研究克氏原螯虾在不同庇护所生境下的生长差异及其采取的不同生存策略,本实验在水池中设置洞穴、角落2种庇护所生境,并以无任何庇护所的水池为对照,饲养亚成体克氏原螯虾一个月.计算各组克氏原螯虾存活、生长的参数及耗饵量、转化率等摄食参数.实验结果表明,存活率指标以洞穴组最高,为84.0%,对照组最小,为22.0%;群体增重、...     

已交配雌性克氏原螯虾的择偶行为

动物在繁殖期间会随自身繁殖状态的变化而调整择偶行为,这会导致它们择偶的多样性.本文研究具交配经验的雌性克氏原螯虾(Procambarus clarkii)在Y型水迷宫中对不同婚配状态的潜在配偶的择偶行为.雌虾对空白与原配、童子、非童子3种信息源虾的访问总时间P值均小于0.05,结果表明雌性克氏原螯虾与原交配雄体有再次交配的显著倾向,对该现象本文从螯虾繁殖成功率方面进行了探讨;面对3种信息源虾的选择差异性的P值均大于0.05,表明雌虾不区分潜在配偶的婚配状态,本文就螯虾的择偶偏好进行了讨论,此外对螯虾定向配种方面的应用进行了初步探讨.本研究以期为克氏原螯虾的繁殖行为学的理论研究及生产实践积累具参考意义的基础数据.     

克氏原螯虾主要动脉血管组织学的比较研究

用石蜡切片技术对克氏原螯虾主要动脉血管进行了组织学的比较研究。结果表明，克氏原螯虾主要动脉血管可依组织学结构的不同而分为二类，第一类血管包括胸直动、胸下动脉、腹下动脉、肝动脉前侧动脉，其管壁由内而外分别为基板、细胞层和结缔组织层，基板和结缔组织内皆具有弹性纤维或类似弹性纤维物质，第二类血管为腹上动脉，其管壁由内而外分别为基板、肌肉层、混合在微纤丝内的细胞层、一层弹性纤维、第二细胞层、第二层弹性纤维     

水温、光周期和饲料对克氏原螯虾雌虾成活和性腺发育的影响

采用正交设计法,探讨了水温、光周期和饲料组成3个因素对克氏原螯虾雌虾成活和性腺发育的影响,以期为人工繁殖提供理论指导.结果表明,各因素对克氏原螯虾雌虾成活率的影响大小为:水温饲料组成光周期,其最优水平分别为:水温22℃、光照周期16L: 8D、饲料为纯草鱼肉.以性腺成熟系数为指标,3个因素对雌虾性腺发育的影响大小为:饲料组成水温光周期,其最优水平分别为:饲料为纯草鱼肉、水温28℃、光照周期16L : 8D.根据本实验结果,综合考虑成活率和性腺发育情况,克氏原螯虾的亲虾培育可选择水温25～28℃之间、光照周期16L : 8D.饲料中多添加鱼肉等动物性饲料.同时还应注意减小饲养密度,以免发生同类残食的事件.     

检测克氏原螯虾白斑综合征病毒(WSSV)的巢式PCR方法的建立与初步应用

根据GenBank中已发表的3株WSSV的VP28基因序列,设计了4条特异性引物．通过筛选最佳反应条件和试剂工作浓度,建立了检测克氏原螯虾WSSV的巢式PCR方法．该方法第一轮扩增的敏感性是36ng,第二轮扩增的敏感性是36Pg．在对9份克氏原螯虾临床病料的巢式PCR检测中,用引物W1和W2做第一轮扩增,未检测到阳性病例;用引物S1和S2做第二轮扩增,检测到一例WSSV阳性病例．以上结果表明：对于检测克氏原螯虾WSSV,巢式PCR较一步PCR具有更高的检测灵敏度和应用前景．     

克氏原螯虾触角腺的组织学研究

本文利用石蜡切片技术对克氏原螯虾触角腺进行了组织学研究，结果表明，克氏原螯虾触角腺可分为端囊、迷路和肾管三部分，端囊部分的细胞呈柱状，细胞核位于基部；迷路部分细胞也呈柱状，其顶端具刷状缘，核位于细胞的基部或中部，迷路部分可分为二个亚区；肾管部分的细胞呈柱状或较为扁平，核位于细胞的中部或靠近细胞顶端，肾管部分可分为三个不同亚区。     

红螯螯虾的病害及其防治技术

］红螯螯虾（Cherax quadricarinatus)自20世纪90年代引进中国,已在中国多个省份养殖成功,成为中国的新兴淡水养殖种类,近年发展迅速。随着养殖规模的扩大和养殖密度的不断提高,病害问题逐渐显现。红螯螯虾的疾病主要由病原引起,营养缺乏和水质不良也会引起疾病。已报道的红螯螯虾的病原生物包括病毒、细菌、真菌、立克次氏体、原生动物和后生动物等。红螯螯虾对许多病原敏感,但尚未发现广泛传播的流行性疾病。对红螯螯虾病害的种类、危害和防治方法进行了较系统的介绍,可为红螯螯虾的养殖提供参考。     

克氏原螯虾原肌球蛋白的纯化及过敏原性分析

以13份甲壳类动物过敏患者血清的Western—blotting分析,确定克氏原螯虾主要过敏原为36ku蛋白质．通过盐析、等电点沉淀及热处理等方法纯化该蛋白质,以兔抗拟穴青蟹原肌球蛋白（Tropo-myosin,TM）多克隆抗体的Western—blotting分析,确定该蛋白质为TM．同源性分析表明,克氏原螯虾TM与南美白对虾TM、拟穴青蟹的氨基酸序列相似性较高（〉90％）．酶切位点预测显示,它分别有49个胰蛋白酶和6个胰凝乳蛋白酶的酶切位点．模拟胃肠液消化实验结果显示,纯化TM不易被胃蛋白酶降解,易于被胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶降解,进一步的Western—blotting和抑制性ELISA分析结果显示,其消化产物仍具有一定的免疫活性．采用蒸煮处理可降低TM的消化稳定性及免疫活性,且蒸煮处理时间越长,效果越显著．说明。TM为克氏原螯虾主要过敏原．与其他甲壳娄动物TM的序列相似件较高．     

温度和光照对克氏原螯虾生物钟基因PcClk与PcCry1表达的影响

生物钟基因clock(Clk)和cryptochrome(Cry)参与生物内在节律调控。克氏原螯虾(Procambarus clarbii)是我国重要的水产养殖经济虾类,为探究温度、光照对克氏原螯虾生长及其生物钟基因PcClk与PcCry1节律振荡表达的影响,采用实时定量PCR技术探讨克氏原螯虾PcClk和PcCry1基因在脑、眼柄和肝胰腺组织中的mRNA表达模式,并探讨PcClk和PcCry1基因在温度和光照周期适应过程中是否发生适应性进化。荧光定量PCR检测结果显示,克氏原螯虾的PcClk基因和PcCry1基因在脑、眼柄和肝胰腺中均有表达。在不同光照周期培养下,PcClk基因和PcCry1基因在脑、眼柄中的mRNA表达有一定的振荡节律,在25℃、12 LD的培养模式下,脑中PcClk基因和PcCry1基因mRNA表达的节律性会更明显。选择压力分析显示,经PAML和Datamonkey共同筛选出的PcCLK正选择位点为71与213,PcCRY1正选择位点为63。以上结果表明,克氏原螯虾生物钟基因PcClk和PcCry1受到了选择压力,克氏原螯虾PcClk基因和PcCry1基因是内源性的节律基因。     

克氏原螯虾(Procambius clarkii)卵黄蛋白的部分生化性质

通过电泳回收的方法对克氏原螯虾(Procambius clarkii)的卵黄蛋白进行了纯化,鉴定结果显示总分子质量为481 ku,具有6个亚基(198,176,132,111,92,82 ku);染色分析表明该蛋白是一种糖脂磷类胡萝卜素蛋白,亚基之间有1个二硫键交联.     

饲料中钙磷水平对克氏原螯虾生长、营养物质表观消化率和水环境的影响

采用3×2两因子设计研究饲料中钙（3个水平分别为1.5%、2.0%、2.5%）磷（2个水平分别为1.0%、1.5%）水平对克氏原螯虾生长、营养物质表观消化率和水体环境的影响。结果表明,钙磷水平对克氏原螯虾的增重率和干物质的表观消化率无显著影响;钙和磷的表观消化率分别随饲料中钙和磷水平的升高而升高,磷的表观消化率随钙水平的升高而降低;随钙磷水平的提高,粪便和水体中的钙磷含量增加,加大了水体污染,因此钙添加水平1.5%,磷添加水平为1.0%时达到了最佳效果。     

克氏原螯虾主要变应原原肌球蛋白的一个片段区基因的克隆表达、纯化及免疫原性鉴定

克隆克氏原螯虾主要过敏原原肌球蛋白的一个片段区基因,表达并纯化该蛋白,检测其免疫原性.提取克氏原螯虾总RNA,设计特异性引物,RT-PCR克隆得到目的基因;将目的基因连入pMD19-T载体,提质粒酶切鉴定并测序;将测序正确的片段连入原核表达载体pET-32a(+)上,并转入BL21(DE3)宿主表达菌中;IPTG诱导表达;通过Ni2+亲和层析(FPLC)纯化目的蛋白;利用Western-blotting和ELISA检测该重组蛋白的免疫原性.克隆获得目的基因,其片段长为291 bp,编码97个氨基酸.重组蛋白纯化后经SDS-PAGE鉴定,目的蛋白大小与理论值相符.Western-blotting和ELISA结果表明该蛋白与克氏原螯虾过敏病人混合血清中IgE结合,具有免疫原性.